六味地黄方对慢性铝暴露痴呆大鼠记忆功能保护作用的研究

1、六味地黄方对慢性铝暴露痴呆大鼠记忆功能保护作用的研究<    【关键词】   六味地黄方;慢性铝暴露;老年性痴呆;脂质过氧化;水迷宫【Abstract】 Objective To explore the effects of Liuw Ei dihuang on memory function of rat with chronic aluminum exposure and its mechanism. Methods Aluminum toxic model rats were produced by gastrointestinal

2、 tract of AlCl3.Morris water maze test，plasma chemistry index superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) were used to measure the memory function and its mechanism. Results Compared with control group, the memory function decreased, the MDA level was increased and the SOD activity was decr

3、eased in model group. Compared with model group, SOD activity was increased and MDA level was decreased, the memory function was improved in Liuw EI dihuang group. Conclusions Liuweidihuang can prevent the rat from chronic aluminum damage by increasing antioxidation enzyme activity and decreasing ne

4、uronal lipid peroxidation reaction.【Key words】 Liuweidihuang;Chronic aluminum exposure;Alzheimers disease (AD);Superoxide dismutase (SOD);Malondialdehyde (MDA) 阿尔茨海默病(AD)，是老年期最常见的中枢神经系统退行性病症之一，主要表现为学习记忆功能障碍和行为异常。近年研究证实，慢性铝暴露是导致AD的主要 环境 因素之一1。自由基所造成的脂质过氧化损伤可能就是慢性铝暴露发挥神经毒性作用的重要途径2。因此具有抗氧化功能的药物常被用来对抗铝中

5、毒导致的神经损伤。但是常用的合成抗氧化剂在动物模型实验中被发现有毒副作用，所以寻找安全、有效的抗氧化干预手段成为防治铝中毒的研究 热点 。六味地黄方为历代医家用于延缓衰老的代表药，其单味药中含有较强的抗氧化成分。因此，开发利用以六味地黄方为代表的天然植物药作为抗氧化剂，可能是防治慢性铝暴露导致AD的有效途径。本实验通过观察六味地黄方对慢性铝暴露痴呆大鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及Morris水迷宫空间学习记忆的行为学影响，为抗氧化类天然植物药 治疗 AD提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 动物和试剂 健康清洁级雄性SD大鼠40只，鼠龄10个月，体重450550 g

6、(由 中国 人民解放军军事 科学 院实验动物中心提供)。AlCl3·6H2O(MV254，由天津市耀华化工厂提供)，柠檬酸三钠(MV294.10，由天津市化学试剂一厂提供)，SOD、MDA(由南京建成生物工程研究所提供)，Morris水迷宫测试系统(RB100A，由北京新天地科技有限公司提供)。1.2 动物分组及模型的制备 将大鼠按体重随机分为4组：正常对照组、模型组、六味地黄方低浓度组(低浓度组)、六味地黄方高浓度组(高浓度组)，每组10只大鼠。正常对照组大鼠每天自由摄食普通饲料，其余大鼠每日摄取的鼠粮为普通饲料中加入结晶氯化铝，剂量为Al3+10 mg/kg。为促进铝的吸收，加铝

7、饲料中按111加入柠檬酸三钠。为排除柠檬酸盐的影响，正常对照组大鼠进食的普通饲料中也加入等量柠檬酸盐。取熟地黄24 g、山药12 g、山茱萸12 g、泽泻9 g、茯苓9 g、牡丹皮9 g，制成浓度为1.0 g/ml的六味地黄生药。正常对照组大鼠与模型组大鼠每天2 ml/只生理盐水灌胃，六味地黄方低浓度组大鼠每天2 ml/只六味地黄生药灌胃，六味地黄方高浓度组大鼠每天4 ml/只生药灌胃。各组大鼠均喂养6个月。1.3 大鼠血浆SOD和MDA水平的测定 大鼠喂养6个月后，经内眦静脉取血0.2 ml，离心取上清液，所测指标按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书进行测定。1.4 大鼠空间学习记忆功

8、能的Morris水迷宫行为学检测 Morris水迷宫为一个直径150 cm、高50 cm的黑色圆形铁桶，注水至深度16.5 cm左右，实验过程中水温保持在(26±1)。因测试对象为白色SD大鼠，测试环境背景为黑色，因此在水中放入碳素墨水，混匀，使水不透明。在水池内设两条虚拟垂直线，将水池均分为4个象限，分别为NE(第)、SE(第)、SW(第)及NW(第)象限，在SW(第象限)正中距池壁30 cm处放一个直径10 cm、高15 cm的圆形黑色平台，平台平面低于水平面1.5 cm左右，Morris水迷宫实验分为定位航行实验和空间探索实验两类。定位航行实验用于检测大鼠的学习能力，连续训练4

9、 d。训练第一天，撤掉水池中平台，让大鼠自由游泳(NE象限入水)2 min，观察大鼠游泳的速度及姿势，剔除不合格的大鼠。从第2天起放入平台，每天分上午、下午两个时间段(间隔8 h)对每只大鼠分别进行训练。分别从4个坐标象限内标定的入水点将大鼠面向池壁放入水中，观察并记录大鼠寻找并爬上平台所需时间(即逃避潜伏期)及直线搜索策略变化的趋势。空间探索实验考察大鼠对平台位置的记忆能力。定位航行实验后，即在第5天上午，撤去平台，取NE(第)象限为入水点，将大鼠面向池壁放入水中，记录其在120 s内游泳时各象限的记忆频度、时间分布及第一环点数。1.5 统计 学处理 所有数据均用SPSS15.0统计 软件 包进行处理，数据以x±s表示。 2 结 果 2.1 大鼠血浆SOD活性、MDA含量的测定结果 见表1，与正常对照组比较，模型组大鼠血浆SOD活性明显下降、MDA含量显著增高(均P<0.01);与模型组比较，六味地黄方低浓度组、高浓度组SOD活性增高，MDA含量明显下降(均P<0.05);与正常对照组比较，六味地黄方低浓度组及高浓度组大鼠SOD活性下降、MDA的含量增加(P<0.05)。结果表明，慢性铝暴露