第04章定量分析样品前处理

1、第四章第四章 药物定量分析与分析方药物定量分析与分析方法验证法验证第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法一、含卤素有机药物的分析一、含卤素有机药物的分析 含卤素有机药物系指药物分子结含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐盐或氢卤酸盐结构特点：结构特点：CX（一）卤原子的活泼性（一）卤原子的活泼性1. 1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系构有很

2、大关系（1）乙烯型卤和芳卤）乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼CH2CH XX（2）烯丙型卤和苄卤）烯丙型卤和苄卤 活泼活泼CH2XCH2CH CH2X（3）卤代烷型）卤代烷型 介于两者之间介于两者之间CH2CH (CH2)nX n22. 分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多，分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显活泼性增强更加明显3. 卤素的种类卤素的种类IBrClF常见的含卤素有机药物常见的含卤素有机药物CCH3OHCH3

3、CCl3CCl3Cl3C三氯叔丁醇三氯叔丁醇六氯对二甲苯六氯对二甲苯COOHIIINHCOCH3CH3CONH泛影酸泛影酸COOHIIINH C(CH2)4OC NHOCOOHIII胆影酸胆影酸COOHIIICONHCH3CH3CONH碘他拉酸碘他拉酸IH2NIICH2CHCOOHC2H5碘番酸碘番酸碘苯酯碘苯酯CHCH3(CH2)8COOCH2CH3I盐酸胺碘酮盐酸胺碘酮OCH2CH2CH2CH3COOCH2CH2N(C2H5)2IIHClHNNFNC2H5OCOOH诺氟沙星诺氟沙星OFFCH3HHOHCH3CCH2OCOCH3OOOCCH3CH3醋酸氟轻松醋酸氟轻松BrBrBrBrCCOO

4、HOSO3NaSO3NaOH磺溴酞钠磺溴酞钠（二）含卤素有机药物的分析（二）含卤素有机药物的分析XXC适当的处理直接回流后测定法直接回流后测定法碱性或酸性还原后测定法碱性或酸性还原后测定法氧瓶燃烧分解后测定法氧瓶燃烧分解后测定法1. 直接回流后测定法直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶液（或一定量过量的硝酸银滴定液）液（或一定量过量的硝酸银滴定液）后，加热回流使其水解，将有机结合后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（采用

5、银量法（Volhard法）测定。法）测定。 本法适用于含卤素有机药物结构本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物（如卤中卤素原子结合不牢固的药物（如卤原子和脂肪碳原子相连者）。原子和脂肪碳原子相连者）。 原理原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用化钠，然后用剩余剩余滴定法，即于水解滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量液中加硝酸酸化，再加入定量过量过量的的硝酸银滴定液，使硝酸银滴定液，使Cl-生成生成AgCl沉淀，沉淀，过量的硝酸银，以过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用为指示剂，

6、用硫氰酸铵液硫氰酸铵液回滴回滴定。定。 例三氯叔丁醇的测定例三氯叔丁醇的测定 ChP（2000）CCl3 C(CH3)2 OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2 CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010 12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 测定方法测定方法 取本品约取本品约0.1g，精密称定，精密称定，加加乙醇乙醇5ml溶解后，加溶解后，加20%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，加热

7、回流加热回流15min，放冷至室温，加水放冷至室温，加水20ml与与硝酸硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液，精密加硝酸银滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加，再加邻苯二甲酸二丁酯邻苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，密塞，强力振摇后，加硫酸铁胺指示液强力振摇后，加硫酸铁胺指示液2ml，用硫，用硫氰酸胺滴定液氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每结果用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于6.216mg的的C4H7Cl3O1/2H2O。反应摩尔比为1 3mlmg216. 6Lg216. 63molg47.186Lm

8、ol1 . 0ncMTT滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数c滴定液浓度，mol/LM被测物的摩尔质量，g/moln1mol样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即反应摩尔比为1 n 2. 碱性或酸性还原后测定法碱性或酸性还原后测定法 本法是将含卤素有机药物在碱性或本法是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反应，使有机流，药物产生还原裂解反应，使有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（然后采用银量法（Fajans法）测定。法）测定。 本法适用于测定结构中碘与苯环本法

9、适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。子的含卤素有机药物。 （1） 碱性还原后测定法碱性还原后测定法例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 ChP (2000) 取本品约取本品约0.4g，精密称定，精密称定，加氢氧化钠溶加氢氧化钠溶液液30ml与锌粉与锌粉1.0g，加热回流，加热回流30min，放冷，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤洗涤3次，每次次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰，洗液与滤液合并，加冰醋酸醋酸5ml与曙红钠指示液与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液滴，用硝酸

10、银滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg的的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流回流COONaN H2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O USP (24)、BP（1998） ChP(2000)收载的胆影酸、碘番收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。等均采用同法测定。 （2）酸性还原后测定法酸性还原后测定法 取本品的干燥品约取本品的干燥品约0.4g，精

11、密称定，精密称定，加锌加锌粉粉1g及冰醋酸及冰醋酸10ml，加热回流，加热回流30min，放冷，放冷，冷凝管用水冷凝管用水30ml洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤脱脂棉用水洗涤2次，每次次，每次20ml，洗液与滤液，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸银，用硝酸银滴定液滴定液(0.1mol/L)滴定。终点时黄色沉淀变为绿滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每色。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于19.031mg的的C11H12 I 3NO2。例例 碘番酸的测定碘番酸的测定 JP (13)3. 氧

12、瓶燃烧分解后测定法氧瓶燃烧分解后测定法 （1）原理）原理 氧瓶燃烧法：氧瓶燃烧法：将有机药物放入将有机药物放入充满氧充满氧气气的的密闭密闭燃烧瓶中进行燃烧瓶中进行燃烧燃烧，并将燃烧所，并将燃烧所产生的欲测物质产生的欲测物质吸收吸收于适当的吸收液中，于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定析方法进行鉴别、检查或含量测定NaClHClOClCNaOH2 溶液点燃 适用于含卤素、硫、氮、硒等适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析有机药物的分析 本法特点是简便、快速、破坏完本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样

13、品的分析全，尤其适用于微量样品的分析 （ 2） 仪器与材料仪器与材料 仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空空心，底部熔封铂丝一根，心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状下端呈螺旋状或网状称样用材料及称样称样用材料及称样 A. 固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. 液体样品液体样品 纸袋纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹再用无灰滤纸包裹吸收液吸收液 A. 作用：吸收液的作

14、用是将样品经作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态一定的便于测定的价态氧气氧气B. 吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液（3）操作方法）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速

15、地入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。，立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。样品的燃烧样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振口，燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置置15min，用水少量冲洗瓶

16、塞及铂丝，合，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。查或含量测定。 待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 35mg（微量分析）（微量分析） 150250ml 2030mg（半微量分析）（半微量分析） 300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊结或特殊结构的燃烧瓶构的燃烧瓶例例 磺溴酞钠的含量测定磺溴酞钠的含量测定 ChP (2000)BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOHB

17、rBrBrBrOSOHHOSONaOOONaOOO燃烧分解燃烧分解O2HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O2溴溴 取本品约取本品约0.2g，照氧瓶燃烧法（附录，照氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，选用）进行有机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以燃烧瓶，以0.4%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液10ml，浓过氧化氢溶液，浓过氧化氢溶液0.5ml与水与水10ml作为吸收液，俟生成的烟雾完作为吸收液，俟生成的烟雾完全吸入吸收液后，用水稀释至全吸入吸收液后，用水稀释至100ml，煮沸，煮沸5分钟，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝分钟

18、，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸银滴定液（酸银滴定液（0.1mol/l）20ml，摇匀，再加硫，摇匀，再加硫酸铁胺指示液酸铁胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴定液，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每校正。每1mL硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于7.990mg的溴的溴(Br)。例例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChP（2000）原理原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中

19、，和氢氧化钠反并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴- -醋酸溶醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点淀粉结合所显的蓝色消失即为终点 取本品约取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水与水l0ml为为吸收液，待吸收完全后，加溴

20、醋酸溶液吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾取醋酸钾10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰，再加冰醋酸使成醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振摇，放置数分，密塞，振摇，放置数分钟，加甲酸约钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流，用水洗涤瓶口，并通入空气流约约35min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02Mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校滴定至蓝色消失，

21、并将滴定的结果用空白试验校正。每正。每lml的硫代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于相当于1.388mg的的C19H29IO2。 滴定度的计算滴定度的计算 放大反应放大反应2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI321molNaI+Br2321molNaIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I 6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反应摩尔比为反应摩尔比为1 6mlmgncMT/38

22、8. 1634.41602. 098：140. 氧瓶燃烧法中的装置有A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 磨口软质玻璃锥形瓶C. 铂丝D. 铁丝E. 铝丝96：133（99x：138）选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 铂丝C. 普通滤纸D. 氢气 E. 无灰滤纸99：76氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼饱和液E. NaOH硫酸肼饱和液99：134. 氧瓶燃烧法可用于A. 含卤素有机药物的含量测定B. 醚类药物的含量测定C. 检查甾体激素类药物中的氟D. 检查甾体激素类药物中的硒E. 芳酸类药物

23、的含量测定二、含金属有机药物的分析二、含金属有机药物的分析 含金属的有机药物：含金属的有机药物：金属原子不与碳金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物金属盐或配位化合物 如如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁富马酸亚铁 有机金属药物有机金属药物：金属原子直接与碳：金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固原子以共价键相连，结合比较牢固 如如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利CCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2K+ 3H2O酒石酸锑钾酒石酸锑钾CCHCCOOOFeOMg(C

24、17H35COO)2硬脂酸镁硬脂酸镁富马酸亚铁富马酸亚铁CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOO-SbOHOSbO-OCHCHCHCCHOOCH2-OOHOHONa39H2O葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠NHCONH2AsOOHHO卡巴胂卡巴胂HgOCOCH3醋酸苯汞醋酸苯汞OCH2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3汞撒利汞撒利含金属有机药物定量分析前的含金属有机药物定量分析前的处理方法处理方法 不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法 直接测定法直接测定法; ;经水解后测定法经水解后测定法; ;经还原经还原- -汞齐化后测定法汞齐化后测定法 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分

25、析方法 湿法破坏湿法破坏( (硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法; ;硝酸硝酸- -硫酸硫酸法法; ;硫酸硫酸- -硫酸盐法等硫酸盐法等););干法破坏干法破坏（一）不经有机破坏的分析方法（一）不经有机破坏的分析方法1. 直接测定法直接测定法 适用于金属原子不直接与碳原子适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些相连的含金属有机药物或某些CM键键结合不牢固的有机金属药物。结合不牢固的有机金属药物。富马酸亚铁的含量测定富马酸亚铁的含量测定 ChP (2000) 取本品约取本品约0.3g，精密称定，精密称定，加稀硫酸加稀硫酸 15ml，加热溶解后，加热溶解后，放冷，加新沸过的放冷，加新沸过

26、的冷水冷水50ml与邻二氮菲指示液与邻二氮菲指示液2 滴，立即用滴，立即用硫酸铈滴定液硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴硫酸铈滴定液定液(0.1mol/L)相当于相当于16.99mg 。C4H2FeO4原理原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ NN3Fe2+ + e NN3Fe3+红色红色浅蓝色浅蓝色OCCHOFeHCCOOOOCCHOHCCO+Fe2+ 例例 葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠的的测定测定 ChP（2000） 取本品约取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水

27、形瓶中，加水100ml、盐酸、盐酸15ml与碘化钾与碘化钾试液试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于相当于6.088mg的的Sb。 K2ISbKI2Sb23H56423222OSNaNaI2OSNa2I如枸橼酸铁铵如枸橼酸铁铵的的测定测定 ChP（2000） 取本品约

28、取本品约0.5g，精密称定，置具塞，精密称定，置具塞锥形瓶中。锥形瓶中。加水加水15ml溶解后，加硫酸溶解后，加硫酸lml，加热至溶液由暗，加热至溶液由暗棕色变成淡黄色，放冷至约棕色变成淡黄色，放冷至约15，滴加高锰酸，滴加高锰酸钾试液至溶液显粉红色并持续钾试液至溶液显粉红色并持续5s，加盐酸，加盐酸15ml与碘化钾试液与碘化钾试液15ml，密塞，静置，密塞，静置3min，加水，加水50ml稀释后，用硫代硫酸钠滴定液稀释后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴滴定至近终点时，加淀粉指示液定至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。蓝色消失

29、，并将滴定的结果用空白试验校正。每每lml的硫代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于相当于5.585mg的的Fe。 2. 用硫酸水解后测定法用硫酸水解后测定法例例 硬脂酸镁的测定硬脂酸镁的测定 ChP（2000） 取本品约取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸，精密称定，精密加硫酸滴定液滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，煮沸至油滴澄清，继续加热继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙，放冷至室温，加甲基橙指示液指示液12滴，用氢氧化钠滴定液滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于相当

30、于2.016mg的的MgO。原理：原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 某些含汞有机药物，由于某些含汞有机药物，由于CHg键不牢固，在水溶液（冰浴）中滴加键不牢固，在水溶液（冰浴）中滴加硫酸使其水解，将有机汞定量转化成硫酸使其水解，将有机汞定量转化成硫酸汞，再用硫氰酸铵滴定液滴定。硫酸汞，再用硫氰酸铵滴定液滴定。例例 汞撒利的测定汞撒利的测定 取本品约取本品约0.5g，精密称定，加蒸馏水，精密称定，加蒸馏水10ml，置冰浴中，滴加硫酸，置冰浴中，滴加硫酸10ml，随滴随，随滴随搅拌

31、，至产生的沉淀复溶解，再加蒸馏水搅拌，至产生的沉淀复溶解，再加蒸馏水50ml，硫酸铁铵指示液，硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵，用硫氰酸铵滴定液滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫氰酸铵滴硫氰酸铵滴定液定液(0.1mol/L)相当于相当于25.29mg的汞撒利的汞撒利。3. 经还原经还原-汞齐化后测定法汞齐化后测定法 本法系在酸性或碱性溶液中，加本法系在酸性或碱性溶液中，加锌粉、加热回流，将药物中有机结合锌粉、加热回流，将药物中有机结合的汞还原析出金属汞，并与过量的锌的汞还原析出金属汞，并与过量的锌生成锌汞齐。将锌汞齐溶于硝酸后，生成锌汞齐。将锌汞齐溶于硝酸后，选用适当的方法测定

32、汞的含量，并换选用适当的方法测定汞的含量，并换算成含汞有机药物的含量。算成含汞有机药物的含量。 如醋酸苯汞的含量测定如醋酸苯汞的含量测定 取本品约取本品约0.5g，精密称定，置，精密称定，置100ml烧瓶中，烧瓶中，加水加水15ml，甲酸，甲酸5ml与锌粉与锌粉1g，附回流冷凝器，附回流冷凝器，煮沸煮沸30min。放冷，滤过，滤纸和锌汞齐用蒸。放冷，滤过，滤纸和锌汞齐用蒸馏水洗涤至洗液对石蕊试纸不显酸性反应。将馏水洗涤至洗液对石蕊试纸不显酸性反应。将锌汞齐溶解在稀硝酸锌汞齐溶解在稀硝酸(1 2)40ml中，置蒸气浴中，置蒸气浴上加热上加热3min，加尿素，加尿素0.5g和足够的高锰酸钾试和足够

33、的高锰酸钾试液至显桃红色。冷却后，加过氧化氢溶液脱色，液至显桃红色。冷却后，加过氧化氢溶液脱色，加硫酸铁铵指示剂加硫酸铁铵指示剂lml，用硫氰酸铵滴定液，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每滴定，即得。每1ml硫氰酸铵液硫氰酸铵液(0.1mol/1)相当于相当于16.84mg的的C8H8O2Hg。 （二）经有机破坏的分析方法（二）经有机破坏的分析方法 适用于金属原子与碳原子结合牢适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物。固的有机金属药物。1. 湿法破坏湿法破坏 （1 1） 硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法 本法适用于血、尿、组织等生物样品本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，

34、有机金属药物经破坏后，得到的的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态。无机金属离子一般呈高价态。 本法不能用于含氮杂环药物的破坏本法不能用于含氮杂环药物的破坏 （2） 硝酸硝酸- -硫酸法硫酸法 本法适用于大多数有机物质的破坏，本法适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态。破坏得到的无机金属离子均为高价态。 本法不能用于含碱土金属有机药物的本法不能用于含碱土金属有机药物的破坏破坏 （3） 硫酸硫酸- -硫酸盐法硫酸盐法 本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂，本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫

35、酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。 本法常用于含砷或锑有机药物的破坏，本法常用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态。破坏得到的无机金属离子多为低价态。 （4） 其它湿法其它湿法 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法高氯酸法 硫酸硫酸氧化剂法（过氧化氢法、高锰氧化剂法（过氧化氢法、高锰酸钾）酸钾） 破坏后，金属呈高价态破坏后，金属呈高价态2. 干法破坏干法破坏 适用于湿法不易破坏完全的有适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易挥发性的有机药物。不适用于含易挥发性金属（如汞、砷

36、等）有机药物的破金属（如汞、砷等）有机药物的破坏坏注意事项：注意事项：（1）加热或灼烧时，应控制温度在）加热或灼烧时，应控制温度在420以下以下（2）一定要灰化完全）一定要灰化完全（3）经本法破坏后，所得灰分往往不）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去易溶解，但不要轻易弃去第二节 药品质量标准分析方法验证 一、目的 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。 二、用途（一）药品质量标准起草时，分析方法需经验证。（二）药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。三、需验证的分析项目1. 鉴别试验；2

37、. 杂质定量或限度检查；3. 原料或制剂中有效成分含量测定；4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。 验证内容有：准确度、精密度验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性围和耐用性四、验证内容 （一）（一） 准确度（准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。收率表示。 测定回收率R（rec

38、overy）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M%100AMR 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M%100APMR 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。1. 含量测定方法的准确度含量测定方法的准确度 原料药可原料药可用已知纯度的对照品或样用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。行比较。 制剂制剂可用含己

39、知量被测物的各组可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。料中加入原料药对照品的方法。 如不能得到制剂的全部组分，可向如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较或与另一个已建立准确度的方法比较结果。结果。 中药分析的准确度一般用加样回中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在收试验衡量。中药回收率一般要求在95105%范围内，有些方法操作步骤范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在繁多时，可要求在90110%范围内。

40、范围内。RSD一般在一般在3%以内。以内。 2杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。熟的方法进行比较。 （二）（二）精密度（精密度（precision） 精密度精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（程度。用偏差（d）、标准偏差）、标准偏差(SD)、相对标准偏差相对标准偏差(R

41、SD)（变异系数，（变异系数，CV）表示。表示。 偏差（d）：测量值与平均值之差xxdi标准（偏）差（SD或S）12nxxSi相对标准（偏）差（RSD），也称变异系数（CV）%100 xSRSD 1. 重复性重复性 在相同条件下，由同一个在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用定的范围内，至少用9次测定结果评价，次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作被测物浓度当作100%，至少测，至少测6次进行次进行评价。评价。 2. 中间精密度中间精密度 同一实验室，不同时同一实验

42、室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备不同设备 3. 重现性重现性 不同实验室，不同分析人不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。性结

43、果均应记载在起草说明中。 （三）（三） 检测限（检测限（limit of detection， LOD） 检测限系指试样中被测物能被检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数，检测出的最低量。是限度试验参数，无需定量测定。常用无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。表示。1非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物，试验出能被用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。可靠地检测出的最低浓度或量。 2信噪比法信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空

44、白样品测出的信试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3 1或或2 1时的相应浓度或时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。注入仪器的量确定检测限。3数据要求数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。测限结果。 （四）定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 （五）专属性（五）专属性（specificity） 指有其指有其他

45、成分（杂质、降解物、辅料等）可他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。相互干扰程度的度量。 （六）（六） 线性线性 在设计的范围内，测试结果与试样在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求：应列出回归方程、相关数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。系数和线性图

46、。（七）范围（七）范围 指达到一定精密度、准确度和线性指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。或量的区间。（八）（八） 耐用性耐用性 指测定条件稍有变动时，指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。间在正常情况下实验结果重现性的尺度。 （九）应用（九）应用 1. 鉴别试验除专属性、耐用性外，鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求。其它都不要求。 2. 杂质的限量检查除专属性

47、、检测杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。杂质的限、耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。定量测定除检测限外，其它都要求。 3. 含量测定及溶出量测定除检测限、含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求。定量限外，其它都要求。（十）各种含量测定方法对效能指标（十）各种含量测定方法对效能指标的要求的要求 1. 1. 容量分析法：用原料药精制品容量分析法：用原料药精制品( (含量含量99.599.5) )或对照品考察方法的或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于精密度，相对标准差一般应不大于0.20.2；进行回收率试验。；进行回收率试验。

48、回收率一般在回收率一般在99.799.7100.3100.3之间之间。 2. 2. UV法法：用适当浓度的精制品进行用适当浓度的精制品进行测定，其测定，其RSD一般不大于一般不大于1。制剂的。制剂的测定测定，回收率一般应在，回收率一般应在98102之之间。间。 线性：线性：吸光度吸光度A一般在一般在0.20.7，浓度点浓度点n5。用浓度。用浓度c对对A作线性回归作线性回归处理，得一直线方程，处理，得一直线方程，r应大于应大于0.999(n5)，方程的截距应近于零。，方程的截距应近于零。 3. HPLC法：要求法：要求RSD2，回收回收率率98102之间。之间。 线性范围：用精制品配制一系列线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点标准溶液，浓度点n应为应为57，用浓，用浓度度c对峰高对峰高h或被测物的响应值之比进或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，行回归处理，建立回归方程，r应大应大于于0.999，截距应趋于零