多烯紫杉醇脂质体大鼠体内药物动力学研究

1、多烯紫杉醇脂质体大鼠体内药物动力学研究                                 作者：刘睿颖，王盛民，宋庆国【摘要】  目的探讨多烯紫杉醇脂质体大鼠体内代谢过程。方法优化色谱条件，以萃取浓集法处理生物样品，内标法测定样品中药物含量；SD大鼠尾静脉

2、给药后测定设定时间点体内药物浓度，用2.0版DAS软件分析药物体内动力学参数。结果经优化色谱条件，在0.0525 g/ml浓度范围内，多烯紫杉醇线性关系良好。药物体内过程符合双室模型，主要药物代谢动力学参数均值为：分布半衰期(T1/2)为2.374 min；消除半衰期(T1/2)为299.038 min；清除率(CL)为0.026 L/(min·mg)；表观分布容积(V1)为0.219 L/kg。结论该研究为开发多烯紫杉醇脂质体提供体内动力学。 【关键词】  多烯紫杉醇； 脂质体； 药物代谢动力学； 大鼠Abstract：ObjectiveTo establish an H

3、PLC method for in vivio docetaxel determination and do some research on pharmacokinetics of docetaxel liposomes in rats. MethodsHPLC method was optimized and samples were concentrated via ether extraction and determined with inner-standard method. Docetaxel liposome was given intravenously at 10 mg/

4、kg to SD rats and blood sample was taken at chosen time interval and docetaxel conentration was determined, according to which pharmacokinetic parameters were gained via DAS 2.0.ResultsThe chosen mobile phase was methonol: water(4555) and wavelength was 233nm. Within the range of 0.0525 g/ml there w

5、as an excellent linear correlation and the regression equation of peak area ratio to concentration was  Y =0.396 8 X +0.680 8 ( r = 0.999 4). The pharmacokinetic result revealed it a double-department model and the kinetic parameters were T1/2=2.374min, T1/2=299.038 min, CL=0.026 L/(min·mg

6、)and Vl=0.219 L/kg.ConclusionThe study focused on kinetic properties of docetaxel liposome in order to provide theoratical support for clinical researches.Key words：Docetael;  Liposome;  Pharmacokineties;  Rats    紫杉醇和多烯紫杉醇在肿瘤预防、方面的作用，国内外许多研究已经证实1，但受其理化性质的制约，现上市的一些制剂不能有

7、效发挥其临床疗效2。而脂质体靶向给药技术研究日益成熟，使开发多烯紫杉醇新制剂成为可能。目前，紫杉醇脂质体制剂已上市，并取得了良好的疗效，而国内多烯紫杉醇脂质体制剂研究未见报道。为此，本研究探讨该药物制剂大鼠体内代谢过程，以期为开发多烯紫杉醇脂质体提供体内动力学参考。1  仪器与试药1.1  仪器 高效液相色谱仪（LC-20AT泵，SPD-20AC检测器，AT-330柱温箱，CBM-102）； TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。1.2  药品与试剂 紫杉醇及多烯紫杉醇对照品（药品与生物制品检定所），多烯紫杉醇脂质体（四川大学华西

8、药学院提供），乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；纯净水，其余试剂均为分析纯。1.3  动物 健康雄性SD大鼠5只，体重180220g，四川大学华西动物中心提供。2  方法与结果2.1   色谱条件3，4色谱柱为Hypersil ODS C18（4.0mm×200 mm，5 m）；流动相为乙腈水(4555，加磷酸调pH至4.5)，流速1 ml/min；柱温35；检测波长233 nm，内标为1 g/ml紫杉醇甲醇溶液。2.2    实验方案 健康雄性SD大鼠5只，实验前禁食12 h，自由饮水，给药前编号并称重，按10 m

9、g/kg分别尾静脉注射多烯紫杉醇脂质体制剂（1 mg/ml），给药后5，10，15，30，60，120，240，480 min，断尾取血0.5 ml，分离血浆，-20保存待测。2.3    溶液配制2.3.1   标准溶液精密称取多烯紫杉醇标准品10.00 mg，置100 ml容量瓶中，甲醇溶解并定容，摇匀得 100 g /ml的标准贮备液，4避光保存。精密吸取适量，用甲醇稀释配成浓度分别为0.1，0.3，0.5，1.0，10.0，50.0 g/ml的标准溶液。1       

10、0; 2.3.2    内标溶液精密称取紫杉醇对照品适量，甲醇溶解并稀释，制成浓度为1 g/ml的内标溶液。2.4    血浆样品处理 取大鼠血浆100 l，加入醋酸缓冲液10 l，充分混匀，加入内标液100 l、甲醇100 l、乙醚1 ml，旋涡混合5min，离心（5 000 r/min）10 min。精密吸取上清液0.8 ml，置于1 ml尖底离心管中，氮气流挥干，残渣用60 l甲醇溶解，离心（10 000 r/min）10 min，待测。2.5  色谱专属性考察以“2.1”项下色谱条件测定标准溶液、内标溶液、

11、空白血浆及血浆样品，记录色谱图，结果见图1。图中基线平稳，峰形锐利，说明血浆中内源性成分对测定成分无干扰。图1  标准溶液、内标溶液、空白血浆及血浆样品色谱图（略）2.6   标准曲线及线性关系 取大鼠空白血浆100 l，共6份，分别加入标准溶液100 l，制成含标准溶液分别为0.05，0.15，0.25，0.5，5，25 g/ml的质控样品，按“2.4” 项下操作，10 l进样测定，记录色谱图，以标准溶液浓度（g/ml）为横坐标，样品峰面积（As）与内标峰面积（Ai）的比值（As/Ai）为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：Y=0.396 8X+0.680 8（r

12、=0.999 4），表明多烯紫杉醇在0.0525 g/ml浓度范围内线性关系良好。2.7    精密度考察取大鼠空白血浆100 l，按“2.6”项，配制低、中、高3种浓度（0.3，1.0，10 g/ml）的质控样品，每一浓度5个样品，连续测定3 d，并做随行标准曲线，日内精密度（n=5）RSD分别为4.36%，3.78%，4.21%，日间精密度（n=15）RSD分别为5.48%，5.21%，4.72%，表明该方法符合生物样品分析要求。2.8    萃取回收率测定 取大鼠空白血浆100 l，按“2.6”项，配制低、中、高3种浓度（0.3

13、，1.0，10g/ml）质控样品，每一浓度5个样品，按“2.4”项下，10 l进样测定，以萃取后多烯紫杉醇的峰面积与相应浓度标准溶液的峰面积之比（As/Ai），考察萃取回收率，3种浓度样品萃取回收率分别为87.23%，91.46%，88.27%，表明采用乙醚做萃取溶剂，药物回收率良好。2.9  药物动力学研究 取单剂量尾静脉注射多烯紫杉醇脂质体制剂的血浆样品，按“2.4”项下，10l进样测定，每天做随行标准曲线，5只大鼠单剂量尾静脉注射多烯紫杉醇脂质体制剂后，平均药-时曲线（见图2、表1），采用2.0版DAS软件处理表1数据，进行模型拟合。结果见表2。图2  单剂量尾静脉注

14、射多烯紫杉醇脂质体后血药浓度平均药-时曲线（略）表1  单剂量尾静脉注射多烯紫杉醇脂质体后血药浓度-时间数据（略）表2  黄芩苷对SMMC7721细胞生长周期的影响（略）3     讨论    本研究首次以多烯紫杉醇脂质体为对象，探讨其在大鼠体内的代谢过程。研究表明该方法线性关系良好，萃取回收率、方法回收率、日内精密度、日间精密度均较高，符合生物样品分析要求5。    大鼠单剂量尾静脉注射多烯紫杉醇脂质体后，采用2.0版DAS软件分析不同时间点血药浓度，表明血浆药-时曲线符合双指数线性动力学模型。    目前国内有关紫杉醇脂质体新制剂研究较多，而多烯紫杉醇脂质体研究尚未见报道，因此本研究探讨大鼠体内行为，为促进多烯紫杉醇在临床中的应用研究，提供一定的理论基础及依据。【】  1 张先林.抗肿瘤药多烯紫杉醇制剂的应用研究近况J