不同提取方法赶黄草提取物清除DPPH自由基的作用研究

1、不同提取方法赶黄草提取物清除DPPH自由基的作用研究作者：贺晓华，许龙，谈满良，杜方麓，曾建国【摘要】 目的研究赶黄草提取物对DPPH自由基的清除作用。方法采用不同溶剂、不同提取方法制得赶黄草提取物，以抗坏血酸为对照，研究其对DPPH自由基的清除作用。结果不同溶剂提取物对DPPH自由基清除率强弱依次为95 %乙醇水丙酮，不同极性部分对DPPH自由基清除率强弱依次为醋酸乙酯部分正丁醇部分水部分石油醚部分，赶黄草提取物浓度达到一定浓度后与抗坏血酸对DPPH自由基清除能力相当。结论回流提取法是最适合提取赶黄草中有效成分的方法，赶黄草95 %乙醇回流提取物具有良好的清除DPPH自由基的能力，醋酸乙酯部

2、分清除DPPH自由基能力最强。 【关键词】 赶黄草； DPPH自由基； 清除率Abstract：ObjectiveTo study the extracts from Penthorum chinense Pursh on scavenging DPPH free radical. MethodsThe DPPH scavenging activities of Penthorum chinense Pursh extracted by different methods and different solvents were studied and compared with that of

3、 ascorbic acid. ResultsThe scavenging activity was decreased in the order of Penthorum chinense Pursh extracts obtained from 95 % ethanolwateracetone, and Polar different parts on DPPH free radical strong scavenging activity were part of ethyl N-butanol water petroleum ether. Penthorum chinense Purs

4、h extract and ascorbic acid in a certain concentration had the same DPPH free radical scavenging activity.ConclusionThe reflux is the best method, 95 % ethanol extract has good activity to scavenge the DPPH free radical, and ethyl acetate the most strong seavenging activity to DPPH free radical.Key

5、words：Penthorum chinense Pursh; DPPH free radical; Scavenging activity 赶黄草为虎耳草科扯根菜属Penthorum Gronvexl植物扯根菜Penthorum chinense Pursh的干燥地上部分1。赶黄草为苗族民间的草药，主要分布于四川、贵州、湖南等地，具有清热解毒、退黄利湿、活血散瘀、利水消肿之功效2。赶黄草中含有黄酮、有机酸、挥发油等成分，其中没食子酸和槲皮素为赶黄草中有效成分3，具有抗乙肝病毒和保肝的作用。对于赶黄草清除DPPH自由基的活性研究及其抗氧化研究尚未见报道。 衰老、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化

6、和自由基有直接关系，因为自由基可与生物体内的许多物质如脂肪酸、蛋白质等作用，夺取它们的氢原子，造成相关细胞的结构与功能的破坏，更重要的是其氧化产物和中间产物会伤害生物膜、酶、维生素、蛋白质及活细胞功能，其中一些还被认为是致癌物质，因此对消除自由基的探讨已得到普遍关注4。清除自由基的检测方法很多，如顺磁共振法、电子自旋共振法、化学发光法等，但这些方法大多需用昂贵的仪器，一般实验室难以应用。DPPH分析法是一种筛选自由基清除剂，评价抗氧化活性的简便方法5。当有自由基清除剂存在时，由于其与DPPH中电子配对使DPPH液吸收逐渐消失，DPPH液褪色程度与配对电子数成化学计量关系，因而可用分光光度法进行

7、定量分析。为了了解赶黄草的抗氧化性质，进而阐明其所具有的抗病毒保肝作用机制，本文对赶黄草提取物清除DPPH自由基的活性进行了研究。1 仪器与试剂 双光束紫外可见分光光度计TU-1901(北京普析通用仪器有限公司)，电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器有限公司)，电热恒温鼓风干燥箱 (北京市永光明医疗仪器厂)，超声清洗仪(昆明市超声仪器有限公司)，数显恒温水浴锅(江苏省荣华仪器制造有限公司)。 二苯基苦味酰基苯肼(DPPH)，购自sigma公司。 供试药材赶黄草2007-10下旬采自湖南浏阳，由湖南中医药大学周日宝教授鉴定为虎耳草科植物赶黄草Penthorum c

8、hinense Pursh。2 方法2.1 赶黄草有效成分的提取2.2 赶黄草提取物清除DPPH自由基能力的测定 清除率=1（AiAj）Ac100% IC50=50消耗的DPPH质量加入的试样溶液中溶质的质量3 结果3.1 DPPH吸收光谱与测定波长的确定 DPPH在溶液中具有典型紫红色，当它与能提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成浅色产物，使溶液的典型紫红色变浅。测定DPPH溶液在200600 nm之间的光谱图，由图1可知，DPPH溶液在醇-水体系中其327 nm和517 nm处吸光度都具有极大值，但517 nm处的极大值在加入槲皮素后降低较显著，故选用在95%乙醇体系下517 nm处DP

9、PH含量的变化来进行测定。1 回流提取法是最适合提取赶黄草中有效成分的方法，其具有操作简单，方法稳定的特点。 赶黄草提取物均具有清除DPPH自由基的作用，95 %乙醇提取物的清除DPPH自由基作用最强，以下依次为水、丙酮提取物。 不同方法提取物清除DPPH自由基的结果表明，在一定浓度范围内，赶黄草提取物浓度越大，其清除自由基能力越强。 在石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4个不同极性部分中，清除DPPH自由基能力最强的部分是在醋酸乙酯萃取部分。 赶黄草种质资源在四川、贵州、湖南都有分布，但目前其价值被开发利用(药用、保健)的还很少。本研究通过对赶黄草提取物中具有抗氧化作用的活性物质对DPPH自由基的

10、清除能力进行了考察，证明了赶黄草具有很强的抗氧化作用，这对于赶黄草的综合利用和进一步开发具有重要意义。【】 1院植物研究所中国高等植物属检索表M北京：科学出版社，1979：2052全国中草药汇编编写组全国中草药汇编，下册，第2版M北京：人民卫生出版社，2000：4803张 旭，杨 明赶黄草有效成分研究J成都中医药大学学报，2005，25（4）：46 4Meydani M Blumberg A. Antioxidants and aging immune responseIN Bendich A，Phillips M, Tengerdy Reds antioxidants Nutrients and immune functionsMNew York and London：Plenum press,1990：57.5Bors S W，Van beek T AScreening of plant extra