锌试剂分光光度法测定壳聚糖含量

1、锌试剂分光光度法测定壳聚糖含量高贵珍1,2丁黎华1焦庆才31丁一磊1陈雷11(南京大学生命科学学院药物生物技术国家重点实验室,南京2100932(宿州师范专科学校化生系,宿州234000摘要利用锌试剂与壳聚糖在一定酸度条件下的特异性显色反应,即其复合物在465nm 处吸光度与壳聚糖含量在00.04g L 范围内呈现良好的线性关系(R =0.996,基于此建立了一种简便快速的分光光度法。平均回收率为99.68%。关键词分光光度法,壳聚糖,锌试剂2002211213收稿;2003203224接受1引言壳聚糖及其衍生物是重要的生物活性物质,具有抗肿瘤、抗血栓、降血脂和增强免疫力等功能15。但到目前为

2、止,壳聚糖含量的测定仍然采用烦琐的酸水解间接比色法3。锌试剂是一种用于金属离子和蛋白质6的分析试剂,作为多糖分析试剂的研究,目前尚未见报道。本文利用锌试剂与壳聚糖在一定酸度条件下的特异性显色反应,其复合物在465nm 处吸光值的变化与壳聚糖含量成线性关系的特点,建立了一种具有高选择性和高灵敏度的简便快速的分光光度法。采用该方法可以测定不同复杂样品中微量的壳聚糖含量。2实验部分2.1仪器与试剂UV 23000紫外分光光度计(日本日立公司;PHS 2P 型酸度计(上海大中分析仪器厂。壳聚糖对照品(Chitosan ,纯度95%,脱乙酰度78%,浙江玉环海洋生物化工厂;壳聚糖原料(南京克里斯公司,脱

3、乙酰度78%;艾兰得牌康心保健胶囊(江苏江山制药有限公司,脱乙酰度70%80%;锌试剂(Z incon ,分析纯,上海试剂三厂;其它试剂均为分析纯或优级纯。2.2实验方法在一系列试管中,依次分别加入锌试剂、NaAc 2H Ac 缓冲溶液、壳聚糖和其它试剂,用蒸馏水定容摇匀。以蒸馏水为参比扫描380680nm 间的吸收光谱或在给定波长下测量吸光值。3结果与讨论3.1吸收光谱曲线从图1可见,没有壳聚糖时,仅在465nm 处有吸收峰;当壳聚糖加入后,随浓度的增加,反应体系在465nm 处的吸收峰逐渐降低;当浓度大于10mg L 时,在600nm 处出现新的吸收峰,并随浓度的增加而升高。可见,465n

4、m 处吸收峰的降低和600nm 处吸收峰的升高与壳聚糖浓度成线性关系。据此,可以建立测定壳聚糖含量的方法。3.2反应条件的确定3.2.1测定波长的选择从图1可以看出,465nm 处进行分析测定的灵敏度要比在600nm 处高,因此,含量测定波长选定在465nm 处。3.2.2pH 值和缓冲体系的选择经考察,反应体系pH 值在4.25.0范围内,465nm 和600nm 的吸光值比较稳定。由于锌试剂在pH 4.2左右时能与蛋白质发生变色反应,pH 5.0时两者基本不发生变色反应。为避免干扰,选择能够溶解壳聚糖的弱酸性NaAc 2H Ac 缓冲溶液pH 5.0,保持显色反应体系。第31卷2003年1

5、2月分析化学(FE NXI H UAX UE 研究简报Chinese Journal of Analytical Chemistry 第12期14791481图1不同壳聚糖浓度下的锌试剂2壳聚糖复合物吸收光谱Fig.1Abs orption spectra of zincon 2chitosan complexes in different chitosan concentrations 锌试剂浓度(zincon concentration :0.833×10-4m ol L ,pH 5.0;壳聚糖浓度(chitosan concentration :1.0;2.0.003;3.01

6、0100;4.0.0167;5.0.0233;6.0.0300;7.0.0375g L 。3.2.3反应时间和稳定性实验在pH 5.0的NaAc 2H Ac 缓冲体系中,室温下考察反应时间对锌试剂2壳聚糖复合物稳定性的影响,结果表明:该体系反应迅速,15min 后反应趋于稳定,2h 内其吸光值变化不大。3.2.4锌试剂浓度和工作曲线线性范围的选定在一系列试管中逐渐增加壳聚糖对照品的浓度,分别加入不同浓度的锌试剂,测定其465nm 处的吸光值。结果表明:当锌试剂浓度为0.833×10-4m ol L 时(465nm =3.65×103L cm -1m ol -1,灵敏度和线性

7、范围比较好,因此,选择锌试剂浓度为0.833×10-4m ol L 。壳聚糖在00.04g L 的范围内,吸光值与壳聚糖含量均有良好的线性关系,工作曲线方程为:y =1.0525-11.2967x ,R =-0.9956。y 为465nm处的吸光值,x 为待测溶液壳聚糖浓度(g L 。3.3干扰因素在反应体系中添加不同干扰试剂,观察其对锌试剂2壳聚糖复合物吸光值的影响。BS A (1.87×10-7m ol L 、葡萄糖(1×10-2m ol L 、蔗糖(1×10-2m ol L 、麦芽糊精(0.3%、可溶性淀粉(0.4%及Zn 2+(10mg L 对反

8、应体系基本没有影响;而乙醇(3.167%、S DS (1×10-3m ol L 、C MC (0.3%、Fe 2+(10mg L 和Cu 2+(10mg L 对反应体系有一定的影响;另外,壳聚糖脱乙酰度对壳聚糖含量的分析有影响。3.4回收率称取1.4213g 康心胶囊水溶,过滤,烘干不溶物,从中称取0.05g 样品,溶于50m L 1%醋酸溶液配成样品贮液,取0.5m L 样品贮液稀释至50m L 配成0.01g L 的待测溶液。准确吸取1m L 按实验方法测465nm 处的吸光值。在含有壳聚糖的样品溶液中,投入0.25g 壳聚糖对照品,测定加壳聚糖对照品前后溶液中壳聚糖的含量,计算

9、回收率7,结果列于表1。3.5不同样品中壳聚糖含量的测定称取1.3354g 康心胶囊粉末和0.05g 壳聚糖原料,其余操作步骤同回收率中壳聚糖含量的测定项。结果见表2。表1回收率测定T able 1Results of recovery tests测定次数Number0.2490±0.006回收率(%Recoveryn =5表2不同样品中壳聚糖含量测定结果T able 2Results of CS quantities in different sam ples 样品Sam ples 平均含量3(g Average content49.91±1.15原料Raw materi

10、al 0.0505±0.0004101.10±1.03n =5R eferences1Wang X iaohong (王小红,Ma Jianbiao (马健标,He Binglin (何炳林.J .Functional Polymer s (功能高分子学报,1999,12(2:1972022Jiang T ingda (蒋挺大.Chitosan (壳聚糖.Beijing (北京:Chemical Industry Press (化学工业出版社,2001:8133Zhang Weijie (张惟杰.Biochemical Research Technology o f Com

11、plex Carbohydrates (Second Edition (糖复合物生化研究技术,第二版.Zhejiang (浙江:Zhejiang University Press (浙江大学出版社,1994:23304Du Y umin (杜予民.Journal o f Wuhan Univer sity (Natural Science (武汉大学学报,自然科学版,2000,46(2:1811865Zhang T ianhong (张天鸿.China Food Additives (中国食品添加剂,2000,2:37486Chi Y anhua (迟燕华,Li Na (李娜,Zhuang J

12、ia (庄稼,Li K ean (李克安,T ong Shenyang (童沈阳.Chemical Journal0841分析化学第31卷o f Chinese Univer sities (高等学校化学学报,1998,19(6:8798817Liu Shaopu (刘绍璞,Xu H ong (徐红,Luo H ongqun (罗红群.Chinese J .Anal .Chem .(分析化学,2002,30(6:712715Spectrophotometric Determination of Chitosan with Zincon 2Chitosan R eactionG ao G uiz

13、hen1,2,Ding Lihua 1,Jiao Qingcai 31,Ding Y ilei 1,Chen Lei 11(Pharmaceutic Biotechnology K ey Laboratory ,College o f Life Science ,Nanjing Univer sity ,Nanjing 2100932(Department o f Biochemistry ,Suzhou Teacher s College ,Suzhou 234000Abstract A sim ple and rapid spectrophotometric method was prop

14、osed for the determination of chitosan.The method is based on the abs orbances of zincon 2chitosan com plex at 465nm being in proportion to chitosan concentrations.The linear range is 00.04g L (R =0.996,and the mean recovery is 99.7%.K eyw ords S pectrophotometry ,chitosan ,zincon(Received 13N ovemb

15、er 2002;accepted 24M arch 2003第二届国际传感器科学研讨会(I3S2004(第一轮通知传感器科学是近年来不断高涨的热门和前沿研究领域,涉及多学科的交叉和自然科学的多个领域,目前正处在高速发展的阶段。有关传感器科学方面的国际交流十分频繁,2003年SE NS ORS 杂志(SCI 刊物和瑞士M olecular Diversity Preservation International (M DPI 出版社以电化学传感器、光学传感器、生物传感器、纳米传感器、质量传感器、热传感器等研究领域和它们在医学、食品、环境等方面的应用为主题在巴黎召开了“第一届国际传感器科学研讨会(

16、I3S ”,有约100名国际学者与会,包括N obel 奖获得者R obert F.Curl 教授,E lectroanalysis 主编J.Wang 教授等数十位国际著名科学家。“第二届国际传感器科学研讨会(I3S2004”决定由SE NS ORS 杂志、M DPI 出版社、国家自然科学基金委和中国化学会联合主办,南京大学承办,于2004年5月29日6月3日在南京举行,由陈洪渊院士任大会主席。本届会议将涉及传感器科学中最活跃和前沿的研究方向,展示相关研究领域的最新研究进展和成果,开展上述主题研究与开发的各国科学家之间的学术交流。届时将有多位国际著名学者应邀在本届会议上作特邀报告,以促进传感器科学及相关学科的发展。I3S2004大会组委会热忱欢迎全国各大专院校、科研院所和相关研究领域的科研工作者以及相关企业踊跃投稿和莅临本届盛会。欲参加会议的学者请提交未正式发表的英文论文摘要一份(电子版,摘要共两页,格式参照BCEI A 会议要求(该格式可用E mail 向组委会索要,递交摘要的截止时间为2004年2月28日。会议部分论文将在SE NS ORS 刊物上正式发表,递交论文全文(电子版的截止时间为2004年5月29