口服灵芝孢子油对小鼠的扶正及减毒作用研究

1、口服灵芝孢子油对小鼠的扶正及减毒作用研究 【关键词】 灵芝孢子油；免疫,；环磷酰胺摘要：目的观察灵芝孢子油的扶正减毒作用。方法以正常和 H22荷瘤小鼠为对象，通过检测外周血 WBC数、骨髓有核细胞数、脾脏指数、胸腺指数来观察口服灵芝孢子油(2.5，1.25，0.625 g/kg)对于环磷酰胺（Cy）化疗及60Co放疗的减毒作用；通过小鼠碳廓清实验、血清溶血素测定实验检测药物对 H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果灵芝孢子油中高剂量组均可明显对抗由大剂量Cy、60Co照射造成的正常及荷瘤小鼠外周血WBC,骨髓有核细胞数，脾脏指数和胸腺指数下降 (P0.01, P0.05)。灵芝孢子油各剂量均可显着

2、提高荷瘤小鼠吞噬系数，中高剂量组可明显提高荷瘤小鼠的血清半数溶血值（P0.01,P0.05)。结论灵芝孢子油可减低 Cy和 60Co所致的骨髓抑制毒性，并可显着提高小鼠细胞和体液免疫功能。关键词：灵芝孢子油； 免疫 ； 环磷酰胺Effect of Ganoderma lucidum Spores Oil on Reducing the Toxicity of Radiochemotherapy and Enhancing the Function of Immune System in MiceAbstract：ObjectiveTo study the effects of G. lucid

3、um spores oil on reducing the toxicity of the radiochemotherapy and enhancing the function of immune system in mice. Methods Study the effect of G. lucidum spores oil (at the dose of 2.5，1.25，0.725 g/kg) on reducing the toxicity of the Cy chemotherapy and 60Co radiotherapy by detecting the number of

4、 the peripheral blood leucocyte, the number of bone marrow karyota;spleen index, thymus index of normal mice and H22-bearing mice by carbon clearance test and serum erythrocytolysin test. Results It showed that G. lucidum spores oil at high (2.5 g/kg) and middle dose (1.25 g/kg) could significantly

5、relieve the decrease of the number of the peripheral blood leucocyte, the number of bone marrow karyota, spleen index and thymus index of normal mice and tumopbearing mice by Cy at a high dose and 60Co (P0.01, P0.05). G. lucidum spores oil at each dose could significantly increase macrophage phagocy

6、tic index; and at high and middle dose it can significantly enhance the serum erythrocytolysin level of H22-bearing mice (P0.01, P0.05).ConclusionG. lucidum spores oil could relieve the myelosuppression caused by Cy and 60 Co; enhance the cellular and humoral immune function of tumor H22-bearing mic

7、e.Key words：G. lucidum spores oil; Immunity; Cy 灵芝是祖国医药宝库中的珍贵药品，我国最早的药学专着神农本草经将其列为“上品”。基于灵芝的确切临床治疗作用，近年来对其化学成分及作用机理进行了大量的研究，对灵芝的生殖细胞孢子的药用价值研究也日趋深入。以往的研究表明，灵芝孢子具有显着的防癌、抗肿瘤作用，其功效是灵芝子实体的6070倍。本实验所用灵芝孢子油是利用超临界 CO2流体萃取技术从灵芝破壁孢子中提取出来并浓缩富集而得，其各种有效成分（如三萜类）的含量均较传统提取方法显着提高。本实验主要研究其对荷瘤小鼠的免疫调节及对常规放化疗的减毒作用，以期为灵芝

8、孢子油的临床抗肿瘤辅助应用提供实验依据。1 材料 1.1 药物灵芝孢子油，由广州灵芝孢子油现代中药研究开发有限公司提供，批号：050601，临用前用豆油稀释成所用浓度。云芝孢内糖肽胶囊，南京老山药业股份有限公司，批号：050104，规格：0.5 g21粒，临用前用生理盐水成所用浓度。注射用环磷酰胺，上海华联制药有限公司，规格：200 mg/瓶，批号：020804。1.2 瘤株与动物H22小鼠肝癌细胞，由中科院上海药物研究所提供。ICR小鼠，雌雄各半，1822 g，由中国药科大学动物室提供,合格证号：苏动质 SCXK（苏）2002-0011。2 方法 2.1 灵芝孢子油对正常、H22荷瘤小鼠化疗

9、(Cy)的减毒作用 取 ICR小鼠60只，按移植性肿瘤研究法1接种 H22实体瘤，24 h后随机分组，实验设：空白对照组，豆油对照组(20 ml/kg)，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。另取 ICR小鼠60只，不接种荷瘤，分组给药方法同上。各组给药1次/d，共7次，各组于给药第4，5天（除空白组外），连续2 d ip Cy(100 mg/kg)，于停药后24 h，各组眼眶静脉取血，镜检外周血白细胞总数，同时摘取一侧完整股骨、胸腺、脾脏，分别测定骨髓有核细胞数，称胸腺、脾重，计算胸腺、脾脏系数，并进行统计

10、学处理(t检验)。 2.2 灵芝孢子油对正常小鼠、H22荷瘤小鼠60Co放疗的减毒作用取 ICR小鼠60只，按移植性肿瘤研究法1接种 H22实体瘤，24 h后除空白对照组10只动物外，其余50只小鼠进行60Co照射，剂量为500 rad；60Co照射后动物随机分为5组，实验设：空白对照组，豆油对照组(20 ml/kg)，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。另取 ICR小鼠60只，不接种荷瘤，除空白对照组10只动物外，其余50只小鼠进行60Co照射，剂量为500 rad；60 Co照射后动物随机分为5组，分组

11、及给药方法同上。各组均给药1次/d，共7次，于停药后24 h，各组眼眶静脉取血，镜检外周血白细胞总数，同时摘取一侧完整股骨、胸腺、脾脏，分别测定骨髓有核细胞数，称胸腺、脾重，计算胸腺、脾脏系数，并进行统计学处理(t检验)。2.3 灵芝孢子油对 H22荷瘤小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响取 ICR小鼠50只，按移植性肿瘤研究法1接种 H22实体型瘤。次日随机分为5组，实验设：豆油对照组(20 ml/kg)，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。共给药11次。于末次给药后24 h，尾静脉注射印度墨水，注入后1 mi

12、n及5 min从小鼠眼眶后静脉丛取血，立刻吹入 Na2CO3液中，于680 nm处比色，按下式计算廓清指数K及吞噬系数 值。所得数据进行统计学处理(t检验)廓清指数K=(logOD1- logOD5)/(t5-t1)吞噬系数=(体重/肝脾合重)(K)1/3 2.4 灵芝孢子油对 H22荷瘤小鼠体液免疫功能的影响取 ICR小鼠50只。按移植性肿瘤研究法1接种 H22实体型瘤。次日随机分为5组，实验设：豆油对照组(20 ml/kg) ig给药，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5,1.25,0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。共给药11 d，于第7天，各组小

13、鼠腹腔注入绵羊红细胞0.2 ml/只(20%)进行初次免疫，末次给药1 h后，取血，分离血清，测定并计算半数溶血值 HC50，进行组间t检验，比较差异的显着性。1 徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学，第3版M.北京:人民卫生出版社,2002:1758.2 Kastelan Z,Lukac J,Derezic D,et al.Lvmphocyte subsets,lymphocyte reactivity to mitogens,NK cell activity and neutrophil and monocyte phagocytic functions in patients with

14、 bladder carcinomaJ.Anticancer Res,2003,23(6D):5185.3 Van Sandick JW,Boermeester MA,Gisbertz SS,et al.Lymphocte subsets and T(h)1/T(h)2 immune responses in patients with adenocarcinoma of the oesophagus or oesophago gastric junction:relation to pTNM stage and clinical outcomeJ.Cancer Immumol Immunother,2003,52(10):617.4 Hadden JW.Immunodeficiency and cancer:prospects for correcti