口腔颌面部恶性肿瘤化疗药物敏感性临床分析

1、    口腔颌面部恶性肿瘤化疗药物敏感性临床分析        摘要：目的恶性肿瘤化疗的一个最大问题是肿瘤对化疗药物的耐药性。MTT肿瘤药敏检测是一种定量比色体外药敏测定方法。本研究的目的是初步评价MTT药敏检测结果对指导口腔肿瘤个体化化疗的临床意义。方法应用30例口腔颌面外科手术或活检的恶性肿瘤标本，进行常规MTT药敏检测，同时将检测结果与临床资料进行对比性分析。检测药物共有6种：DDP、5-Fu、VDS、MTX、E-ADM、PYM。结果(1) 病变部位以舌部为主，占30%

2、，药物敏感性与肿瘤部位有关；(2) 检测30例口腔颌面部恶性肿瘤组织的药敏性，所得结果与临床资料进行分析。8例采用传统经验用药方案进行化，其疗效与MTT法检测的药敏结果一致；(3) 大部分肿瘤对DDP、5-Fu有中度以上敏感性，但也有少部分存着抗DDP、5-Fu现象，这也是临床上采用传统经验用药方案，有些肿瘤化疗效果不理想的原因之一。结论通过肿瘤药敏检测，找出对恶性肿瘤有效的化疗药物组成联合用药方案，可以做到化疗方案的个体化，进而提高疗效。关键词：口腔癌；药物敏感性；化学治疗中分类号：739.8文献标识码：A文章编号：1005-4979(2000)02-0134-04 CLINICAL ANA

3、LYSIS OF CHEMOSENSITIVITIESOF ORAL AND MAXILLOFACIAL CANCERSZHOU Xiao-jing, CHEN Wang-tao, LIN Li-song, et alDept. of Oral & Maxillofacial Surgery, School of Stomatology, Shanghai Second Medical UniversityAbstract： ObjectiveA major problem associated with chemotherapy for cancers is drug-resista

4、nce. The MTT assay is a quantitative colorimetric system for the determination of the chemosensitivity of tumor cells in vitro. The aim of the present study is to evaluated the clinical significance of chemosensitivity testing on cells culture from fresh specimens for individual chemotherapy. Method

5、sThirty patients with oral and maxillofacial cancers were entered in this study. The samples which obtained from surgical and biopsical specimens were examined using MTT method, and climical data and chemosensitivity were analyzed and compared. The antitumor drugs tested were cisplation (DDP), 5-Flu

6、orouracial (5-Fu), Vindesine (VDS), Methortrexatum (MTX), Pyromycin (PYM), Epi-adriamycinum (E-ADM).Results(1) The most common lesion was tongue, accouting for 30%, (2) 8 patients were treated with conventional chemotherapy, and the clinic outcomes were similar to results of chemosensitivity tesing

7、using MTT assay; (3) Most of cancers showed the chemosensitivity to DDP、5-Fu, but some cancers still were resistanted to DDP、5-Fu. this was the one of causes of poor chemotherapeutic effect to some cancers.ConclusionChemosensitivity testing using MTT assay appeared to be useful in selecting chemothe

8、rapeutic agents for patients with oral and maixllofacial cancers. This assay might be useful on an individual basis to optimize chemotherapy.Key words： oral cancer; chemosensitivity; chemotherapy口腔颌面部中、晚期恶性肿瘤必须采用综合性治疗，才能取得较好的治疗效果。化疗是综合治疗主要手段之一，治疗方案的选择是化疗成败的关键1；而有效的化疗方案确定取决于对肿瘤敏感性药物的选择和应用。应用MTT方法对肿瘤药

9、物敏感性检测，为敏感药物选择提供了条件。本文对30例口腔颌面部恶性肿瘤组织标本的药物敏感性测试结果与其临床资料进行分析，希望对口腔颌面部恶性肿瘤化疗方案制定提供有效参考。1材料与方法1.1材料1.1.1组织标本30例口腔颌面部恶性肿瘤组织新鲜标本来自我院1999年6月1999年11月手术和活检组织标本，所有病例均有明确的病理诊断。1.1.2药敏检测选用药物顺铂(DDP)齐鲁制药厂，氨甲喋呤(MTX)上海华联制药厂，氟脲嘧啶(5-Fu)旭东海普药业，长春地辛(VDS)杭州民生药厂，平阳霉素(BYM)天津太河制药厂，表阿霉素(E-ADM)深圳万乐药厂。1.1.3试剂MTT四甲基偶氮唑蓝，3-(4,

10、5-dimthy-2-2 thiazoly)2,5-dipheny-2H-tetrazoliun bromide；DNA酶、胶原酶、透明质酸酶、RPHI-1640培养剂均购自GIBCO试剂公司。1.1.4设备材料PG3022酶联免疫检测仪(中国人民解放军第四军医大学国营华东电子管厂联合研制，波长570nm,参数波长450nm)；96孔培养板(Corning公司)。1.2MTT药物检测方法采用MTT assay2并作以下修改：(1) 将组织标本用PBS(含丁胺卡那霉素200u/ml、青霉素500u/ml)浸泡20min后，胶原酶2mg/ml、DNA酶0.4mg/ml、透明质酸酶0.017mg/m

11、l消化40min，200目滤网收集细胞，PBS洗一次。(2) 取96孔板每孔加200l细胞悬液每四孔为一组，设对照组及各药物组。(3) 培养板置37°C含5%CO2湿度培养24h后，加入实验药物(10倍的血浆浓度)于培养孔中，继续培养48h。(4) 每孔加MTT试剂(5mg/ml)20l，再于37°C CO2培养箱中培养4h以上。(5) 离心(2000r/min)5min，吸除上清液，加200l DMSO以终止反应及溶解甲?FDA3?结晶。(6) PG3022酶联免疫检测仪波长450nm测OD值。(7) 肿瘤细胞生长抑制率计算公式：肿瘤细胞生长抑制率=(1-A/B)

12、5;100%A=试验孔平均OD值B=对照孔平均OD值(8) 药物敏感性判断标准敏感：细胞生长抑制率>70%，中度敏感：细胞生长抑制率>50%，低度敏感：细胞生长抑制率30%，不敏感：细胞生长抑制率<30%。2结果2.1标本来源30例病人选自1999年6月1999年11月我科收治的口腔颌面部恶性肿瘤住院患者。年龄范围1380岁，平均52岁，男女之比1.21。肿瘤原发部位以舌部最多见，占30%；牙龈占23%、颊部占20%；上颌窦、腭部、颧部、颞下凹等部位共占27%；发病部位与化疗药物敏感性关系见表1。2.2术前化疗患者的术后标本对的化疗药物敏感的检测施行术前化疗病人8例，采用VM

13、化疗方案治疗6例，其中5例病理诊断为鳞状细胞癌，1例恶性多形性腺癌。1例用5-Fu单药化疗；另外1例用MTX+DDP联合化疗，治疗结果，自觉疼痛缓解，但临床疗效不明显。术前化疗6例病人的术后标本的化疗药物敏感检测结果见表2。表1鳞癌3种发病部位对6种抗肿瘤药物敏感性化疗药物敏感性舌部(%)颊部(%)牙龈(%)DDP敏感02040中度敏感04040低度敏感22.200不敏感77.840205-Fu敏感02020中度敏感04020低度敏感000不敏感1004060PYM敏感0020中度敏感0400低度敏感02040不敏感1004040VDS敏感000中度敏感11.100低度敏感0200不敏感88.

14、980100MTX敏感0020中度敏感04020低度敏感11.100不敏感88.96060E-ADM敏感000中度敏感11.100低度敏感000不敏感88.8100100表2化疗后病例药物敏感检测结果(例)敏感性药物DDPMTX5FuPYMVDSE-ADM敏感1中度敏感32低度敏感112不敏感378668表3原发性与复发性肿瘤对6种抗癌药物敏感性化疗药物敏感性原发肿瘤(%)复发肿瘤(%)DDP敏感833.3中度敏感5016低度敏感833.3不敏感3417.45-Fu敏感816中度敏感1616低度敏感80不敏感6868PYM敏感016中度敏感160低度敏感1616不敏感6868VDS敏感00中度

15、敏感1616低度敏感80不敏感7684MTX敏感00中度敏感160低度敏感1616不敏感6884E-ADM敏感00中度敏感816低度敏感00不敏感91842.3原发性与复发性肿瘤对抗肿瘤药物的敏感性本组病例病程自发病至确诊时间最短3月余，最长2年余，绝大多数的36个月；肿瘤大小1cm×16cm×4cm大小不等；30例病人中，21例为原发性肿瘤，复发肿瘤9例，原发性与复发性肿瘤对6种抗肿瘤药物的敏感性关系见表3，其TNM分类与化疗药物敏感性关系见表4。2.4肿瘤病理类型与药物敏感性关系本组病例鳞状细胞癌级20例，级1例。腺样囊性癌5例，粘液表皮样癌2例，肉瘤2例。3讨论口腔颌

16、面部恶性肿瘤的化学治疗是综合治疗手段之一，对化疗药物的选择直接影响疗效，我们对30例口腔颌面部恶性肿瘤组织标本采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法进行了药物敏感性检测，进一步将其药物敏感性与临床资料间关系进行了分析研究。表4临床分期与化疗敏感性关系(例)化疗药物敏感性T1T2期肿瘤(例)T3T4期肿瘤(例)DDP敏感02中度敏感23低度敏感10不敏感545-Fu敏感02中度敏感01低度敏感10不敏感76PYM敏感01中度敏感03低度敏感01不敏感84VDS敏感01中度敏感13低度敏感21不敏感54MTX敏感00中度敏感03低度敏感12不敏感74E-ADM敏感00中度敏感02低度敏感11不敏感77

17、本组资料中病变以舌部为多，占30%。22%对DDP低度敏感，11%对MTX低度敏感，11%对VDS、E-ADM中度敏感，5-Fu、PYM无1例敏感。颊部肿瘤对DDP、5-Fu敏感者各占20%，PYM、MTX、5-Fu中度敏感各占40%，牙龈部DDP敏感占40%，其次5-Fu占20%，MTX占20%，中度敏感DDP占40%，5-Fu占20%，MTX占20%，表明恶性肿瘤病理类型相同，部位相同，不同个体的药物敏感性不尽相同3。所以单凭临床经验和肿瘤组织类型等来确定化疗方案有不足之处，未体现肿瘤的“个体化”原则，有必要做药敏检测，为临床选择有效治疗方案提供依据。术前化疗8例，6例应用VM方案，1例用

18、5-Fu，1例MTX+DDP，临床治疗效果不令人满意。术后标本MTT检测结果显示：3例对所测6种化疗药物均不敏感，5例对DDP不同程度敏感，2例对VDS中度敏感，而对MTX仅有1例低度敏感。表明MTT法检测体外药敏结果与临床化疗效果基本相符合。所以有必要对化疗前肿瘤病人做MTT药敏检测，筛选敏感性药。据UICC4制定的恶性肿瘤TNM分类标准对恶性实体肿瘤的治疗方案制定和预后判断有重要价值。本组病例T1-T2N0M0期对DDP无1例敏感，中度敏感2例，而T3-T4N1M0期却有2例对DDP敏感，中度敏感有3例，5-Fu同样有类似情况。我们认为TNM分类能客观反映肿瘤疗效，并帮助评价预后，对选择综

19、合治疗方案具有重要的价值。本组复发病例为30%，药敏检测结果示：3例对所测化疗药物均无效，其他6例中腺源性肿瘤2例，纤维肉瘤1例，这3例均有肺部转移。远处转移主要与肿瘤的病理类型有关，与个体转移基因易感性有关。其他3例中有1例3年前患牙龈癌术后用PYM，3年后复发做MTT药敏检测结果，仍对PYM有效，对其它化疗药却无效，说明以前有效药3年后仍有效。但也有作者报道，一些经过首次化疗后复发的病例对初次所用化疗药物产生耐药性。故只有对化疗前病人进行MTT药敏检测，才有可能选择针对该肿瘤的敏感性药物5。本组资料中，口腔颌面部鳞状上皮来源的恶性肿瘤21例，占总数2/3，其中19%对任何药物不敏感。从表1

20、、表3可以看出，肿物的药物敏感顺序为DDP、5-Fu、MTX、PYM、VDS。腺上皮5例，2例对所测试药物不敏感，占40%；DDP 1例敏感，1例低度敏感，1例不敏感；5-Fu、VDS各1例中度敏感，其敏感顺序为DDP、5-Fu、VDS。显示，DDP、5-Fu是传统化疗的主要药物，其杀伤鳞状细胞癌的效果优于腺上皮肿瘤，与临床化疗结果相吻合。但也有一部分肿瘤对DDP、5-Fu、MTX是不敏感的，故在肿瘤化疗前进行药物敏感性检测是十分必要的。本文校对：史宏男作者简介：周晓键(1950-)，女，上海人，主管技师周晓健（上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科 200011）陈万涛（上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科 200011）林李嵩（上海第二