猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究概况.docx

1、动物医学进展,2013,34(1):115-118ProgressinVeterinaryMedicine猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究概况刘彪，成利，高云航，马红霞(吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118)摘要：猪繁殖与呼吸综合征是一种引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状的急性热性接触性传染病。该病是成胁养猪业的主要传染病之一，给养猪业带来极大危害。目前对该病缺乏有效的治疗手段，疫苗免疫接种是主要的防控措施。尽管市场上的灭活疫苗和弱毒活苗具有一定的保护作用，但都存在一定局限性。基因工程疫苗具有生产工艺简单，安全高效等优点，但仍处于实验室研究阶段。论文对猪繁殖与呼吸蜂合征疫苗研究进展进

2、行综述，以供参考。关键词：猪繁殖与呼吸综合征；猪繁殖与呼吸综合征病毒；疫.苗中图分类号:S852.659.6文献标识四：A文章编号：1007-5038(2013)01-0115-04收稿日期：2012-09-05基金项目：吉林省重大科技攻关项目(09ZDGG008);吉林省现代农业产业技术体系建设专项，吉林省教育厅女点项目(吉教科合字2009第58号)作者简介：刘彪(1987)，界.吉林梨树人，硕士研允生，主要从亨动物疫病防治研究.*通讯作者EffectofCalciumSignalTransductiononApoptosisXUHuan-cheng«ZHENGMing-xue,G

3、UShao-peng»BAIRui(.CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi,China)Abstract:Calciumionisoneofthemostcommonsignaltransducfactorsintheprocessofthelifethatplayanimportantroleintheregulationofapoptosis.Itsuggeststhattheintracellularcalciumconcentrationincreaseddu

4、etotheindirectresultinthelatestepofapoptosisinthepreviousstudies»butrecentstudieshavefoundthatcalciumplaysanimportantroleintheprocessofapoptosisatalllevelsthroughthefineregulationinavarietyofways,andconstitutescomplexregulatorynetworkofcalciumduringapoptosis.Thispapersummarizedtheresearchinthec

5、alciumsignaltransductionofapoptosisintherecentyears,fromtheperspectiveoftherelationshipbetweencalciumandendoplasmicreticulum,mitochondria*BeI-2familyproteinsandapoptosistodiscussandanalysetheeffectofthecalciumsignaltransductiononapoptosis.Keywords:calciummion；mitochondria；endoplasmicreticulum；Bcl-2f

6、amilyproteins；apoptosis猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)自20世纪80年代后期在美国发现以来，已菱延至世界各大猪场，给世界养猪业造成巨大损失。该病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV),属于尼多病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae')。根据PRRSV基因的变异程度将毒株分成欧洲型(1型)和北美型(2型)由于这两种亚型病毒核昔酸序列同源性只有60%左右，

7、所以在猪体内很难产生交叉保护。PRRSV的抗原变异较快，能逃避免疫系统的监视,继发感染并形成长时间的病毒血症，这些均给PRRS的免疫预防带来困难。PRRS还会造成机体的免疫抑制.同时存在抗体依赖性增强作用，在一定程度上限制了疫苗的研究目前对PRRS尚无有效的治疗措施，因此对PRRS的预防就显得尤为重要，市场上现在主要销售的是灭活疫苗和弱毒活疫苗，基因工程疫苗在实验室研究也取得长足的进展，要想投入生产还需大量临床试验，急需生产出安全高效的新型疫苗来预防PRRS的流行。1灭活疫苗国内外已经成功研究出具有良好免疫效果的PRRS灭活疫苗，在临床实践中得到应用。Plana-DuranJ等用西班牙毒株研制

8、的灭活疫苗免疫母猪.结果表明母猪繁殖水平、流产率、死胎数、产仔数等指标都有明显改善。但灭活疫苗灭活工艺有待提高，常规甲醛灭活剂由于自身的缺陷使之很难适应新型疫苗的发展，新型灭活剂的研究工作已经逐步引起科研工作者的注意，例如60Coy射线、二乙烯亚胺和盐酸聚六亚甲基版等我国目前生产的主要有CH-la株和NVDC-JXAI株的PRRS灭活疫苗,临床实践中具有一定的免疫保护效果。随着PRRS疫苗的研究发展，科研人员发现疫苗生产中加入佐剂能更好的促进灭活苗免疫效果，例如氢氧化铝胶、弗氏佐剂、油佐削、多糖等。邵珊等力将黄英多糖和白花蛇舌草多糖作为免疫增强剂联合猪高致病性PRRS灭活疫苗免疫仔猪，结果显示

9、黄芷多糖和白花蛇舌草多糖均能显著提高仔猪的CD3+、CD4LCD8-T淋巴细胞的百分比和特异性抗体滴度。王星晨等利用分离的PRRSV安徽株制备的PRRS油乳剂灭活疫苗进行免疫对比试验，攻毒试验表明自家苗的免疫效果整体要优于市场上销侈的疫苗。通过改善灭活方法，加入合适的佐剂，生产自家苗等措施,能有效提高PRRSV灭活疫苗保护率。灭活疫苗具有安全有效、不存在散布病毒和造成PRRS新疫源的危险、便于运输和贮存等优点o尽管灭活疫苗对母猪有较好的免疫效果，但存在免疫剂量大、免疫次数多、免疫产生周期长、对异源株免疫保护效果差等缺点3。而且灭活过程可能造成灭活疫苗抗原表位的缺失或免疫抗原减弱.以致不能产生足

10、够的保护水平。因此，通过灭活疫苗难以控制和根除PRRS在猪场的存在和流行，灭活疫苗目前主要应用于PRRSV阴性猪场的免疫。2弱毒活疫苗PRRS弱毒疫苗是将PRRSV强毒株接种易感细胞后经多次传代培养，使其毒力减弱至不具有致病性但能刺激机体产生免疫反应，从而对机体产生保护作用的一种常规疫苗。自从1995年勃林格公司首次推出商品化PRRS减毒疫苗以来，PRRS弱毒苗以其免疫保护期长、保护率高、免疫剂量小等优点备受专家学者和养殖业主的青睐。近年来国外学者对PRRS弱毒疫苗免疫保护效果进行不断改进，成效显著。EllingsonaJS等对以当地流行的MN184毒株为亲本构建的嵌合体疫苗和勃林格的Inge

11、lvac®PRRSMLV疫苗进行猪免疫对比试验，通过临床症状、剖检变化、抗体含量、平均增重械等进行比较，结果表明rMN184嵌合体疫苗免疫效果优于Ingelvac®PRRSMLV疫苗。国外最新研究还表明猪群接种PRRS弱毒疫苗可改善环境中PRRSV的含量,LinharesDL等将阳性猪群分为免疫组和对照组各自饲养在独立密闭的猪舍，利用PRRS弱毒疫苗免疫试验猪，结果表明免疫猪群血清和猪舍空气中病毒含量明显低于对照组。我国在弱毒疫苗研究方面也取得了突破性进展，冷雪等M将高致病性PRRSV致弱株TJM与耐热冻干保护剂混合制备弱毒活疫苗免疫猪，攻毒试验结果显示4周龄5周龄仔猪接种

12、该疫苗后对强毒攻击的保护率达80%以上。DwivediV等板应用结核分枝杆菌全细胞裂解液为佐剂联合PRRS弱毒疫苗滴鼻免疫猪，结果表明接种佐剂疫苗组的特异性中和抗体水平高于单独接种疫苗组的。尽管弱毒疫苗有以上优点，但也存在一定缺点，疫苗易被污染，需冷冻真空干燥和低温保存，不便运输，产生抗体水平高低不齐，疫苗毒株易变异，可能持续散播疫苗病毒,使得病毒在猪场中循环返祖，甚至引发PRRSV的传播。因此，许多国家建议在非疫区不得使用弱毒疫苗,只能在PRRSV阳性猪群中使用。3基因工程疫苗基因工程疫苗的优点是安全可靠、可人为地进行修饰、针对性强并且诃同时诱导体液免疫和细胞免疫等并°目前，学者们

13、主要是围绕PRRSV具有良好免疫原性的（）RF5（E蛋白）、（）RF6（M蛋白）、ORF7（N蛋白）基因进行研究。PRRS基因工程疫苗主要有DNA疫苗、亚单位疫苗和活载体疫苗。3.1DNA疫苗DNA疫苗不仅具有生产工艺简单、免疫剂量小、安全性相对较高等优点而且还对不同血清型毒株具有交叉保护作用，因此是PRRS疫苗重要的研究方向。温建新等们筛选出对猪具有较强免疫剌激活性的CpG-ODN,将成功构建的CpG-PVAX1-ORF5真核重组质粒免疫仔猪，试验结果表明免疫猪抗体长时间保持较高水平。近年来研究人员将保护性基因进行融合表达获得新的成就，ChiaMY等将ORF5-ORF6全基因和ORF5Lin

14、kerORF6分别连接pcDNA3.1真核表达载体进行免疫攻毒试验，结果显示pcDNA-（）RF5LinkerORF6质粒产生的免疫效果更显著，因此多个保护性抗原基因的融合表达有望成为我们的一个研究方向。由于DNA疫苗本质就是含有外源抗原基因的真核表达质粒，可能存在免疫效果的不确定性、个体差异性以及受到母源抗体的影响，而且外源基因刺激机体不断产生抗体，引起机体产生免疫耐受、免疫抑制等现象。DNA疫苗的研究面临着诸多挑战，还需进一步研究和诠释。3.2亚单位疫苗广义的亚单位疫苗是利用微生物的某种表面结构成分(抗原)制成不含有核酸、能诱发机体产生抗体的疫苗。新型亚单位疫苗主要是将病原体保护性抗原基因

15、导人体外表达系统高效表达后提取的保护性抗原蛋白。该疫苗便于规模化生产，安全性高，副反应减少等优点。PrietoC等物用大肠埃希菌为宿主的PRRSVGP5亚单位疫苗进行免疫攻毒试验，结果表明免疫组猪群临床症状明显减轻、中和抗体含址有所提高。但是大肠埃希菌中的目的基因表达后易形成包涵体，目的蛋白得不到修饰加工，限制了大肠埃希菌表达系统的发展。目前杆状病毒表达系统和酵母真核表达系统应用于PRRSV亚单位疫苗研究的主要表达系统。钱洪喜回将构建的pPIC9k-ORF7重组质粒电转入酵母细胞GS115中进行堂白表达，SDSPAGE结果显示表达产物大小约为15ku,Dotblot结果表明N蛋白能与阳性血清发

16、生反应，具有良好的反应原性。最近研究人员将目的基因转入植物中制备出有效的新型亚单位疫苗。HuZJ等S研制的含有PRRSVM蛋白的转基因玉米口服小鼠，试验结果表明小鼠产生较高水平的中和抗体和细胞因子。以上研究表明业单位疫苗具有很好的免疫效果和很大的发展前景，值得进一步研发。3.3活载体疫苗'将病原微生物的免疫相关基因整合到活载体病毒或细菌基因蛆中，然后将其接种到动物体内，外源基因在动物体内表达，刺激机体产生针对外源基因编码产物的特异性免疫应答，即活载体疫苗基于这种构想，对于PRRS活载体疫苗的研究也变得非常活跃。目前使用较多的活载体有猪传染性胃肠炎病毒、痘病毒、沙门菌等。CruzJLG等

17、用猪传染性胃肠炎病毒为载体表达野生型PRRSV的GP5和M蛋白，结果表明接种疫苗的动物比未接种动物产生更快、更强的体液免疫反应和细胞免疫反应。ShenGS等构建了能表达PRRSV0RF5-ORF3和IL-18-ORF5-ORF3重组鸡痘病毒活载体疫苗，对猪初免后21d加强免疫，初免后60d进行攻毒试验，结果表明重组病毒能有效刺激猪外周血中T淋巴细胞的增殖和干扰素的产生，通过ELISA检测和病毒中和试验都可以检测到针对PRRSV的特异性抗体。HanYW等他研制出能表达PRRSVORF7的重组减毒沙门菌活载体疫苗对猪进行免疫试验，利用蛋白印迹、酶联免疫吸附试验等方法检测抗体，结果表明试验猪口服OR

18、F7沙门菌活载体疫苗后产生了ORF7特异性IgG抗体和黏膜IgA抗体；同时减毒沙门菌活载体还可以产生自身的免疫原性。活载体疫苗在免疫效果方面可以同时启动机体细胞免疫和体液免疫，更具吸引力的是可以同肘构建多价以至多联疫苗，达到一苗防多病的效果。4展望PRRS疫苗已成为当下研究的热门领域。新兴的基因工程疫苗在实验室研究中取得飞跃性的进展，为临床应用奠定了基础。但研制安全高效的PRRS疫苗仍存在很多问题，如病毒的易变异性，保护性抗原的不确定性，活载体的不稳定性，免疫效果的评价指标不健全等1,未来PRRS疫苗的发展仍然艰辛。希望通过研究人员的不懈努力，在不久的将来能够用高效的疫苗控制PRRS的流行。参

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