烟草及烟草制品 多种农药残留量的测定 气相色谱-串联质谱法

1、出口食品中氟啶虫胺腈残留量的测定高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法Determination of sulfoxaflor residues in foodHPLC method and LC-MS-MS method前 言本标准依据GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写、GB/T 20001.42001标准编写规则 第4部分：化学分析方法和SN/T 00011995出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定起草。本标准起草单位：中华人民共和国贵州出入境检验检疫局、贵州食品药品检验所、贵州省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：王兴宁、曹桂红、林

2、野、周贻兵、朱明、李洁、王缅。出口食品中氟啶虫胺腈残留量的测定高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法第一法 高效液相色谱法（HPLC）1 范围 本标准规定了出口食品中出口食品中氟啶虫胺腈残留量的测定高效液相色谱法（LC）本标准适用于糙米、棉籽、玉米及黄瓜中氟啶虫胺腈残留量的检测和确证。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必可不少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3方法原理样品中氟啶虫胺腈用乙腈提取，提取液盐析萃取、取上层清液经吸附剂净化，用高效液相色

3、谱法，紫外检测器检测，外标法定量。 4 试剂与材料除特殊要求外，所用试剂均为色谱纯（或者重蒸分析纯），存储于玻璃瓶中。4.1乙睛 色谱纯。4.2甲酸 色谱纯。4.3氯化钠 分析纯。4.4 柠檬酸钠 分析纯。4.5柠檬酸氢二钠 分析纯。4.6 N-丙基乙二胺键合固相吸附剂，即PSA吸附剂（primary secondary amine）。4.7 氟啶虫胺腈对照品(EprinomecEin)纯度98%。4.8 氟啶虫胺腈标准储备液(100g/mL)分别称取氟啶虫胺腈对照品约10 mg于100 mL容量瓶，用乙睛溶解稀释至刻度。-20下保存，有效期6个月。4.9 混合标准储备液(1g/mL)四种标准

4、储备液各1. 0 mL于100 rnI一容量瓶中，用乙睛稀释至刻度，4下保存，有效期3个月。4.10 标准工作液分别量取适量上述棍合标准储备液，用乙睛稀释成浓度为1,5,10,20,50,100和200 ng/mL的系列标准工作液。5 仪器和设备5.1 气相色谱-质谱/质谱仪：配电子轰击源（EI）。5.2 电子天平：感应为0.01 g和0.1 mg。5.3 均质器。5.4 振荡器。5.5 离心机：最大转速可达8 000 r/min。5.6 旋转蒸发仪。5.7 氮吹仪。5.8 具盖离心管：聚四氟乙烯，50 mL。5.9 粉碎机，配2 mm(10目）筛网。5.10 固相萃取装置。5 仪器5.1液相

5、色谱-串联四级杆质谱仪配有电喷雾电离源(Electray spray ionozition, E5I)5.2天平感量 0.01 g5.3分析天平感量0.0001g5.4离心机5.5振荡器5.6涡动仪5.7氮吹仪5.8组织匀浆机6 试料的制备包括:取制备后的供试样品，作为供试试料。取制备后的空白样品，作为空白试料。取制备后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。7分析步骤7.1 提取7.1 提取称取2 g样品于50 mL具盖离心管中，精确至0.01 g，加入10 mL水，手持离心管振荡直至样品与水充分混合后，静置10 min。分别移取10 mL乙腈于该离心管中，并置于漩涡混合振荡仪上

6、以2000 r/min 速率振荡2 min。将离心管在（-18-20）条件下冷冻保存10 min后，取出。向离心管中分别加入4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠，立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪上以2000 r/min 速度振荡2 min，然后以4000 r/min离心5 min。收集上层清液备用。7.2净化移取1.5 mL样品提取液上层清液于2 mL离心管中，加入150 mg无水硫酸镁和50 mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂，于漩涡混合振荡仪上以2000 r/min 速率振荡2 min，以4000 r/min 离心5 min，收集上层清

7、液，待检测分析。7. 3基质添加标准工作液的制备取空白试样按提取与净化进行处理，在洗脱液中加入0.5mL相应浓度的标准工作液，于40 氮气吹干，加0. 5 mL乙睛溶解。作为基质添加标准工作液，过0.45 µm滤膜，进HPLC分析。供液相色谱一串联质谱仪测定。7.4.1测定7.4.1.1色谱柱:C18，100 mm×2.1mm,粒径1.7µm，或相当者。7.4.1.2流动相:乙醇-水(40+60，v/v)。7.4.1.3 流速:0.2 mL/min。7.4.1.4柱温:40 。7.4.1.5 波长:260 nm。7.4.1.6 进样量:10µL。7.4.

8、2 液相色谱测定 分别取适量衍生化后的试样液和标准工作液进液相色谱测定，做单点校准或多点校准，以色谱峰的峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样液测定过程中应参插标准工作液，以便准确定量。标准品液相色谱图.见附录B中图1。8 结果计算和表述 动物组织中阿维菌素类药物及其代谢物的含量X，以质量分数毫克每千克(ug/kg)表示，按式(1)计算:Xi=ci×V (1）m式中：Xi试样中被测物残留量，单位为毫克每千克(mg/kg）；ci由标准曲线得到的样液中i的浓度，单位为微克每毫升(µg/L）；V样液最终定容体积，单位为毫升(

9、mL）；m试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g）。注：测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1 灵敏度本方法在大米、糙米、小麦、玉米及黄瓜检测限均为1.5 µg/kg，定量限均为5 µg/kg回收率9.2 准确度本方法在0.1mg/kg -5mg/kg添加浓度水平上的回收率为80%-120%。9.3精密度本方法的批内变异系数20%，批间变异系数镇30%。附录A(资料性附录)色 谱 图(1: 氟陡虫胺睛A；2: 氟陡虫胺睛B) 图A1. 0.5 mg/L的氟啶虫胺腈标准溶液色谱图(1: 氟陡虫胺睛A；2: 氟陡虫胺睛B)

10、图A2. 大米中添加0.5 mg/L的氟啶虫胺腈标准溶液色谱图图A2. 大米空白样品色谱图第二法 液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS)1 范围 本标准规定了出口食品中出口食品中氟啶虫胺腈残留量的测定液相色谱-串联质谱法(LC-MSMS)本标准适用于大米、糙米、小麦、玉米及大白菜中氟啶虫胺腈残留量的检测和确证。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必可不少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3方法原理样品中氟啶虫胺腈用乙腈提取，提取液盐析萃取、取上层

11、清液经吸附剂净化,用液相色谱一串联质谱法测定，色谱保留时间和质谱离子定性，外标法定量。 4 试剂与材料除特殊要求外，所用试剂均为色谱纯（或者重蒸分析纯），存储于玻璃瓶中。4.1乙睛 色谱纯。4.2甲酸 色谱纯。4.3氯化钠 分析纯。4.4 柠檬酸钠 分析纯。4.5柠檬酸氢二钠 分析纯。4.6 N-丙基乙二胺键合固相吸附剂，即PSA吸附剂（primary secondary amine）。4.7 氟啶虫胺腈对照品(EprinomecEin)纯度98%。4.8 氟啶虫胺腈标准储备液(100g/mL)分别称取氟啶虫胺腈对照品约10 mg于100 mL容量瓶，用乙睛溶解稀释至刻度。-20下保存，有效期

12、6个月。4.9 混合标准储备液(1g/mL)四种标准储备液各1. 0 mL于100 rnL的容量瓶中，用乙睛稀释至刻度，4下保存，有效期3个月。4.10 标准工作液分别量取适量上述棍合标准储备液，用乙睛稀释成浓度为1,5,10,20,50,100和200 ng/mL的系列标准工作液。5 仪器5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪配有电喷雾电离源(Electray spray ionozition, E5I)5.2天平感量 0.01 g5.3分析天平感量0.0001g5.4离心机5.5振荡器5.6涡动仪5.7氮吹仪5.8组织匀浆机6 试料的制备包括:取制备后的供试样品，作为供试试料。取制备后的空白样品

13、，作为空白试料。取制备后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。7分析步骤7.1 提取称取2 g样品于50 mL具盖离心管中，精确至0.01 g，加入10 mL水，手持离心管振荡直至样品与水充分混合后，静置10 min。分别移取10 mL乙腈于该离心管中，并置于漩涡混合振荡仪上以2000 r/min 速率振荡2 min。将离心管在（-18-20）条件下冷冻保存10 min后，取出。向离心管中分别加入4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠，立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪上以2000 r/min 速度振荡2 min，然后以4000

14、r/min离心5 min。收集上层清液备用。7.2净化移取1.5 mL样品提取液上层清液于2 mL离心管中，加入150 mg无水硫酸镁和50 mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂，于漩涡混合振荡仪上以2000 r/min 速率振荡2 min，以4000 r/min 离心5 min，收集上层清液，待检测分析。7. 3基质添加标准工作液的制备取空白试样按提取与净化进行处理，在洗脱液中加入0.5mL相应浓度的标准工作液，于40 氮气吹干，加0. 5 mL乙睛溶解。作为基质添加标准工作液，供液相色谱一串联质谱仪测定。7.4.1测定7.4.11色谱柱:C18，100 mm×2.1mm,粒径1.7

15、µm，或相当者。7.4.1.2流动相及梯度洗脱见表1。7.4.1.3 梯度洗脱程序。7.4.1.4 柱温:40 。7.4.1.5进样量:10µL。表1 流动相梯度程序及流速时间/min流速/(L/min)水（含0.1%甲酸）/%乙腈/%020090100.520010903.92001090420090107.4.2质谱条件离子化方式:电喷雾离子源，正离子扫描。毛细管电压:3.2 kV 。离子源温度:320 。脱溶剂气温度：300 雾化气:45 ml/min。辅助气：10 ml/min倍增器电压:650 V。碰撞气:氦气。其他参数见表2。表2 质谱参数设置名称母离子m/z子

16、离子m/z驻留时间（secs）碰撞能量（ev）锥孔电压（volts）氟啶虫胺腈2781740.415802781540.425807.4.3液相色谱-串联质谱测定根据样品溶液中农药的残留量，选择峰面积相近的标准工作液作为随行标样。对标准工作液和样品溶液等体积参插进样进行测定。氟啶虫胺腈的离子色谱图见图B.1至图B. 3 07.4.3.1定性测定通过液相色谱保留时间与串联质谱选择离子共同定性。待测样品的保留时间与标准样品保留时间的相对偏差不大于2.5%。且与标准品相比，样品中待测组分两个定性子离子的相对丰度比不大于20%。7.4.3.2定最测定分别取适量试样溶液和相应浓度的基质添加标准工作液，作单点校准，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中氟啶虫胺腈的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样液进样测定过程中应参插标准工作液，以便准确定量。8结果计算与表达 食品中氟啶虫胺腈的残留量X，以质量分数毫克每千克(mg/kg)式(1)计算:Xi=ci×V (1）m式中：Xi试样中被测物残留量，单位为毫克每千克(mg/kg）；ci由标准曲线得到的样液中i的浓度，单位为微克每毫升(µg/L）；V样液最终定容体积，单位为毫升(mL）；m试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g）。注：测定结果用平行测定后的算术