新型传染性法氏囊病疫苗研究进展.docx

1、新燹俳酷餐骚灸奈嘉巍蜀张文通I,魏凤2,沈志强（1.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；、f2.山东省滨州富牧兽医研究院，山东滨卅256600）摘要：传染性法氏食病（IBD）病毒变异株及超强毒株的频颇出现使IBD常规疫苗的免疫失败不断发生。因此，发展更为有效、安全的新型疫苗己成为迫切需要。本丈就近年来新型传染性法氏囊病疫苗研究进展作以综述。关键词：传染姓法氏食病病毒；新型疫苗中图分类号:S858.31243文献标识码：AIBD（InfectiousBursalDisease,IBD）是目前危害世界养禽业的三大主要传染病之一，免疫接种是主要的防治措施，传统预防措施主要是使用弱毒苗和灭

2、活苗来控制病毒感染。虽然传统疫苗在控制该病的流行方面发挥了很大作用，但由于变异毒株和超强毒株的出现，分子结构改变导致病毒致病力的改变以及宿主对疫苗免疫应答的改变，经常导致免疫失败，现有疫苗不能提供保护，这就促使人们研制新型疫苗。本文就对近年来新型传染性法氏囊病疫苗研究进展作以综述。1重组亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗是用DNA重组技术，将编码病原微生物保护性抗原的基因导入受体菌或细胞，使其在受体细胞中高效表达.分泌保护性抗原肽链。提取保护性抗原肽链.加入佐剂即可制成基因工程亚单位疫苗。收槁日期：2014-02-22*项目及名号：山东*现代农业产业技术像系家禽创新团队项目.SDAIT-13-01i

3、-09d作者简介：张文通（1979-）,男，汉族，助理研究员，主要从事噌用生物制品研究，hzndzwt°*通讯作者。文章编号:1673-1085（2014）03-0050-05二I世纪80年代中期至90年代初，澳大利亚科学家克隆了1BDV（InfectiousBursalDiseaseVirus,宿主保护性抗原及前体如何徵白的cDNA片段，并在大肠杆菌中表达，在体外获得了大量纯化的VP2和VP3产物，从而开创了研究IBD基因工程疫苗的先河"'oVakharia等所用杆状病毒表达了1BDV变异株GLS的大片段VP2/4/3,表达产物可以正确加工产生VP2或VP3,且能

4、与中和单克隆抗体结合，具有正确的构型。Snyder等问将标准毒株D78的中和性抗原决定簇的编码区插入到变异株GIS的VP2编码区，形成的嵌合基因克隆入杆状病毒载体，与杆状病毒重组后，除表达B69外，GIS株VP2和VP3的抗原决定簇均可正常表达。姜平等用pCYTEXPI表达质粒在大肠杆菌表达了南京IBDV野毒株VP2cDNA片段，并证明表达产物可与IBDV阳性血清结合，但对鸡的免疫保护性尚待于进一步研究。于涟等m在克隆了IBDVHZ96株VP2基因的基础上，首次利用家蚕杆状病毒（BmNPV）表达系统在家蚕细胞和幼虫中高效表达了VP2蛋白，动物试验初步证实用含有重组病毒的蚕血淋巴注射或口服可保护

5、IBDV强毒株对非免疫鸡的攻击。WangMY.KuoYY等同在杆状病扉表达系统中表达VP2区得到度组VP2（rVP2）蛋白，经纯化后免疫可使机体获得抗IBDV的保护性抗体；王笑梅等用酵母表达IBDVVP2免疫SPF鸡后.能够产生特异性抗休，并在一定程度上抵抗超强毒的致死性攻击，但还不能保护法氏囊组织完全不受侵害和损伤，免疫效果尚不如常规灭活疫苗；高玉龙等在杆状病毒表达系统中表达鸡IBDVVP2基因,Westernblot显示获得正确表达，攻扇试我表明，免疫3周龄SPF鸡，初次免疫后14d对IBDV超强毒株的攻击保护率为75%,2次免疫后14<1对其的攻击保护率为100%。到目前为止，国内

6、外市场上经销着两种商业化重组亚单位疫苗。以色列雅贝克（Abie）公司现在经销一种灭活的夏合疫苗（NDV+IBDV）,其中含有酵母表达的vvlBDVVP2蛋白质；中国青岛易邦生物工程有限公司也在经销一种传染性法氏囊病油乳剂亚氓位疫苗，疫苗含有大肠杆菌表达的IBDVVP2蛋白质。2重组活载体疫苗基因工程重组活载体疫苗是用基因工程技术将保护性抗原基因（目的基因）转移到载体中使之表达的活疫苗，具有亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗的高效性c将1BDV相关抗原基因更组到其它禽病毒中，所构建的重组活载体病毒可以诱导抗载体与1BDV双重免疫应答。BoyleDB等叩用禽痘病毒（FPV）与IBDVVP2构成重组体的

7、rFPV-VP2,接种鸡对澳大利亚分离株002/73有保护作用，俱这种保护性与免疫剂垃和途径有关0Darteil等商曾以重组火鸡疮疹病毒（HVT）为表达系统表IB0V的宿主保护性抗原VP2,对vvlBDV（veryvirulentInfectiousBursalDiseaseVirus,vvlBDV）起到60%的保护作用。Tsukamoto等网构建了表达VP2的重:组马立克氏活病毒（MDV）,构建二联苗，对同种vvMDV和vvlBDV攻击的SPF鸡的保护率分别为100%和55%。Tsukamoto等网还以重组马立克氏病毒（rMDV）和重组鸡痘病毒（rFPV）作为双载体系统制成1BI）重组活载体

8、疫苗对鸡群进行免疫，结果表明双载体系统重组疫苗更加稳定有效，可诱导对超强毒株的攻击保护。ShawI等网以禽痘病毒为表达系统表IBDV的宿主保护性抗原VP2,并进行保护实验，实验结果提示其保护作用很诃能是由于细胞介导的免疫作用所致，而旦保护作用与品种有关。刘小军等用间接免疫荧光证明重组鸡痘病毒町以再感染的鸡胚成纤维细胞中表达VP2蛋白；金宁一等网在重组鸡痘病毒中表达IBDVVP2与VP2/4/3基因，实骑证明构建的两个重组质粒在鸡胚成纤维细胞（CEF）中得到高效表达，但重组疫茁的保护率低于常规疫苗；Sheppanl等四在禽腺病毒（FAV-10）表达IBDVVP2基因，重组疫苗免疫SPF鸡，可以诱

9、导产生抗VP2抗体，并可抵抗IBDV的攻击；Phenix等问以西门利克森林病毒（SFV）为表达系统表达IBDV的VP2和多聚蛋白VP0,免疫后可诱导产生特异性抗体，但在部分鸡只中产生中和性抗体；程太平等构建了以禽多杀性巴氏杆菌弱准株G190E40载体表达1BDVVP2基因的活载体疫苗，攻毒试验表明该疫苗对IBDV标准强毒BC6/85攻击免疫保护率为75%；总金英等闵构建了以新城疫病毒载体表达IBDV超强毒株VP2基因的活载体疫苗，攻毒试验表明该疫苗对IBDV超强毒株攻击免疫保护率达90%以上。3基因缺失疫苗基因缺失疫苗是用基因工程技术将强毒株毒力相关基因切除构建的活疫苗.该疫苗安全性好、不易返

10、祖，尤其适于局部接种.诱导产生粘膜免疫力，其免疫力坚实，免疫期长。德国的Mundt等«2"己研制生产出不再表达VP5病毒蛋白的IBDV毒株°这些基因工程IBDV毒株是有活性的，但是作为活疫苗使用目前尚存在一定的局限性，因为VP5基因的缺失，毒株的生产速度严重减慢，这就意味着这些毒株已高度致弱，即使使用非常大的剂量也仅能保护SPF鸡抵御致死性感染。4病毒样颗粒（VLPs）Ecmandez-Arias等1221用痘苗病毒载体表达VP2/VP4/VP3时，首次发现表达产物町自动的切并装配为VLPs,这种VLPs不仅为IBDV抗体特异识别，与天然IBDV粒子也非常相象。R

11、ogel等将IBDVA片段置于大肠杆菌表达载体中.WesternblotW检测到所表达的病*蛋白，免疫电镜可以观测到vlp,纯化的蛋白可诱导机体产生抗体，并m抵抗IBDVGep5毒株的攻击。Kibenge与Hu凶等也分别用杆状病毒表达了IBDVA片段cDNA全长，表达产物同样可以fl动装配为VLPs,并有免疫反应性。Hu等进一步使VLPs上的VP2换成另一毒株的VP2从而产生嵌合VLPs,嵌合VLPs上的VP2C端还连上5个His使之通过固定金属离子亲和层析(IMAC)而被纯化。如前所述，理论上VLPs的免疫原性更佳，但作为疫苗的效果有待验证。Lee等同用杆状病毒表达的VP2蛋白可以自发形成V

12、LP,经过硫酸铉盐析、亲和层析等方法获得结晶体。5高压力失活疫苗田少敏等网研究了IBDV在高压力下的感染力和免疫原性.在温度不变F(0r),lBDV感染性随压力升高和压力作用时间增加而下降,180MPa作用3h、240MPa作用2h可使1BDV完全丧失感染力。经高压力处理过的IBDV免疫鸡，攻毒后无一发病，而非免疫对照蛆全部发病，显示处理的失活IBDV具有很强的免疫原性。荧光学研究显示随压力升高IBDV内源荧光光谱的峰位发生红移，而内源荧光偏振和散射光则下降，最可能的解释是发生了蛋白质亚基的解离。电镜观察高压力处理前后1BDV形态发生了明显变化.病毒粒子破裂、变形。6DNA疫苗DNA疫苗主要通

13、过在体外直接注射(或用基因枪表击)含抗原基因的特定质粒使机体产生高效体液和细胞免疫应答，其兴起称为“第三次疫苗革命”。DNA疫苗的出现，开拓了IBD疫苗研究的新纪元。DNA疫苗能同时诱导体液免疫和细胞免疫，对不同血清亚型毒株具有交叉保护，还具有嵌合免疫、多重免疫及联合免疫等优点网。匈牙利学者Fodor等回首次构建了IBDV-D78株和GP40株的VP2基因及D78株的VP2/VP4/VP3真核表达质粒，裸质粒直接以肌肉和腹腔两条途径接种SPF鸡，2周后加强免疫，结果发现含VP2基因的质粒DNA免疫组未能检测到特异性的中和抗体，攻毒不产生保护力；但编码VP2/VP4/VP3质粒能诱导产生免疫反应

14、，仅有55%的免疫鸡产生中和抗体，而攻击强毒的保护率仅达36%,而且需要大剂世的DNA疫苗(800ug/H)维持免疫反应。刘毅等团构建的以VP2和VP2/VP4/VP3为目的基因的DNA疫苗保护率低于常规的中强毒二价活苗，且被免疫鸡的法氏囊组织存在IBDV；步志高等1311以D78株制备的DNA疫苗免疫SPF鸡，结果表明该疫苗可诱导SPF鸡产生中和抗体，并形成对IBDV超强毒株致死的免疫保护，并有可能减缓法氏囊病理损伤程度；姜平等国构建的2种以VP2、VP3为目的基因的DNA疫苗对鸡产生的保护率为90%和10%；陈创夫等闵制备以VP2目的基因DNA疫苗免疫雏鸡，20d后在体内苗检测到特异性抗体

15、。王小泉凶将以VP2目的基因DNA疫苗及弱岸苗免疫鸡，结果显示两种疫苗联合免疫明显较用一种DNA疫苗高；2001年，李建荣等闵制备ZJ2000和JDI株的8种DNA疫苗，得出了使用ZJ2000株的以VP2/VP4/VP3制备的DNA疫苗免疫效果最好；于涟等闰研究表明灼IL-2质粒能增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗诱导的病毒血清中和抗体效价；Hulse等印似STC株的VP2基因制备DNA疫苗免疫2周龄锥焰，结果显示肌肉组织中表达了VP2蛋白及胸腺、脾脏和法氏囊中能扩增到VP2基因。参考文献：1 AzadAA,MckemNM,macreadieIG,etal.Physicochemicalandim

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