假奓包叶抗菌活性部位提取工艺研究

1、假奓包叶抗菌活性部位提取工艺研究                         作者：赵敏，张元媛，陈晟，张璐，王军宪  【摘要】  目的筛选假奓包叶抗菌活性部位的最佳分离工艺。方法以没食子酸为检测指标，采用HPLC测定没食子酸的含量，对假奓包叶的提取分离工艺进行研究。结果最佳工艺为：以水作为溶剂，采用温浸法提取，原料粉碎为中

2、粉，液料比201(gml)，提取温度为50，提取时间8 h,提取1次。结论该提取分离方法提高了假奓包叶的利用率，且简便可行，提取物具有抗菌活性，可用于生产。 【关键词】  抗菌活性部位; 假奓包叶; 提取工艺假奓包叶又名金沙叶、艾桐、老虎麻，原植物为大戟科假奓包叶属植物假奓包叶Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.，主产于陕西、甘肃、湖北、湖南、川贵等地1。民间以根皮入药，具有清热解毒、泄水消积的功效，用于水肿、食积、毒疮、鹅掌风等症2。在对其化学成分研究中发现，该植物中含有的结构类型包括黄酮类、有机酸类、三萜类和蒽醌类化合物等

3、，其中，没食子酸的含量较高，且该化合物具有抗菌、杀锥虫、抗肿瘤、清除自由基和抗氧化等药理活性36。故本研究以没食子酸含量作为指标，对假奓包叶叶中的抗菌活性成分的提取工艺进行初步研究和探讨。1 仪器与试药LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津公司);AE240S型分析天平(瑞士METTLER公司);HS6150D超声振荡仪(天津市恒奥科技有限责任公司);RE-52型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);HH-4型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);SHZ-D循环水真空泵(河南巩义市英峪予华仪器厂)。假奓包叶采于陕西汉中地区，经西安大学医学院药学系天然药物化学研究室王军宪教授鉴定为大戟科植物假奓包

4、叶Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.的叶;没食子酸对照品(实验室自制，纯度>98%);高效液相用甲醇为色谱纯;蒸馏水自制;其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 含量测定2.2 提取工艺首先对提取溶剂和提取方法进行了筛选，并在此基础上采用正交法对提取工艺进行优选。选取5个对提取率影响较大的因素(粉碎度、液料比、温度、时间和次数)、每个因素选择3个水平进行考察，按L18(37)表安排实验，以没食子酸的含量为实验指标，筛选抗菌部位的最佳提取工艺。1        

5、; 没食子酸的产率(%)= 没食子酸含量(mg·ml-1)×体积(ml)药材重量(mg)× 100%从表2的实验结果分析可以看出，在实验考察范围内，各因素对没食子酸含量的影响程度大小次序为：D>E>C>A>B。提取时间对提取液中没食子酸产率影响最大，液料比对产率的影响最小。从表3的正交实验方差分析可以看出，在实验考察范围内，仅提取时间因素各水平间具有显著性差异。结合实际操作，最终确定以没食子酸为指标的抗菌部位提取的最佳工艺条件是A2B1C2D3E1，即以水作为溶剂，采用温浸法提取，原料粉碎度为中粉，液料比为201，提取温度为50，

6、提取时间8 h，提取1次。3 讨论有报道用酸醇提取药材中的多酚类物质7，故我们也将这种方法列入至提取溶剂的考察中。结果发现，酸水提取液中的没食子酸含量较低，表明没食子酸在酸性条件下不稳定，不宜在酸性条件下提取。实验同时也考察了碱性条件下没食子酸的稳定性，取浓度为0.126 7 mg·ml-1的没食子酸对照品甲醇溶液，用4%NaOH调pH为12，密塞后于60下静置0.5 h，测定静置前后没食子酸的含量，结果显示静置后无法测出没食子酸的色谱峰，说明没食子酸在碱性下不稳定，不宜在碱性条件下提取。在预试和正交实验的基础上，我们初步筛选出假奓包叶中抗菌活性部位的提取工艺，通过体外抗菌实验验证，

7、证实其具有一定的抑菌活性。该方法简便可行，可用于生产。【文献】  1 院中国植物志编辑委员会. 中国植物志，四十四卷，第3分册M. 北京：科学出版社，1979：64.2 中国药材公司.中国中药资源志要M.北京：科学技术出版社，1994：625.3 Nose M，Koide T，Morikawa K，et al. Formation of reactive oxygen intermediates might be involved in the trypanocidal activity of gallic acidJ. Biol Pharm Bull，1998，21(6)：583.

8、4 Ohno T，Inoue M，Ogihara Y. Cytotoxic activity of gallic acid against liver metastasis of cells P815J. Anticancer-Res，2001，21(61A)：3875.5 Qiu X，Takemura G，Koshiji M，et al. Gallic acid induces vascular smooth muscle cell death via hydroxyl radical productionJ. Heart Vessels，2000，15(2)：90.6 Yoshino M，Haneda M，Naruse M，et al. Prooxidant action of gallic acid compounds：copper-dependent strand breaks and the f