肿瘤标志物课件课件

1、关于肿瘤标志物课件第一页，共69页幻灯片人体癌症地图人体癌症地图第二页，共69页幻灯片在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合 成、释放、或者是宿主对肿瘤反应产生的成、释放、或者是宿主对肿瘤反应产生的 一类生化物质一类生化物质在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量 或定性检测可以作为肿瘤筛查（仅或定性检测可以作为肿瘤筛查（仅AFPAFP与与 PSAPSA用于高危人群）、鉴别诊断、用于高危人群）、鉴别诊断、治疗后治疗后 病情监测及预后判断的标志与依据病情监测及预后判断的标志与依据肿瘤标志物肿瘤标志物 【tumor markers

2、TM】第三页，共69页幻灯片肿瘤标志物应用的一般准则肿瘤标志物应用的一般准则是大分子物质是大分子物质( (多为糖蛋白或脂蛋白成分多为糖蛋白或脂蛋白成分),),其在外周血其在外周血 和和/ /或 其 他 体 液 中 的 表 达 和 浓 度 变 化 与 恶或 其 他 体 液 中 的 表 达 和 浓 度 变 化 与 恶 性肿瘤的发生、发展关系密切性肿瘤的发生、发展关系密切在肿瘤细胞表面或肿瘤细胞内合成，或通过其它细胞诱在肿瘤细胞表面或肿瘤细胞内合成，或通过其它细胞诱 导而成导而成用 于 诊 断 的用 于 诊 断 的 “理 想 标 志 物理 想 标 志 物 ” 应 具 备 ： 仅 在 细 胞应 具 备

3、 ： 仅 在 细 胞 恶 变 后 才 产 生 、 分 泌 到 血 中 ， 浓 度 可 达 被 检 测恶 变 后 才 产 生 、 分 泌 到 血 中 ， 浓 度 可 达 被 检 测 到；一经检测即可知肿瘤发生的部位到；一经检测即可知肿瘤发生的部位第四页，共69页幻灯片目前临床应用肿瘤标志物现状目前临床应用肿瘤标志物现状理想形式理想形式特异性特异性100%真阴性真阴性100%假阳性假阳性 0%健康人健康人临界值临界值敏感性敏感性100%真阳性真阳性100%假阴性假阴性 0%肿瘤患者肿瘤患者实际状况实际状况假阴性假阴性假阳性假阳性临界值临界值敏感性敏感性100%特异性特异性- 60%健康人健康人肿瘤

4、患者肿瘤患者特异性特异性100%敏感性敏感性- 50%敏感性上升敏感性上升特异性上升特异性上升肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群间的区别肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群间的区别实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：特异性越高，敏感性越低，反特异性越高，敏感性越低，反之亦然之亦然第五页，共69页幻灯片肿瘤标志物检测质量标准肿瘤标志物检测质量标准 TMTM的诊断数值取决于其敏感性和特异性的诊断数值取决于其敏感性和特异性 TMTM的特异性是：在健康人或良性疾病患者的特异性是：在健康人或良性疾病患者 所检测到的真阴性结果发生率，即所检

5、测到的真阴性结果发生率，即假阳性假阳性 结果百分率越低，特异性越好结果百分率越低，特异性越好 TMTM的敏感率是肿瘤患者检测阳性结果的百分率的敏感率是肿瘤患者检测阳性结果的百分率4第六页，共69页幻灯片TM敏感性和特异性在诊断上的意义敏感性和特异性在诊断上的意义关键依赖于肿瘤分期和对照组的选择，只有关键依赖于肿瘤分期和对照组的选择，只有 肿瘤分期确定后，敏感性的数据才是可靠的肿瘤分期确定后，敏感性的数据才是可靠的只有对照组有明确限定特征，其特异性才有只有对照组有明确限定特征，其特异性才有 意义意义目前研究结果不仅是特异性和敏感性，还应目前研究结果不仅是特异性和敏感性，还应 指出群体研究中的个体

6、结果以及普遍的分类指出群体研究中的个体结果以及普遍的分类第七页，共69页幻灯片TM的临界值设定原则的临界值设定原则 临 界 值 是 指 某 一临 界 值 是 指 某 一T M在 正 常 人 或 良 性 疾 病 患 者 中在 正 常 人 或 良 性 疾 病 患 者 中 的假定上限值的假定上限值临 界 值 无 固 定 数 值 ， 可 随 试 验 的 目 的 而 改 变 ；临 界 值 无 固 定 数 值 ， 可 随 试 验 的 目 的 而 改 变 ； 鉴鉴 定 尽 可 能 多 的 肿 瘤 患 者 ， 降 低 临 界 值 以 增 加 其 敏定 尽 可 能 多 的 肿 瘤 患 者 ， 降 低 临 界 值

7、 以 增 加 其 敏 感性（假阳性感性（假阳性 ，特异性，特异性 ）最 大 可 能 地 指 示 出 肿 瘤 发 生 ， 临 界 值 可 设 定 得 高最 大 可 能 地 指 示 出 肿 瘤 发 生 ， 临 界 值 可 设 定 得 高 些 ， 以 增 加 其 特 异 性 （ 假 阴 性些 ， 以 增 加 其 特 异 性 （ 假 阴 性 ， 敏 感 性， 敏 感 性 ）T M的 诊 断 价 值 很 大 程 度 上 取 决 于 临 界 值 的 选 择 ；的 诊 断 价 值 很 大 程 度 上 取 决 于 临 界 值 的 选 择 ； 在 相 对 于 健 康 人 和 良 性 疾 病 患 者 特 异 性

8、为在 相 对 于 健 康 人 和 良 性 疾 病 患 者 特 异 性 为9 5 % 的的 临 界 值 水 平 上 比 较 其 数 据 ， 可 提 高 此临 界 值 水 平 上 比 较 其 数 据 ， 可 提 高 此T M 的 敏 感 性的 敏 感 性第八页，共69页幻灯片特异性、敏感性及阴性和阳性预期值定义特异性、敏感性及阴性和阳性预期值定义特异性特异性=真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数+假阳性结果数假阳性结果数敏感性敏感性=真阴性结果数真阴性结果数真阳性结果数真阳性结果数+假阴性结果数假阴性结果数阳性预期值阳性预期值=真阳性结果数真阳性结果数真阳性结果数真阳性结果数+假阳性结

9、果数假阳性结果数阴性预期值阴性预期值=真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数真阴性结果数+假阴性结果数假阴性结果数第九页，共69页幻灯片临床实验室选用肿瘤标志物试验的要求临床实验室选用肿瘤标志物试验的要求可靠性和重复性可靠性和重复性批内变异批内变异 5%批间变异批间变异10%宽分析范围宽分析范围合理收费和减轻工作人员负担合理收费和减轻工作人员负担高特异性高特异性95%高敏感性高敏感性50%最佳阳性和阴性预期值（最佳阳性和阴性预期值（PV）与肿瘤大小的相关性与肿瘤大小的相关性本地区适合的试剂和批号本地区适合的试剂和批号敏感性（敏感性（%）特异性（特异性（%）10080-60-40-20-0100

10、80 60 40 20 0标志标志A标志标志B两条两条ROC（接受器工作特性）曲线，（接受器工作特性）曲线，A在对照组和恶性肿瘤之间分布好，在对照组和恶性肿瘤之间分布好，B不能进行分布不能进行分布第十页，共69页幻灯片肿瘤胚胎性抗原肿瘤胚胎性抗原 甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（）、癌胚抗原（CEA）异位激素异位激素 绒毛膜促性腺激素（绒毛膜促性腺激素（HCG）、促肾上腺皮质激素）、促肾上腺皮质激素 （ACTH）、降钙素）、降钙素酶和同工酶酶和同工酶 乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH） 神经元特异性烯醇化酶（神经元特异性烯醇化酶（NSE） 前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸性磷酸酶（PAP）血浆

11、蛋白血浆蛋白 2巨球蛋白（巨球蛋白（PsM）细胞代谢产物细胞代谢产物 脂质相关涎酸脂质相关涎酸肿瘤抗原肿瘤抗原 CAl99、CAl25癌基因和抑癌基因蛋白产物癌基因和抑癌基因蛋白产物 cmyc、ras、p53、Rb微量元素微量元素 砷、铜、铁、硒、锌砷、铜、铁、硒、锌肿瘤标志物分类肿瘤标志物分类第十一页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4560%糖，电泳糖，电泳迁移率，迁移率，6个个 抗原决定基抗原决定基分子量：分子量： 180,000发生部位：发生部位： 胚胎及胎儿肠黏膜胚胎及胎儿肠黏膜参考值范围：参考值范围：3ng/ml临床应用：临床应用： 监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和

12、支气管监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和支气管 癌病程及疗效癌病程及疗效影响因素：影响因素： 5%吸烟者检测值可至吸烟者检测值可至2.55ng/ml， 1%至至1020ng/ml；肝炎疾病可使；肝炎疾病可使CEA 水平短暂升高水平短暂升高癌胚抗原癌胚抗原 【CEA】99mTc(鍀）标记抗癌胚抗原单抗C50片段Fab第十二页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4%糖，电泳糖，电泳-1-迁移率迁移率分子量：分子量： 70，000发生部位：发生部位： 卵黄囊、胚胎肝卵黄囊、胚胎肝参考值范围：参考值范围：15ng/ml临床应用：临床应用： 发现原发性肝细胞癌发现原发性肝细胞癌,监测治疗效果

13、监测治疗效果;用用 于诊断生殖细胞肿瘤于诊断生殖细胞肿瘤影响因素：影响因素： 肝炎疾病可使肝炎疾病可使AFP水平短暂升高水平短暂升高;AFP可通过胎盘可通过胎盘,妊娠妊娠3236周可达高峰周可达高峰；羊水中；羊水中AFP浓度与胎儿身长与孕周呈负相关（其浓度与胎儿身长与孕周呈负相关（其95%参考上限参考上限5500200ng/ml，2441孕周），于正常提示胎儿畸形、死胎、无脑儿和开放性神经缺损等孕周），于正常提示胎儿畸形、死胎、无脑儿和开放性神经缺损等甲胎蛋白甲胎蛋白【AFP】肝癌细胞AFP+HCC患者外周血AFP mRNA RT-PCR （反转录）产物电泳图谱第十三页，共69页幻灯片生化特性

14、：生化特性： 单链糖蛋白，前列腺分泌产物单链糖蛋白，前列腺分泌产物分子量：分子量： 36，000发生部位：发生部位： 前列腺分泌腺管前列腺分泌腺管参考值范围：参考值范围：3.7ng/ml临床应用：临床应用： 监测前列腺癌监测前列腺癌影响因素：影响因素： 具有组织特异性，但不是肿瘤所特异具有组织特异性，但不是肿瘤所特异 的，注意：应在的，注意：应在直肠癌指诊前取血直肠癌指诊前取血， 前列腺癌患者多高于前列腺癌患者多高于10ng/ml前列腺特异抗原前列腺特异抗原 【 t-PSA】P C R及 重 叠 延 伸 产 物 的 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 构建抗前列腺特异抗原(PSA)单 链 抗 体（sc

15、Fv）/人羧肽酶A（hCPA） 融合 基因 总PSA（t-PSA）中80%以结合形式存在，称复合PSA（c-PSA）；20%以游离形式存在，称游离PSA（f-PSA）；t-PSA及f-PSA升高，而f-PSA/t-PSA比值降低，提示前列腺癌当总PSA在3.010.0ng/ml时，f-PSA/t-PSA比值低于0.190.10时，前列腺癌的可能性较大第十四页，共69页幻灯片生化特性生化特性： 糖蛋白，由两个单克隆抗体：糖蛋白，由两个单克隆抗体： 1.115D8抗乳脂膜及抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌抗乳腺癌 细胞系所证实细胞系所证实分子量：分子量： 115D8： 400，000；DF3290，0

16、00发生部位：发生部位： 乳腺癌细胞和某些上皮细胞乳腺癌细胞和某些上皮细胞参考值范围：参考值范围：28U/ml临床应用：临床应用： 监测乳腺癌疗效监测乳腺癌疗效影响因素：影响因素： 与与CEA联合检测联合检测癌抗原癌抗原15-3 【CA15-3】糖与多肽连接的两种方式 ？是是1984年由年由Kufer和和Hilkens发现，是由鼠抗人乳腺癌肝细胞转移发现，是由鼠抗人乳腺癌肝细胞转移株的膜的单克隆抗体株的膜的单克隆抗体DF3制备的制备的第十五页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 糖脂糖脂,Lewis()血型决定基半抗原血型决定基半抗原分子量：分子量： 抗原抗原:36,000;粘蛋白粘蛋白:10

17、6D发生部位：发生部位： 各种肿瘤各种肿瘤,在胎儿胃肠道上皮细胞在胎儿胃肠道上皮细胞,许多许多 粘膜细胞粘膜细胞参考值范围：参考值范围：37U/ml临床应用：临床应用： 监测胰腺癌疗效监测胰腺癌疗效影响因素：影响因素： 结直肠结直肠TM的第二选择的第二选择糖类抗原糖类抗原19-9 【CA19-9】是是1981年由年由Koprowski从大肠腺癌细胞系和免疫鼠从大肠腺癌细胞系和免疫鼠杂交瘤产物分离而成杂交瘤产物分离而成第十六页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,以卵巢癌细胞系免疫所获以卵巢癌细胞系免疫所获 单克隆抗体所证实单克隆抗体所证实分子量：分子量： 200,000发生部位：

18、发生部位： 卵巢癌卵巢癌(膜结合物膜结合物),胎儿和成人支气胎儿和成人支气 管正常上皮细胞管正常上皮细胞参考值范围：参考值范围：35U/ml (65U/ml)临床应用：临床应用： 监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵 管埃及未分化卵巢癌明显升高管埃及未分化卵巢癌明显升高影响因素：影响因素： 来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原(Mller管上皮管上皮),特特 异性低；血清浓度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患，异性低；血清浓度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患， 怀孕前怀孕前3个月、行经期、肝硬化、

19、子宫纤维变性、急性输卵个月、行经期、肝硬化、子宫纤维变性、急性输卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。 糖类抗原糖类抗原125 【 CA125】1981年由年由Bast发现的由鼠抗人乳头状囊性卵巢上皮细胞系发现的由鼠抗人乳头状囊性卵巢上皮细胞系OC125制备而成制备而成第十七页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 烯醇化酶二聚体烯醇化酶二聚体分子量：分子量： 87,000发生部位：发生部位： 神经系统的神经元和神经内分泌细胞神经系统的神经元和神经内分泌细胞,红细胞红细胞,血小板血小板参考值范围：参考值范围：12.5ng/ml 临床应用：临床应用： 神经元特异性烯醇

20、化酶是小细胞肺癌神经元特异性烯醇化酶是小细胞肺癌(SCLC)和神经母细胞瘤的肿瘤标志物和神经母细胞瘤的肿瘤标志物，可用于鉴别诊断、病情监测、疗效评价和复发预报。用神经元特异性烯醇化酶监测小细胞肺癌的，可用于鉴别诊断、病情监测、疗效评价和复发预报。用神经元特异性烯醇化酶监测小细胞肺癌的复发，比临床确定复发要早复发，比临床确定复发要早412周。神经元特异性烯醇化酶还可用于神经母细胞瘤和周。神经元特异性烯醇化酶还可用于神经母细胞瘤和肾母细胞瘤的鉴别诊断，前者神经元特异肾母细胞瘤的鉴别诊断，前者神经元特异性烯醇化酶异常增高而后者增高不明显。性烯醇化酶异常增高而后者增高不明显。增高：见于小细胞肺癌（最敏

21、感最特异的肿瘤标增高：见于小细胞肺癌（最敏感最特异的肿瘤标志 物 之 一 ）志 物 之 一 ） 、 神 经 母 细 胞 瘤 、 神 经 内 分 泌 细 胞 肿 瘤 （ 如 嗜 铬 细 胞、 神 经 母 细 胞 瘤 、 神 经 内 分 泌 细 胞 肿 瘤 （ 如 嗜 铬 细 胞瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤）等瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤）等影响因素：影响因素： 不要将血放置太久，否则将出现假高值；一不要将血放置太久，否则将出现假高值；一 小时内离心；检测小时内离心；检测SCLC时，与时，与CEA联合应用联合应用神经特异性烯醇化酶神经特异性烯醇化酶 【 NSE】第十八页，共69页幻灯片生化特性：生化特性：

22、 糖蛋白激素，由两个非共价结合的亚单糖蛋白激素，由两个非共价结合的亚单 位组成，位组成，a a ，分子量：分子量： a a：14,000；：24,000发生部位：发生部位： 胎盘合体滋养层胎盘合体滋养层,滋养层组织中的胚细胞滋养层组织中的胚细胞 肿瘤肿瘤,合体滋养层巨细胞合体滋养层巨细胞(精原细胞来源精原细胞来源 许多中空器官的上皮细胞成分许多中空器官的上皮细胞成分)参考值范围：参考值范围：男性男性:05mU/ml 临床应用：临床应用： 非精原细胞瘤胚芽细胞瘤非精原细胞瘤胚芽细胞瘤(4886%),睾睾 丸或胎盘绒毛膜肿瘤丸或胎盘绒毛膜肿瘤(100%),胞虫囊状胞虫囊状 痣痣(97%),精原细胞

23、瘤精原细胞瘤(合并肿瘤合并肿瘤)(714%)人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素【HCG】RNA的甲醛变性胶电泳结果，可见清晰的18S、28S两条带及其距加样孔的距离 PCR扩增后进行PAGE电泳及放射自显影结果箭头所示条带T26只在绒癌中显示，在正常绒毛中不显示 第十九页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 增生性抗原增生性抗原,多肽，由多肽，由B1、B2和和C三个亚基组成，其三个亚基组成，其 活性主要在活性主要在B1分子量：分子量： 17,00043,000发生部位：发生部位： 卵黄囊卵黄囊,胚胎肝胚胎肝参考值范围：参考值范围：80U/L临床应用：临床应用： 膀胱癌？膀胱癌？正常人阳性率正

24、常人阳性率4.7%。但有相当一部分非恶性肿瘤患者血清。但有相当一部分非恶性肿瘤患者血清中有中有TPA存在，其阳性率约为存在，其阳性率约为14%35%，以下呼吸道、肝及尿路感染者多见，故，以下呼吸道、肝及尿路感染者多见，故TPA亦非肿瘤所特有的标志。但亦非肿瘤所特有的标志。但在恶性肿瘤者中，在恶性肿瘤者中，TPA的增高往往是持续性的的增高往往是持续性的，因此，若进行连续监测，常常有利于恶性，因此，若进行连续监测，常常有利于恶性肿瘤与非恶性病变的鉴别肿瘤与非恶性病变的鉴别 影响因素：影响因素： 测定值测定值80:膀胱、支气管、卵巢、胃癌，可能为肝，肾，肺等疾病膀胱、支气管、卵巢、胃癌，可能为肝，肾

25、，肺等疾病；特异性低；特异性低组织多肽抗原组织多肽抗原【TPA】第二十页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 多肽（多肽（32个氨基酸）个氨基酸）分子量：分子量： 3,500发生部位：发生部位： C细胞，胸腺也有分泌降钙素的机能细胞，胸腺也有分泌降钙素的机能 参考值范围：参考值范围： 100pg/ml临床应用：临床应用： 甲状腺髓样癌甲状腺髓样癌：此种癌起源于：此种癌起源于甲状腺甲状腺滤泡旁细胞（滤泡旁细胞（C细胞），可细胞），可产生多种生物活性物质，其中以降钙素为主。患者血清降钙素水平高于正常数十到产生多种生物活性物质，其中以降钙素为主。患者血清降钙素水平高于正常数十到数百倍。如经手术治疗，

26、则降钙素水平恢复正常数百倍。如经手术治疗，则降钙素水平恢复正常影响因素：影响因素： 适用于危险人群筛查和辅助诊断；适用于危险人群筛查和辅助诊断；肺小细胞癌可产生多种激素肺小细胞癌可产生多种激素，其中包括降钙素，其中包括降钙素 降钙素降钙素第二十一页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,即由两个单克隆抗体所识别的即由两个单克隆抗体所识别的 TAG72:1:CC49,2:B72-3分子量：分子量： 400,000发生部位：发生部位： 上皮细胞上皮细胞参考值范围：参考值范围： 3U/ml临床应用：临床应用： 胃癌胃癌,卵巢粘液癌卵巢粘液癌影响因素影响因素: 与与CEA联合检测胃癌联合检

27、测胃癌,卵巢癌的卵巢癌的 第二选择标志物第二选择标志物癌抗原癌抗原72-4 【 CA72-4】1989年由年由Gero首先测定首先测定第二十二页，共69页幻灯片生化特性：生化特性： 与与IgG分子的重链和轻链的分子的重链和轻链的C片段同型片段同型,与与 HLA共同片段的部分相同共同片段的部分相同分子量：分子量： 11,800发生部位：发生部位： 淋巴细胞淋巴细胞,巨嗜细胞和一些上皮细胞表面巨嗜细胞和一些上皮细胞表面参考值范围：参考值范围：1.22.5mg/l临床应用：临床应用： 多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影响因素：影响因素： 在肾脏疾病诊断中也有重要

28、意义在肾脏疾病诊断中也有重要意义 -2-微球蛋白微球蛋白 【 -2-m】第二十三页，共69页幻灯片生化特性生化特性： 糖蛋白糖蛋白,肿瘤抗原肿瘤抗原T4分子量：分子量： 48,000发生部位：发生部位： 主要存在于子宫颈鳞状细胞癌主要存在于子宫颈鳞状细胞癌,正常正常 鳞状上皮鳞状上皮参考值范围：参考值范围：2.5ng/ml临床应用：临床应用： 监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞 状细胞癌病程及治疗状细胞癌病程及治疗影响因素：影响因素： 被皮肤或唾液污染后可导致假性高值被皮肤或唾液污染后可导致假性高值鳞状上皮细胞癌抗原鳞状上皮细胞癌抗原 【 SCC】第二十四页，共6

29、9页幻灯片生化特性：生化特性： 细胞角蛋白片段细胞角蛋白片段19分子量：分子量： 30,000发生部位：发生部位： 存在于许多组织中，特别是肺中存在于许多组织中，特别是肺中参考值范围：参考值范围： 3.3ng/ml临床应用：临床应用： 非小细胞肺癌非小细胞肺癌影响因素：影响因素： 被唾液污染后可导致假性高值被唾液污染后可导致假性高值细胞角蛋白组分细胞角蛋白组分19 【 CYFRA21-1】细胞角蛋白阳性细胞肺癌脑转移第二十五页，共69页幻灯片糖类抗原糖类抗原50 【CA50】生化特性：生化特性：糖类抗原糖类抗原CA50是一种以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白为主是一种以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白为主 的肿瘤

30、标志物的肿瘤标志物参考范围：参考范围： 23U/ml临床意义：临床意义：糖类抗原糖类抗原CA50是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与癌抗原是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌的辅助诊断有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。增高：见于胰腺癌（阳性率可达，其中胰腺癌病人增高最明显。增高：见于胰腺癌（阳性率可达87）、结肠）、结肠直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫

31、性疾病等也增高肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高第二十六页，共69页幻灯片糖类抗原糖类抗原242 【 CA242】CA242是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原1993年年Pujol等采用迟缓铕镧荧光分析技术测定等采用迟缓铕镧荧光分析技术测定102例例NSCLC患者血清患者血清CA242浓度，浓度，CA242血清浓度阈值为血清浓度阈值为20.0U/ml，结果其敏感性及特异性分，结果其敏感性及特异性分别为别为28.5%和和95.6%。肺鳞癌患者血清。肺鳞癌患者血清CA242水平显著低于非鳞癌水平显著低于非鳞癌(腺癌和腺癌和大细胞肺癌

32、大细胞肺癌)患者，发生远处转移者的患者，发生远处转移者的CA242浓度高于未转移者，且浓度高于未转移者，且期浓度逐渐增加。从整体角度看，期浓度逐渐增加。从整体角度看，CA242水平与生存不相关，但是，在水平与生存不相关，但是，在不能手术切除的不能手术切除的NSCLC患者中，患者中，CA242浓度升高患者的生存期较浓度浓度升高患者的生存期较浓度低于低于20U/ml患者显著短。由于患者显著短。由于CA242敏感性较低，对敏感性较低，对NSCLC的诊断无意的诊断无意义义CA242可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与CA19-9相仿相仿，但特

33、异性、诊断效率则优于，但特异性、诊断效率则优于CA19-9参考值：参考值： 25U/ml第二十七页，共69页幻灯片CA549也是乳腺癌的标志物，它是一种酸性也是乳腺癌的标志物，它是一种酸性 糖蛋白糖蛋白大部分健康女性大部分健康女性11 UmL异常升高者比例并不高，可见于异常升高者比例并不高，可见于50%乳腺乳腺 癌、卵巢癌、癌、卵巢癌、40%前列腺癌、前列腺癌、33%肺癌患肺癌患 者。由此，作为乳腺癌的早期诊断，者。由此，作为乳腺癌的早期诊断，CA则则 还较欠缺，应联合应用其它还较欠缺，应联合应用其它TM糖类抗原糖类抗原594【CA549】第二十八页，共69页幻灯片血清碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶

34、【ALP 或AKP 】是一组底物特异性较低，在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物的酶是一组底物特异性较低，在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物的酶AFP在器官组织的含量：在器官组织的含量：肝肾胎盘小肠骨磷酸对硝基酚磷酸对硝基酚（底物）2-氨基氨基-2-甲基甲基-1-丙酮丙酮（受体）+ALP对硝基酚对硝基酚+碱性溶液碱性溶液405nm变黄色，连续监测法参考值：女性：参考值：女性：112岁岁500U/L；15岁，岁，40150U/L 男性：男性：112岁岁500U/L；1215岁，岁，750U/L 15岁，岁，40150U/LAFP活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。活力测定常作为

35、肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。升高：骨升高：骨Paget病、胆道梗阻、病、胆道梗阻、恶性肿瘤骨转移或肝转移恶性肿瘤骨转移或肝转移、佝偻病、骨软化、佝偻病、骨软化、成骨细胞成骨细胞瘤瘤、甲状旁腺功能亢进及骨折愈合期、甲状旁腺功能亢进及骨折愈合期降低：少见，呆小症、磷酸酶过少症、维生素降低：少见，呆小症、磷酸酶过少症、维生素C缺乏症。甲功低下、恶性贫血缺乏症。甲功低下、恶性贫血临床意义临床意义第二十九页，共69页幻灯片阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高（肝细胞性黄疸则升高阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高（肝细胞性黄疸则升高不明显）不明显） 原发性和继发性肝癌时碱性

36、磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿周原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移提示可能有肝脏转移 变形性骨炎、成骨细胞癌、佝偻病、骨软化、甲状腺及甲状旁腺功能亢进、肾小变形性骨炎、成骨细胞癌、佝偻病、骨软化、甲状腺及甲状旁腺功能亢进、肾小管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症 很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥类、抗生素（红霉素、庆大霉素

37、、氯霉很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥类、抗生素（红霉素、庆大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨苄青霉素等素、卡那霉素、氨苄青霉素等 常见于重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质、儿童甲状腺功能不全或减退、维常见于重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质、儿童甲状腺功能不全或减退、维生素生素C缺乏症坏血病）。营养不良、呆小症、遗传性低磷酸酶血症。缺乏症坏血病）。营养不良、呆小症、遗传性低磷酸酶血症。 增增 高高减减 低低血清碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶【ALP 或AKP 】第三十页，共69页幻灯片酸性磷酸酶测定酸性磷酸酶测定【ACP】磷酸麝香草酚酞（YMP）ACP麝香草酚酞 + 无机磷碱液终止反应麝香草酚酞 呈

38、蓝色595nm-磷酸萘胺磷酸萘胺 ACP 酸性条件-萘胺萘胺 + 磷酸磷酸固红TR盐重氮化合物重氮化合物总酸性磷酸酶活性总酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性=前列腺酸性磷酸酶活性前列腺酸性磷酸酶活性酒石酸抑制405nm参考值：成人总酶活性为参考值：成人总酶活性为09U/L，前列腺酸性磷酸酶活性为，前列腺酸性磷酸酶活性为03U/LACP含量无性别差异，新生儿出生后含量无性别差异，新生儿出生后1个月血清酶活性甚高，随年龄增长而逐渐下降；个月血清酶活性甚高，随年龄增长而逐渐下降；青春期又可出现一活性峰值，至青春期又可出现一活性峰值，至20岁降至成人水平岁降至成人水平ACP主要

39、用于前列腺癌的辅助诊断及疗效观察指标，特别是转移时，血清主要用于前列腺癌的辅助诊断及疗效观察指标，特别是转移时，血清ACP可明可明显增高显增高溶血性疾病、变形性骨炎、急性尿潴留及近期做过直肠检查者，此酶也可增高溶血性疾病、变形性骨炎、急性尿潴留及近期做过直肠检查者，此酶也可增高临床意义临床意义第三十一页，共69页幻灯片P53蛋白是一种由蛋白是一种由393个氨基酸组成的含磷蛋白，位于细胞核。研个氨基酸组成的含磷蛋白，位于细胞核。研究发现在癌旁正常和鳞状化生的支气管上皮未见究发现在癌旁正常和鳞状化生的支气管上皮未见P53蛋白表达，蛋白表达，在在轻轻中中重度不典型增生、原位癌、浸润癌中，重度不典型增

40、生、原位癌、浸润癌中，P53蛋白表达的阳性蛋白表达的阳性率逐渐升高，表明率逐渐升高，表明P53基因与肺癌发基因与肺癌发生有关生有关对对P53基因的不同类型肿瘤中突变频率检测结果，鳞癌为基因的不同类型肿瘤中突变频率检测结果，鳞癌为63.6%，腺癌，腺癌为为65%，发现，发现P53蛋白在不同分化程度肺癌组织之间无显著性差异，但蛋白在不同分化程度肺癌组织之间无显著性差异，但在肺鳞癌组织中随分化程度降低在肺鳞癌组织中随分化程度降低P53表达却增强，认为表达却增强，认为P53蛋白与肺蛋白与肺鳞癌的关系可能较肺腺癌更为密切鳞癌的关系可能较肺腺癌更为密切。而且在肺鳞癌伴有和不伴。而且在肺鳞癌伴有和不伴有淋巴

41、结转移病例中，有淋巴结转移病例中，P53表达无显著性差异，而肺腺癌中伴有表达无显著性差异，而肺腺癌中伴有与不伴有淋巴结转移者与不伴有淋巴结转移者P53表达具有显著性差异，提示表达具有显著性差异，提示P53过度表过度表达与肺腺癌淋达与肺腺癌淋巴结转移有关巴结转移有关P53蛋白蛋白鳞癌鳞癌P53细胞核阳性细胞核阳性第三十二页，共69页幻灯片bcl-2蛋白是原癌基因蛋白是原癌基因bcl-2编码的一种能调节细胞死亡而不影响细编码的一种能调节细胞死亡而不影响细胞增殖的蛋白质，胞增殖的蛋白质，1993年年Pezzella等研究等研究bcl-2在在NSCLC患者中的患者中的表达与预后之间的关系。该实验采用表

42、达与预后之间的关系。该实验采用bcl-2特异性单克隆抗体及免疫特异性单克隆抗体及免疫组化染色测定组化染色测定80例肺鳞癌及例肺鳞癌及42例肺腺癌患者肿瘤组织中例肺腺癌患者肿瘤组织中bcl-2蛋白。蛋白。结果结果25%(20/80)的鳞癌患者及的鳞癌患者及12%(5/42)的腺癌患者的腺癌患者bcl-2蛋白阳性蛋白阳性，在邻近的正常呼吸道上皮中，在邻近的正常呼吸道上皮中，bcl-2蛋白仅存在于基底细胞。蛋白仅存在于基底细胞。bcl-2蛋白蛋白阳性患者的阳性患者的5年生存率高于阴性患者年生存率高于阴性患者(P0.1)，年龄为，年龄为60岁或岁或60岁以上岁以上bcl-2蛋白阳性患者的预后最好蛋白阳

43、性患者的预后最好(P0.02)。该研究表明，原癌基因。该研究表明，原癌基因bcl-2在肺癌患者中发生异常表达，其表达与预后有一定关系在肺癌患者中发生异常表达，其表达与预后有一定关系原癌基因原癌基因bcl-2蛋白蛋白第三十三页，共69页幻灯片肿瘤标志物的组合应用肿瘤标志物的组合应用-标志标志 CEA ARP CA19-9 CA72-4 CA125 CA15-3 SCC HCG 肿瘤肿瘤结肠结肠 胰腺胰腺 胃胃 食道食道 肝脏肝脏 胆囊胆囊 乳腺乳腺 卵巢卵巢 子宫颈子宫颈 绒毛膜绒毛膜 第三十四页，共69页幻灯片肿瘤标志物的组合应用肿瘤标志物的组合应用-标志标志 CEA ARP NSE SCC

44、CYFRA21-1 HCG PSA TPA Calcitonin HTG 肿瘤肿瘤肺（肺（SCLC） 肺（肺（NSCLS） 胚胎细胞胚胎细胞 前列腺前列腺 膀胱膀胱 甲状腺甲状腺 C-细胞细胞 耳鼻咽喉耳鼻咽喉 第三十五页，共69页幻灯片临床检测肿瘤标志物试验方法进展临床检测肿瘤标志物试验方法进展单相琼脂扩散法单相琼脂扩散法双相琼脂扩散法双相琼脂扩散法血凝法血凝法对流电泳法对流电泳法火箭电泳法火箭电泳法放射免疫法放射免疫法（RIA）免疫放射法免疫放射法（IRMA） ELISA法法斑点法斑点法金标法金标法荧光免疫法荧光免疫法化学发光法化学发光法（CLIA）电化学发光法电化学发光法（ECLIA）分

45、子生物学分子生物学第三十六页，共69页幻灯片双相琼脂扩散法双相琼脂扩散法单相琼脂扩散法单相琼脂扩散法抗体与凝胶混合抗体与凝胶混合后，装于小玻璃管中，待凝后，装于小玻璃管中，待凝固后固后加入抗原加入抗原溶液，使其扩散入凝胶与抗体反溶液，使其扩散入凝胶与抗体反应形成环状乳白色沉淀带应形成环状乳白色沉淀带 一种抗原或抗体混合物成分的定性与定量的分析方一种抗原或抗体混合物成分的定性与定量的分析方法法。通常采用。通常采用凝胶作为支持介质凝胶作为支持介质，让抗原与，让抗原与抗体混合物在介质中互相扩散，相互反应抗体混合物在介质中互相扩散，相互反应形 成 沉 淀 弧 线 或 沉 淀 弧 带形 成 沉 淀 弧

46、线 或 沉 淀 弧 带 第三十七页，共69页幻灯片血凝法血凝法细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异结合后，在适量电解相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应应。反应中的抗原称为凝集原（。反应中的抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素），抗体称为凝集素（agglutinin）根据凝集反应的原理，以后又发展建根据凝集反应的原理，以后又发展建立了，各种间接凝集试验、间接凝集立了，各种间接凝集试验、间接凝集抑制试验以及固相免疫吸附血凝试

47、验抑制试验以及固相免疫吸附血凝试验等新方法等新方法第三十八页，共69页幻灯片 胶乳微粒免疫检测技术胶乳微粒免疫检测技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的建立的-种非放射性均相免疫测定法种非放射性均相免疫测定法，可以，可以对各种微量的抗原物质和小分子对各种微量的抗原物质和小分子半抗原半抗原(加药物、团体激素等加药物、团体激素等)进行精进行精确的定量测定确的定量测定。根据特异性抗体致。根据特异性抗体致敏的胶乳微粒敏的胶乳微粒(一般为一般为直径约直径约1m的聚苯乙烯胶乳的聚苯乙烯胶乳)，与待测标本中的，与待测标本中的相应抗原相遇时发生凝集反应，胶乳相应抗原相遇时发生凝

48、集反应，胶乳凝集程度与被测物的浓度呈函数关系凝集程度与被测物的浓度呈函数关系，由此可测出标本中待测物的含量。，由此可测出标本中待测物的含量。测定方法主要有粒子测定方法主要有粒子计数法和浊度法两种计数法和浊度法两种 第三十九页，共69页幻灯片 对流免疫电泳对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是将是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。在双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。在pH8.6的缓冲液中，蛋白质的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极抗原带负电荷向正极泳动泳动；而；而抗体抗体大部分属于大部分属于Ig，由于分子量大，暴露，由于分子量大，暴露的极

49、性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时受电受电渗作用的影响向负极泳动渗作用的影响向负极泳动 (电渗是指在电场中液体电渗是指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动。对于一个固定固体的相对移动。琼脂琼脂是一种酸性是一种酸性物质，在碱性溶液中物质，在碱性溶液中带负电荷带负电荷，而，而与它接触的溶液与它接触的溶液带正电荷，因此液体向负极泳动带正电荷，因此液体向负极泳动，产生电渗产生电渗) 在在抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线淀线。由于电场的作用，限制了抗原、抗体的。由于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩散，而使其定

50、向泳动，因而增加了试验自由扩散，而使其定向泳动，因而增加了试验的灵敏度，并缩短反应时间。此法操作简便，的灵敏度，并缩短反应时间。此法操作简便，仅需仅需3060分钟，灵敏度比双向扩散高分钟，灵敏度比双向扩散高1015倍倍；但缺点是特异性；但缺点是特异性不如双向琼脂扩散高不如双向琼脂扩散高 第四十页，共69页幻灯片 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(rocketimmunoelectrophoresis，RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用胶中的抗体不发生移动，而在

51、电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼

52、脂中抗原浓度固抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待测抗体的含量定时，便可测定待测抗体的含量(即反向即反向火箭免疫电泳火箭免疫电泳) 第四十一页，共69页幻灯片竞争法竞争法双抗体夹心法双抗体夹心法间接法间接法 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验1971年瑞典学者年瑞典学者Engvail和和Perlmannn,荷兰学者荷兰学者Van Weerman和和Schuurs分别报道将免疫技术发展分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附试验为酶联免疫吸附试验)。最初发展的免疫酶测定方。最初发展的免疫酶测定方法。是使

53、酶与抗体或抗原结合，用以检查组织中法。是使酶与抗体或抗原结合，用以检查组织中相应的抗原或抗体的存在。后来发展为相应的抗原或抗体的存在。后来发展为将抗原或将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶染色抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶染色，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。这种。这种技 术 就 是 目 前 应 用 最 广 的 酶 联 免 疫 吸技 术 就 是 目 前 应 用 最 广 的 酶 联 免 疫 吸附试验，俗称附试验，俗称ELISA (enzyme linked immunosorbant assay) 第四十二页，共69页幻灯片 免疫印迹

54、技术免疫印迹技术免疫印迹免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质又称蛋白质印迹印迹(Western blotting)，是一种，是一种借借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。该。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。将含有目标蛋白技术。将含有目标蛋白(抗原抗原)的样品的样品首先用首先用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或非变性电泳或非变性电泳(Native-PAGE)等分离后，通过转移电泳原位转印等分离后，通过转移电泳原位转印至硝酸

55、纤维素膜或其它膜的表面，然后将至硝酸纤维素膜或其它膜的表面，然后将膜 表 面 的 蛋 白 质 再 用 抗 原 抗 体 反 应膜 表 面 的 蛋 白 质 再 用 抗 原 抗 体 反 应进行特异性检测进行特异性检测第四十三页，共69页幻灯片 免疫微粒技术免疫微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作为是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作为载体，包被上具有特异性亲和力的各种免疫活性物质载体，包被上具有特异性亲和力的各种免疫活性物质(抗原或抗体抗原或抗体)，使其致敏为免疫微粒，用于免疫，使其致敏为免疫微粒，用于免疫学及其他生物学检测与分离的一项技术。作学及其他生物学检测与分离的一项技

56、术。作为载体的微粒通常是以某种高分子有机单体为载体的微粒通常是以某种高分子有机单体为原料，经过乳液聚合、悬浮聚合及辐照聚为原料，经过乳液聚合、悬浮聚合及辐照聚合等高分子聚合方法制备而成。由于制备材合等高分子聚合方法制备而成。由于制备材料及工艺不同，微粒的种类繁多，现已制成料及工艺不同，微粒的种类繁多，现已制成惰性微粒惰性微粒如聚苯乙烯胶乳微粒、如聚苯乙烯胶乳微粒、活性微粒活性微粒如羧化聚如羧化聚苯乙烯微粒、苯乙烯微粒、磁性微粒磁性微粒及及标记微粒标记微粒(用同位素、荧用同位素、荧光素或酶标记光素或酶标记)等四大类微粒，数量多达几十种。将等四大类微粒，数量多达几十种。将制备好的微粒与抗原制备好的

57、微粒与抗原(或抗体或抗体)经物理吸附、化学偶经物理吸附、化学偶联及生物素亲合亲桥联法等致敏方法形成免疫微粒联及生物素亲合亲桥联法等致敏方法形成免疫微粒。广泛。广泛应用于各种可溶性大分子物质的检测、分离应用于各种可溶性大分子物质的检测、分离与纯化、细胞标记与识别与纯化、细胞标记与识别等。近年来，等。近年来，微粒技术微粒技术在核酸分子杂交、在核酸分子杂交、DNA与与RNA的分离及的分离及PCR等研等研究领域究领域亦显示出广阔的应用前景亦显示出广阔的应用前景 第四十四页，共69页幻灯片 免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术是是采用荧光素标记的已知抗体采用荧光素标记的已知抗体(或或抗原抗原)作为探

58、针，检测待测组织、细作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原胞标本中的靶抗原(或抗体或抗体)，形，形成的抗原抗体复合物带有荧光成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原就可以分辨出抗原(或抗体或抗体)的所的所在位置及其性质，并可利用荧光在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的测定的目的第四十五页，共69页幻灯片 免疫组织化学技术免

59、疫组织化学技术又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术性、定位、定量测定的一项新技术。把免。把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜包括荧光显微镜、电子显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质

60、、多肽如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等、酶、激素、病原体以及受体等) 。全过。全过程包括：程包括：抗原的提取与纯化；抗原的提取与纯化； 免疫动物免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化； 将显色剂与抗体结合形成标记抗体；将显色剂与抗体结合形成标记抗体； 标标本的制备；本的制备； 免疫细胞化学反应以及呈色反免疫细胞化学反应以及呈色反应；应； 观察结果观察结果 第四十六页，共69页幻灯片 免疫电镜技术免疫电镜技术( I m m u n e e l e c t r o n microscopy，IEM)是将抗原是将抗原抗体反应的特异性与电子显