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1、杜仲提取物的致突变实验研究 摘要】 目的研究杜仲提取物的致突变性,为其应用提供理论依据。方法对实验小鼠灌服不同剂量的杜仲提取物水溶液,检测小鼠骨髓微核率、精子畸形率及采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验(Ames实验)进行观察。结果杜仲提取物水溶液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率无影响;对小鼠精子无畸形诱变作用;对供试菌株无致突变作用。结论杜仲提取物对受试物未见有明显的致突变作用。 【关键词】 杜仲 微核 致突变实验杜仲Eucommia ulmoides Oliv在我国的应用悠久,近几年
2、我国学者在杜仲的生物学、化学成分、生理生化等方面做了许多研究,董娟娥等1报道了杜仲籽油具有降压、降血脂及抗肿瘤等作用。唐建军等2报道:杜仲含有丰富的维生素E和-胡萝卜素,有延缓衰老、增强机体免疫力作用。为更好地开发利用杜仲,我们在探索张家界产杜仲提取物(简称杜仲提取物)的亚慢性毒作用3的基础上,对其致突变作用进行了研究,旨在为其应用提供一定的理论依据。1 材 料1.1 药品与动物杜仲提取物主要成分绿原酸,张家界恒兴生物科技公司提供。昆明种小鼠购于湖南中医学院实验动物中心,批号:990218 。注射用环磷酰胺:上海华联制药有限公司,批号:030504。叠氮钠(NaN3):
3、上海试剂一厂,批号:990706。鼠伤寒沙门氏菌株(TA97,TA98,TA100,TA102)购于农科院兽医药品监察所。1.2 主要仪器ES-C300A天平:湘仪天平仪器厂。组织匀浆器:北京玻璃仪器厂。2 方法与结果2.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验小鼠60只,体重(28±2)g,雌雄各半,随机分为6组。杜仲提取物稀释液设为1.28,0.64,0.32,0.16 g/kg 4个剂量组,阴性对照为蒸馏水,两次灌胃给予受试物。阳性对照为环磷酰胺(CP)40 mg/kg体重,两次腹腔注射间隔24 h,第2次给受试物后6 h,颈椎脱臼处死动物
4、。按国家标准4取骨髓制片,每只动物计数1 000个嗜多染红细胞,微核率以百分率表示。结果见表1。表1 杜仲提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率实验(略)与阴性对照组比较,*P0.01,P0.05;n=10 由表1可知,实验组雌、雄小鼠微核发生率为0.39%0.43%,阴性对照组为0.43%,阳性对照组为4.38%,实验组与阴性对照组比较,微核发生率均无差异显著性(P>0.05),阳性对照组与阴性对照组比较,差异性显著(P<0.01)。2.2 杜仲提取物对小鼠精子畸形的试验 雄性小鼠60只,体重(3035)g,随机分为6组,实
5、验组剂量为1.28,0.64,0.32,0.16 g/kg体重与阴性对照组(生理盐水),经口腔给予。阳性对照组用环磷酰胺40 mg/kg体重腹腔注射。各组1次/d,连续5 d给予受试物。于首次给药后第35天,颈椎脱臼处死小鼠,按纪云晶5方法制片。每组计数2 000个精子,其畸形率。结果见表2。表2 杜仲提取物对小鼠精子畸形的影响(略)与阴性对照组比较,*P0.01,P0.05;n=10 由表2可知,实验组小鼠的精子畸形率为7.6%8.3%,阴性对照组为7.8% ,阳性对照组为71.8%,实验组与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05),阳
6、性对照组与阴性对照组比较差异极显著(P<0.01)。1 2.3 Ames试验按Ames标准方法6对鼠伤寒沙门氏突变型菌株TA97,TA98,TA100,TA102进行增菌培养后进行鉴定,所采用的4个菌株特性均与Ames试验标准相符。在加与不加活化物的条件下进行平板掺入法试验。杜仲提取物用双蒸馏水稀释为 500,400,300,200 g/皿4个剂量组,阳性对照为叠氮钠(NaN3)10 g/皿,阴性对照为双蒸馏水100g/皿,每个剂量组重复做2个平皿,结果见表3。表3 杜
7、仲提取物对TA平均回变菌落数的影响(略)+S9:加S9活化物,-S9:不加S9活化物 表3可知,不同剂量的杜仲提取物,无论加或不加S9活化系统,其回变菌落数与阴性对照组(双蒸馏水)比较,均无高于自发回变菌落数的2倍,而阳性对照组菌落数均高于阴性对照组的2倍以上。3 讨论 不同剂量杜仲提取物对小鼠PCE的试验表明,杜仲提取物稀释液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响(P<0.01)。说明本品对细胞染色体无诱变作用。对小鼠精子畸形的影响试验,结果表明,杜仲提取物稀释液对小鼠精子畸形发生率未见明显影响(P<0.01),说明本品对小鼠精子无畸形诱变作用,戚向阳等7用杜仲粉对小鼠精子进行的药理作用研究结果表明,杜仲粉对小鼠精子不产生畸变作用,其结果与本研究结果一致。 采用鼠伤寒沙门氏突变型菌株TA97,TA98,TA100,TA102进行回复突变试验,结果表明,不同剂量的杜仲提取物,无论加或不加S9活化系统,其回变菌落数与阴性对照组(双蒸馏水)比
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