纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年

1、制药有限公司第#页共16页纯化水需氧菌检查R2砥养基适 用性试验方案-2015年版药典-上上2018年纯化水需氧菌检查R2Ag养基适用性试验方案起草部门：Qd签名：日期：审核部门：Qca签名：日期：部门：质量 部签名：日期：批准质量负责人签名：日期：质量部 颁发本文件根据需要应分发于以下部门：01质量部下表用于记录修订/变更主要内容及历史文件编 号修订原因修订 日期按GMP（2010年修订版）及2015年版中国药典要求新制定制药有限公司第3页共15页1.2.3.4.5.6.概述验证目的和范围组织及职责验证进度计划表验证所需要的仪器设备的确认验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认7.验证

2、项目和验证方法7. 1试验菌株7. 2菌液制备1 .3培养基适用性检查7 . 4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）8 .偏差与漏项控制9 .验证报告会审制药有限公司第7页 共 16页制药有限公司第4页 共16页1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。 参照 中国药典 2015 版四部附录 1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的 R2A培养基进行适用性试验。 通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。2. 验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用 R2A 培养

3、基的适用性， 对其有效性进行评价， 保证检验结果的可靠性。本验证方案采用1批按GMF求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。3. 组织及职责3.1 验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。3.2 验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作， 并将该次的培训记录归档。制药有限公司第6页共16页3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量

4、负责 人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。3.4验证工作小组成员表姓名部门及职务职 责质量负责人/ 质量受权人负责验证方案及报告的 批准质量部QA且 长审核验证方案、审核验证 报告并协调工作质量部QC且 长负责验证方案审核、实 施、汇总报告及培训工作质量部QC负责验证方案起草、具体 实施、报告工作4.验证进度计划表本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8月至2015年9月。5.验证所需要的仪器设备的确认主要检验仪器设备确认表序 号仪器设备 名称型号编号生产厂家1电子天平2电热恒温 水浴锅制药有限公司第11页共16页3恒温培养 箱4压力蒸汽 灭菌锅5生物安全 柜6微生物限 度

5、检查仪7洁净工作 台检 查 人/ 日 期复核人/日期：6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1 .试验菌种检查表在耳J 丁 P菌种名称代码甘油菌种 批号菌种内 控缩写来源1铜绿假单胞菌CMC CB) 10104Pa中国食品药品检定研究院2枯草芽胞杆菌CMCCB) 63501Bs中国食品药品检定研究院检 查 人/ 日 期复核人/日期：6.2 试验所需的培养基检查J 丁 P名称生产厂家是否通过培养批号基适用性试验01胰酪大豆月东液体培养基口 是口否02胰酪大豆月东琼脂培养基口 是口否03R2A琼脂培养基口 是口否04R2A琼脂对照培养基口 是口否检 查 人/ 日 期复核人/日期：6

6、.3试剂在耳J 丁 P名称规格级别生产厂家批号01pH 7.0无菌氯化钠- 蛋白月东缓冲液干粉250g检 查 人/ 日 期复核人/日期：1.4. 试剂及培养基配制pH7.0氯化钠蛋白膝缓冲液（冲洗液）：称取 pH7.0氯化钠-蛋白膝缓冲液干粉16.09g。加水定容 1000mL微温溶解，滤清，分装至蓝盖试剂瓶，121c 湿热灭菌20min。制药有限公司第13页 共 16页胰酪大豆胨液体培养基： 取胰酪大豆胨液体培养基 29.8g ，加 1L 纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶， 121湿热灭菌 20min。胰酪大豆陈琼脂培养基：取本品 40g,加1L纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶， 121湿热

7、灭菌20min。R2A琼脂对照培养基：4.55g ，加 300 mL 纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶， 121湿热灭菌20min。R2A琼脂培养基： 取本品18.2g ,加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶， 121湿热灭菌 20min。7 . 验证项目和验证方法7.1. 试验菌种R2A 培养基的适用性试验所用的菌株为本实验室 -80 冰箱保存的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的甘油菌，均为第 2 代。7.2. 菌液制备7.2.1. 稀释液的配制pH 7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液：称取pH7.0氯化钠 -蛋白胨缓冲液干粉16.09g 。加纯化水定容1000mL微温溶解，滤清，分装至1000

8、 mL蓝盖试剂瓶中， 121湿热灭菌 20min。7.2.2. 菌液的制备从-80 冰箱取出铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌制药有限公司第10页共16页的第2代菌液，分别接种至10ml胰酪大豆月东液体培 养基中，3035c培养1824小时。同时分别划线 接种至胰酪大豆陈琼脂培养基中，3035c培养1824小时。菌液制备后若在室温下放置，应在 2小时内使 用；若保存在2 8C,可在24小时内使用。黑曲霉 抱子悬液可保存在 2 8C,在验证过的贮存期内使 用。7.3. .培养基适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌各不大于100cfu的菌液1ml分别注入90mm无菌平皿中，注入 15-20ml温度不超过

9、45c的供试R2A琼脂培养基， 混匀，凝固，每种试验菌各稀释度制备两个平板，置30-35。5到置培养3天，计数；同时，用 R2A琼脂对 照培养基替代被检R2A琼脂培养基进行上述试验。回收率=供试培养基组/对照培养组X100% 计数培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 日完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试培养 基组对照培 养基组回收率铜绿假单 胞菌1-2平均值(M 3制药有限公司第15页共16页枯草芽泡 杆菌12平均值（蜀13复核人试验人.7.4. 接受标准可接受标准为各株试验菌的回收率应在0.52范围内o8 .偏差与漏项控制：微生物限度检查方法验证过程中存在和发现的 任何偏差与漏项，都

10、应进行详细的记录，并应按公司 GMPC件偏差处理规程进行调查与处理。偏差调查与处理的报告和支持文件，应作为此确 认方案的附录部分。偏差和漏项j己录表偏差和漏项： 处理过程: 检 查 人/ 日 期复核人/日期：9 .验证报告会审验证报告会审表验证项目彳 名称：纯化水需氧菌左 生R2AW养基适用性 甫验方案名验证项 目负责 人验证起止 日期验证报 告编号验证结论：评价和建议：验证报告会审人签名起草部门：质量部QC且签名/日期：审核部门：质量部QC且签名/日期：部门：质量部QAia签名/日期：批准质量负责人签名/日期：制药有限公司第19页共16页验证报告月 日，验证小组根据批准的进行了相关的一系列验证2015 年 8 月 29 日至微生物限度检查方法验证文件对培养基适用性检查工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：1、 验证方案在实施过程中未做修改。2、 验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内。3、 验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。4、 验证结果符合设计要求和GMPM则要求，可以投入使用。5、 片组分或检验条件改变时须重新验证。以上情况，请验证委员会审批!验证小组：年 月