毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用

1、毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用【摘要】 目的 探讨毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用。方法 用流感病毒亚甲型鼠肺适应株 A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，采用ELISA方法测定肺组织悬液中的IL-4 和IFN-的活性水平，观察毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用。结果 毒热平注射液各剂量组小鼠肺匀浆的IFN-活性水平明显升高而IL-4的活性显著下降；毒热平注射液的0.33 g /(kgd)和0.17 g /(kgd)剂量组对流感病毒感染小鼠具明显的保护作用。结论 毒热平注射液能通过调节细胞因子的活性，纠正Th1/Th2细胞失衡而发挥抗

2、流感病毒作用。 【关键词】 毒热平；流感病毒；Th1/Th2；细胞漂移Abstract: Objective To explore the antivirus effect of Dureping Injection in mice. Methods The murine pneumonia model was establish by influenza virus strain A/FM/1/47 (H1N1).The bioactivity of interleuking-4 (IL-4 ) and interferon- (IFN-) in the murine lung was de

3、tected by ELISA.The murine Death Rate was observed. Results Dureping Injection decreased the bioactivity of IL-4 and increased the bioactivity of IFN-. It showed 0.33 g/（kgd） and 0.17 g/（kgd）of Dureping Injection had significantly protective effect to death of the mouse with virus pneumonia. Conclus

4、ion Dureping Injection has an obvious effect against influenza virus FM1 strain by correcting the Th1/Th2 cell shift, regulating the bioactivities of Th1 cytokines and the bioactivies of Th2 cytokines, which reach a new balance between Th1 cell and Th2 cell.Key words: Dureping；influenza virus；Th1/Th

5、2；cell drift 流感是一种具有高度传染性的急性呼吸道疾病，遍布全世界，引起人和动物很高的发病率和病死率1。研究证明，中药在抗流感病毒方面有其独特的优越性，其一方面直接抑制和灭活流感病毒；另一方面，调节机体免疫网络，起到抗流感病毒免疫的作用。本研究探讨毒热平注射液对流感病毒感染小鼠Th1/Th2 细胞漂移的影响，为该药的临床应用提供实验室研究数据。1 实验材料1.1 病毒 流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)，中国中医药研究院中医所提供，本实验室76保存备用。于9日龄鸡胚尿囊腔连续传代2次后，测血凝滴度为1512。1.2 动物 ICR小鼠，体重(141)，合格证号：SLXK(京2005-

6、2006)，级别：SPF/VAF。小鼠及饲料均由北京维通利华实验中心提供。饲养环境：本室动物室动物洁净柜，室温：(222)，相对湿度：50%10%。1.3 药物 毒热平注射液，棕色液体，17.4mg/mL，由广东省康美药业有限公司开发提供；阳性对照药：注射用双黄连(冻干粉)：600mg干粉/支，实验前用无血清DMEM培养液配制成40 mg/mL备用，批号：0501004(哈药集团中药二厂)；利巴韦林：100 mg/mL，批号：0506251(石药集团欧意药业有限公司)。1.4 细胞因子检测试剂盒：购自美国Biosource公司。2 方法和结果2.1 流感病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定

7、取ICR小鼠50只，用单纯随机抽样法随机平均分成5组，病毒为2-62-105个稀释度，每只小鼠经乙醚轻度麻醉后分别滴鼻感染不同稀释度病毒液0.05mL，以死亡和生存为观察指标，24 h内死亡的不予统计。每天观察，直至感染后第14天为止。按Reed-Munch公式2计算出病毒的半数致死量(LD50)为10-2.2。2.2 对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用 取ICR小鼠144只，随机分组、给药见表1。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水0.05mL滴鼻，其余各组以4 LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05 mL，于感染当天开始腹腔给药，正常对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续10 d。从感染之日算起，每天观察并记录小鼠感染病毒后的死亡数，连续观察15 d，计算死亡保护率3，结果见表1。表1 毒热平注射液对流感病毒致小鼠死亡的保护作用（略）2.3 流感病毒感染小鼠肺匀浆细胞因子的检测(双抗体夹心酶标免疫分析法) 取ICR小鼠70只，随机分组、给药见表2。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水0.05 mL滴鼻，其余各组以40 LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05 mL，于感染后第2天开始腹腔给药，正常对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续6 d，第7天摘眼球放血处死，在低温条件下，按常规方法制作肺组织匀浆，肺重(g)/生理盐水(mL)=1