人类单基因病和染色体病遗传资源

1、人类单基因病和染色体病遗传资源标准化整理、整合的技术规程中国人类遗传资源平台项目组 2007年12月 前 言 人类单基因病和染色体病遗传资源是我国重大疾病遗传资源的重要组成部分。现代医学已经进入生物医学时代，多种疾病的发生都与遗传因素相关。单基因病和染色体病的研究已成为人类疾病致病机制研究的重要切入点之一。规范的人类单基因病、染色体病遗传资源库将为我国人类重大疾病研究提供重要资源平台。我国自2004年起，就开始陆续有多家单位参与人类遗传资源平台的建设，但迄今尚无一个统一的单基因病、染色体病的标准化的整理和整合的技术规范。根据目前的工作积累，我们参考国际相关做法，结合中国已经制定的人类遗传资源相

2、关技术规范及国内外其他领域技术规范，制定本规程。该规程的制定为进一步完善人类单基因病和染色体病遗传资源库，从技术标准和安全标准方面提出了原则性要求。目 次前 言. . .II1.范围. .12.规范性引用文件. .13.术语和定义. .14.单基因病和染色体病资源库课题承担单位的基本条件.25.组织管理. . . . . . . . . . . .35.1 管理. . . . . . . . . . . .35.2 一般管理. .36.人员资质和培训. .37.实验室环境. . . .48.设备. . . . . . . . . . . . .48.1 校准、检测和设备保养. . . . .

3、. . . . .48.2 使用的授权. . . . . . . . . . .48.3 监控. .49.工作程序. . . . . . . . . . . .49.1 采样前准备. . . . . . . . . . .49.2 样本采集. . . . . . . . . . .59.3 样本标识. . . . . . . . . . . .59.4 DNA的提取. . . . . . . . . . .6.9.5 样本保存和使用.610.计算机信息化管理. . . . .611 质量核查及质量评价. 611.1 目的. . . . .611.2 职责. . . .611.3 执行. .61

4、1.4 规划和文档. . . .711.5 质量控制系统. . .712 实验室安全. . . .713 操作方法. . .713.1 政策和规范. . . . . .713.2 可用性. . . . .713.3 方法和程序文档. .714 信息记录系统. . . . . . . . . . .714.1 样品信息记录. . . . . . .714.2 保护. . . . . .714.3 保留. . . 815 人类单基因病和染色体病遗传资源的保密要求. . .8参考文献. . .81 范围 本规范规定了人类单基因病和染色体病遗传资源标准化整理和整合的技术标准和管理规范。本规程内容包括人

5、类单基因病、染色体病遗传资源库参与单位的基本条件、人员资质及培训、建筑和设施、仪器设备、资源采集范围和分类、采样前准备、血样采集、标本标识、标本保存和使用、计算机信息化管理、质量管理体系等。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本规程的引用而成为本规程的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规程；然而，鼓励根据本规程达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本规程。GB/T 1.1-2000 标准的结构和编写规则GB/T 2261.12261.7-2003 个人基本信息分类与代码GB15980-1

6、995标准ICD-10 WHO国际疾病分类编码ICD-10 中国修订版IND 国际医学科学组织理事会（CIOMS）遗传资源的共享原则3.术语和定义 3.1 人类遗传资源 human genetic resource 人类遗传资源是指含有人体基因组、基因及其产物的器官、组织、细胞、血液、制备物、重组脱氧核糖核酸（DNA）构建体等遗传材料及相关的信息资料。3.2 单基因病 monogenic disease，single gene disease 指受一对主基因影响而发生的疾病，遗传方式符合孟德尔定律，因此也称孟德尔遗传的疾病。3.3 染色体病 chromosomal disorder 3.3.1

7、 染色体病 指先天性染色体数目异常或结构畸变而引起的疾病。染色体异常表现为具有多种畸形的综合征，因此又称染色体综合征。 3.3.2 核型 一个体细胞中的全部染色体所构成的图像即称核型（karyotype）。Denver体制确定的正常人核型的基本特点是识别人类各种染色体病的基础。按照Denver体制，将待测细胞的染色体进行分析和确定是否正常以及异常特点即称核型分析（karyotype analysis）。3.4 知情同意 informed consent保证被收集者了解并理解研究的目的和内容，并自愿同意参加实验的原则。知情同意具有国际性，是对所有进行人体研究或人体取样调查的研究人员的伦理要求。在

8、以人为研究/试验对象的科研领域，收集者必须获得研究对象/参与者的知情同意，保护被收集者合法权益的同时保护收集者免予诉讼。3.5 知情同意书 informed consent form 是每位被收集者表示自愿参加某一项试验而签署的文件。知情同意的具体体现实知情同意书的签署。知情同意书由收集者和被收集者共同签署，一式两份。正本由收集者保存，被收集者保存副本。3.6 设备 equipment 非消耗性有形财产的某物品，其使用寿命超过一年，并且其单位数量的获得成本等于或大于5000元人民币或者该组织设定的资产估价金限额（满足其一即可）。3.7 研究 research 旨在增进对研究对象的知识或理解的系

9、统而广泛的研究，特别针对新知识的应用以满足公认的需要，或系统地应用现有知识生产有用的材料、设备和方式或方法，包括设计、开发和原型改造、新工艺的研制生产。3.8 条形码 是指由一组按一定编码规则排列的条、空符号，用以表示一定的字符、数字及符号组成的信息。3.9 条形码系统 是由条码符号设计、制作及扫描阅读组成的自动识别系统，现已应用在国防、公共安全、交通运输、医疗保健、工业、商业、金融、海关及政府管理等多个领域。4 单基因病和染色体病遗传资源课题承担单位的基本条件4.1 必须是专门从事人类单基因病和染色体病相关研究的单位4.2 必须是省级以上的计划生育研究所或临床3等甲级医院的遗传病研究中心4.

10、3 必须建立与其业务相关的组织结构和工作流程4.4 具有符合储寸1万份单基因病血样标本、DNA样本及染色体玻片标本的高清洁度空间4.5 已经收藏了大量样本资源4.6 具有相关研究和计算机网络管理仪器设备4.7 具有可靠的单基因病和染色体病的标本来源4.8 具有多渠道筹集资金和运转经费的能力4.9 必须经过遗传病研究相关伦理委员会讨论通过5 组织管理5.1 管理国家对人类遗传资源实行分级管理，统一审批制度。各种类型人类遗传资源库及其合作机构在遵守中华人民共和国有关法律、法规及规章制度的前提下进行机构之间的合作。明确各自拥有的权力和义务，并履行其义务与职责。遗传资源库的管理包括以下方面：机构或组织

11、遗传资源库建立、样本保存及安全服务范围5.2 一般管理根据职责权限及范围，所有工作人员按要求履行各自的职责。按照试验室程序手册执行所有程序，不同资源库的试验程序应由各自特点。6 人员资质和培训遗传资源库任职人员资格及培训主要包括以下几个方面内容：工作人员有多种层次，不论那种层次的工作人员，只有经过严格的职业培训后，才允许上岗；工作人员要根据所服务的资源库特点，经过特殊的职业培训，并接受每年的继续教育的培训。使用设备等的授权证明资料也要记录在培训记录中。新职员需经过使用培训，或经资深职员的指导后才可使用高压灭菌器、冻干设备、低温储藏设备及生物安全柜等必须经过专门培训才能使用的设备。7 实验室环境

12、 提供一个良好的环境是每个遗传资源库建立的前提条件，这个环境应保证免除样本的污染，并方便的进行准确的测量和记录。安排专职的工作人员定期检查实验室是否符合样本保存的各项要求，主要参照实验室生物安全通用要求。8 设备8.1 校准、检测和设备保养 保存所有设备的详细目录及使用登记。在保养合同中记载所有设备的主要条款，并保留记录。 为保证可重复性，所有测量器具和设备都要定期校准。质量管理机构，负责建立和实施校准项目（根据各自实验室程序手册）。资源库的所有设备的使用和维护，应与制造厂商的指南/手册中的说明相一致。操作和保养的指导说明一般要保存在设备的附近，以便查阅。测量装置由有资格的服务机构及校准工程师

13、来校准。8.2 使用的授权 所有的操作人员都要经过全面的设备使用和培训，并保存在他们个人的培训记录中。8.3 监控 任何损坏的设备，或显示令人怀疑的结果、有故障，或有缺陷不宜使用的设备，都要立即停止使用，并在该设备上迅速贴上标签或做上标记，在修理好重新生效之后才能重新投入使用。9工作程序9.1 采样前准备临床诊断和家系调查 对先证者进行全面的临床检查，并根据检查结果做出诊断。对先证者进行至少三代以上的家族本病发病史调查，直到追溯到最早本病患者为止。对现存全部患者进行临床检查和诊断，通过询问尽可能全面了解已故患者的临床特征，并绘制详尽的家系系谱图，判断遗传方式。 填写健康状况调查表 需要采样的所

14、有家系成员填写健康状况调查表。逐项填写，字迹清楚，调查表填写内容真实、准确。9.1.3 签署知情同意书 研究者仔细为患者及其家人对疾病的表现、遗传方式、研究的目的、对患者及其家人可能从研究中获得的权益进行讲解。参与者或参与者的合法监护人（或代理者）在清醒、正常的精神状态下，仔细阅读知情同意书，同意后签字或按手印。同时告知供体的隐私权将被严格保密，未经同意不会泄露有关信息，并告知参与者样本将储备于国家人类重大疾病遗传资源数据库，可能被国内非商业性研究使用。9.2 样本采集 采血器械 采血所需医疗用品必须符合GB15980-1995标准产品的要求。 血样采集量 每个个体一次采集量5-10ml,可根

15、据研究需要酌情增减。 采血程序 采血前，采样人员登记收集管批号，在标签处填写样本编号，并与表格中填写的被采集人信息进行核对；无菌操作采集周静脉外周血。 产前诊断样本 样本为孕9-11周绒毛或孕16-18周羊水细胞，由专门产科医生抽取。羊水细胞DNA不用于数据库收藏。 填写样本登记卡 根据数据库要求，详细填写标本登记卡，并进行电子信息录入。9.3标本标示 采用条形码技术对样本进行标示 外周血样本、 DNA样本和染色体标本都以条形码进行标示，标记号与标本的电子档案一致，点击时，可获悉样本所有信息。 条形码标签技术要求标签的底色应为白色并全部与遗传资源标本存放管管壁牢固结合；标签信息应采用实体黑色字

16、体，通过打印或印刷产生；标签材质能防水、耐低温、耐磨损。 贴签 单基因病和染色体病遗传资源的标识是通过贴签活动实现的，贴签活动作为一项关键活动，必须将发生错误的潜在因素降低到最少。负责贴签的人员应经过充分培训和评估。应建立和执行核对制度，并检测一定百分比的遗传资源存放管以保证贴签过程准确无误。 留样 所有标本的标签都应该存档保留。 标识管理建立单基因病和染色体病遗传资源标本标识的管理程序，以确保每一份标本均可通过条形码追溯到被采集者基本信息资料、健康状况、疾病信息、表型、基因型或核型、标本存放地点、目前使用情况等信息。单基因病和染色体病遗传资源标本标识管理的关键控制点包括标签的材质、标签的内容

17、、条形码系统的应用以及贴签管理。9.4 DNA的提取 采用常规酚氯仿法或全血基因组DNA提取试剂盒抽取外周血或绒毛组织的基因组DNA。9.5 标本保存和使用 外周血、绒毛及羊水细胞沉淀保存在-80冰箱，DNA样本保存于-20冰箱。10 计算机信息化管理10.1 应建立和使用单基因病和染色体病遗传资源标本库计算机管理系统，对从标本采集、标本信息、入库、使用情况和质量管理全过程实行计算机管理。10.2 建立和实施计算机管理系统使用的风险分析、培训、确认、使用以及使用后的评估程序。10.3 建立和实施标本信息储存、标本保存、标本检测和计算机管理系统发生意外事件的应急预案和恢复程序，确保标本库正常运转

18、。11质量核查及质量评价11.1 目的 人类单基因病和染色体病遗传资源库的管理者要定期核查，以保证资源库建设政策和程序得以执行。所有工作至少每年核查一次。另外每年都要有一次独立的核查。质量管理系统和实验室程序的年度审查也要进行。11.2 职责 质量负责机构负责对实验室程序的效力进行评述，并确保记录评述及所有评价活动得以贯彻执行；另有一位独立的工作人员进行独立的核查；并且验证核查过程中所要求的矫正活动在规定的时间内是否全部完成。在资源库监管部门的安排下，另一个相关资源库的工作人员对本资源库的质量管理系统和实验室程序进行年度核查。11.3 执行 根据人类单基因病和染色体病保存样本的特点，在本实验室程序手册中对质量核查和质量系统评价工作的安排进行详细论述。11.4 规划和文档 由质量负责机构掌管所有的核查记录、评价和执行记录。11.5 质量控制系统 除了核查和评价以外，在各自实验室程序手册中详细论述的方法和程序质量检查也要贯彻执行。12 实验室安全12.1 应遵从实验室生物安全通用要求（G B19489-2004）和微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）的要求。12.2 建立和实施实验室安全与卫生管理程序，覆盖从标本采集到标本贮存整个过程。12.3 限制非授权人员进入遗传资源标本库。13 操作方法13.1 政策和规范 单基