维生素C的定量测定—2-6-二氯酚靛酚滴定法

1、维生素 C 的定量测定 2 ， 6-二氯酚靛酚滴定法实验目的1. 学习定量维生素 C 的原理和方法2. 掌握微量滴定技术实验原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一， 缺乏时会产生坏血病， 因此，又称为抗坏血酸。 它对物质代谢的调节具有重要的作用， 近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。维生素 C 是具有 L- 系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。维生素 C 具有很强的还原性， 在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时， 维生素 C 易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维

2、生素 C 能将染料 2 ， 6 二氯酚靛酚还原成无色的还原型的 2 ， 6二氯酚靛酚，同时将维生素 C 氧化成脱氢维生素Co氧化型的2, 6二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用 2 ，6二氯酚靛酚滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C 尚未全被氧化时，滴下的 2 ， 6 二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化时，滴下的 2 ， 6 二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2 ， 6二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素 C 的含量

3、。其化学反应式如下：Cl抗坏血酸;二 o o H10 H H H脱氢抗坏血酸仪器、试剂（一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml ）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml ）、 微量滴定管、漏斗（二）材料、试剂1、新鲜蔬菜或新鲜水果2、1%草酸溶液1g草酸溶于100ml蒸储水中3、2%草酸溶液2g草酸?§于100ml蒸储水中4、标准维生素C溶液准确称取20mg纯维生素C粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml , 再取其中10ml稀释至100ml ,即得0.02mg/ml的维生素C溶液。在使用前临时配制5、 0.02%26 二氯酚靛酚溶液溶解 50mg2 ， 6 二氯酚靛酚于约 200m

4、l 含有 52mg 的 NaHCO 3 的热水中，冷后稀释至250ml ，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素 C 标准液标定其浓度。实验步骤（一） 2 ， 6 二氯酚靛酚溶液的标定：取 5ml 维生素 C 标准液及 5ml1% 草酸溶液于 50ml 的锥形瓶中， 用配制好的 2 ， 6 二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持15s 不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.1mg维生素C,由此可求出每ml2 ， 6 二氯酚靛酚溶液相当于维生素C 的 mg 数。（二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀）约 10 克

5、，于研钵中，加入等体积的 2% 草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。将匀浆液移入 100ml 容量瓶中，可用 1%草酸溶液帮助转移，加入 30%Zn （AC） 2和 15%K4Fe（CN） 6溶液各 5ml ，脱色，然后用 1%的草酸稀释至刻度， 充分摇匀 ， 静止几分钟后过滤。 （弃去最初流出的几毫升溶液）（三）用移液管吸取滤液5 或 10ml 于 50ml 的锥形瓶中，立即用标定过的2 ， 6 二氯酚靛酚溶液滴定， 直至溶液呈浅粉红色15s 不褪色为止。 记录所用染料的ml 数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过2min 。 （此步骤平行作2 3 次）（一） 计算维生素C含量（mg/100

6、g 样品）=（VT/W） X100式中：V为滴定样品所耗用的染料的平均 ml数T为1ml染料相当于维生素C的mg数W为滴定时所用样品稀释液中含样品的 g数注意事项1 .整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素 C被氧化。滴定过程一般不超 过2min。滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml ,若滴定结果不在此范围， 则必须增减样品量或将提取液稀释；2 .本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢；3 .提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与 2, 6二氯酚靛酚反应，但反 应速度均较维生素C慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能 一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s不褪色为终点；4 .若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、30%Zn (AC)2 和 15%K4Fe(CN)6 溶液等，本实验用 30%Zn (AC)2 和 15%K4Fe (CN) 6溶液脱色，若色素不多，可不脱色，直接滴定。5 .在生物组织和组织提取液中，维生素C还能以脱氢维生素C及结合维生素C 的形式存在，它们同样具有维生素 C的生理作用，但不能将2, 6二氯酚靛酚 还原脱色.6 . 2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而 1%的草酸无此作用 思考题1 .指出3-4种维生素C含量丰富的物质。2