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文档简介

1、需要准备的东西：1 高压细菌冲洗液，可以是幽门螺杆菌液体培养基或是PBS缓冲液。2 将现有的针高压。3 另外，观察SS1标准株的细菌长势，将部分细菌传代，以保证周二细菌长势良好。依此类推，保证细菌在周四和周六长势良好。4 先用一块弃用的平板练习如何调整细菌浓度，避免到时手忙脚乱。（先将细菌全部刮下，溶到脑心浸液中，混匀，测OD660,当数值为1时，即浓度108/ml，再将此离心，浓缩10倍，即为浓度109/ml），这些都需要在超净台中操作，但是测OD值时可以吸取菌液稀释后测浓度，然后换算回来就行了。） 1 观察细菌的长势，建立 SS1标准株，同时选取较好一块平板作液体培养，同时注意观察条件之间

2、的不同，找出上次液体培养失败的原因。2周二 需要至少5块平板，同时多做一块作备用平板。3 选取细菌长势比较好的细菌，溶在液体培养基中。总量为8×1ml×3次=24ml(总量为30ml，考虑到灌胃时的损失)（然后调整浓度为108/ml或109/ml）。（1） 选取无污染的细菌平板用液体冲下来。（2） 最初时用少量的液体冲洗，以便调整浓度。/或者离心收取细菌（rpm:5000,10min），再调整细菌浓度。（3） 测OD值。当OD660=1，浓度108/ml。将细菌浓度调整至109/ml4 分别在10，12，14号灌胃。（1） 选取57BL/6(或者BAB/C)雌性小鼠，68周

3、龄，1820克（2） 灌胃总量为108细菌量×4只，109细菌量×4只,另外2只作对照，灌无菌细菌冲洗液。（3） 每次灌胃以前灌胃针用酒精消毒（也可能这面可以提供灌胃针，这需要再去问问）。（4） 灌胃以前选取1ml的无菌注射器，以便准确度量。5 间隔2周6 处死小鼠（断颈处死）7Hp感染检测将试验鼠胃沿纵向切开，纵向切成同样大小的3份，1份直接快速尿素酶试验，1份放入无菌生理盐水中，用于细菌培养，1份置于10福尔马林中固定，用于病理组织学（Giemsa和H&E染色）检测。（1） 快速尿素酶试验：将其中1份胃粘膜放入快速尿素酶检测试剂中，37度放置24h，试剂颜色变红表示阳性。（2） 培养：将1份胃粘膜粘膜朝下，均匀涂布于血平板上，37度培养57天，经涂片革兰染色，尿素酶，触酶，氧化酶试验确定是否是Hp，再将阳性菌落转种于另一平板上，培养35天，再次观察菌落形态及生化反应，形态典型及生化反应均为阳性者定为Hp阳性。（3） 病理组织学：Giesma染色确定Hp定植程度，H&E染色确定炎症程度。HP定值标准判定：高倍镜下观察10个视野胃小凹的Hp定植：0无HP1胃小凹内有12条HP，但非每个小凹内都有HP存在2多数胃小凹内有310条HP3几乎所有胃小凹内均有成堆的HP胃粘膜病理组织学标准：高倍镜下观察1

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