豚鼠耳蜗灌注的流速安全阈.docx

1、推罟可313:om豚鼠耳蜗灌注的流速安全阈等为明:涂林根高志宏王正4TRZG4,3灾'顷摘91行全耳蛆入工外淋巴海注，观察不同湛注速度对蜥内电位的影响，井作耳蜗连续切片，观察内耳结料的形态变化,灌注速度分别为:5pl/min.50Ml/min,1001/min,250.1/min,500;il/min当渔注速度为100/J/min时可使蜥内电位下降，但停演后电位可恢复.而灌注速度进一步提高为250/min以上后.蜗内电位即出现不可逆的F降,在童注速度分别为3/min，50Ml/min和100祖/min时，连续切片观察未发现畀常.在250Ml/min组中有1耳发现有前庭膜Ml陷.在SOO

2、pl/minM中发现3耳有前麻膜塌陷或破裂.人工外淋巴灌注速度不宜过快，在豚鼠耳所作试验提示，流速以不超过100祖/min为宜.关ifl耳蜗(Cochlea)(Guineapig)动物，实验(Animals,laboratory)Thesafeflowrateofartificialperilympf§7*perfusioninguineapigcochleaSongWeiming,XuLingen,GanZhihong,WangZhengminABSTRACTTheperilymphaticspaceofguineapigcochleawasperfusedwithavariety

3、ofphysiologicartificialperilymphwhichdifferentedtntheperfusiveflowrate.Theendocochlearpotential(EP)wasrecordedtoindicatetheeffectsoftheparfusiveflowratesonthecochlearfunction.Theperfusiveflowratesweredividedinto5groups:5pl/mtn,50pl/minf100l/minf250pJ/niinand500pJ/min.Inthegroupsof5试/minand50/d/minth

4、erewasnosignificantchangeofEPthroughouttheperiodofperfusion.Whentheperfusiveflowratewas100/d/min,atransitorydeclineofEPwasfoundduringtheperfusiveperiod.Whentheperfusiveflowrateswere250pd/minand500/xJ/nun>theEPweredecreasedmarkedlyanddidnotreturntothenormallevelafterthestopofperfusion.Formorpholog

5、icstudy*inthegroupswhichtheperfusiveflowratesreached250祖/min.4of10earswerefoundthattheReissner'smembranewascollapsedandruptured.Itwassuggestedthattheflowrateofperilymphaticperfusionshouldnotexceed100d/min.ThemethodsofartificialperilymphaticperfusionandrecordingofEPweredescribedindetail.ChineseAr

6、chOtolaryngolHeadNeckSurg»1996$3(5)：313316FromtheDepartmentofOtolaryngology,EENTHospitalofShanghaiMedicalUniverisyttShanghai200031(Dr.SongWeiming)J毒性药物等有害因素滞留在内耳环境中此外-200031±WK科大学眼耳鼻股科医院内耳器官与周围组织存在多种屏障，血迷路屏障，脑脊液迷路屏障和中耳迷路屏障，这些屏障对内耳器官具有保护作用,但也可使耳还可能使治疗药物不能进入迷路而难以发挥作用口。采用人工淋巴灌注的方法有可能突破内耳迷路屏障，

7、对外淋巴腔进行灌注.清除有害的毒性药物和代谢产物，并可使治疗药物直接进入内耳，取得其它疗法不能获得的治疗效果。在入耳蜗进行入工外淋巴灌注有两个主要的问题，一是术后外淋巴漏和迷路纤维化的危险,二是量换速度的安全界限。前一间题由于耳显嫩外科技术的不断改进和发展巳得到解决至于量换速度，速度过高会导致内耳损害，而速度过低使手术费时过长，同时流速过小也达不到外淋巴腔海洗的目的。本文通过在豚鼠耳蜗底转鼓阶和前庭阶钻孔，进行全耳蜗入工外淋巴灌注，观察不同置换速度对蜗内电位的影响，并作耳蜗连续切片，观察内耳结构的形态变化。探索了进行耳蜗人工外淋巴灌注的方法，并提出豚鼠耳蜗人工外淋巴灌注流速的安全阈。1材料与方

8、法1.1动物及实验设备。花色豚鼠25只，体重300500g,雌雄兼用，鼓膜及外耳道无病变，耳廓反射灵敏。微电极放大器（中科院上海生理所FW-4B）,微端注射机（浙江医科大学医学实验仪器厂W50型）。1.2手术及实验操作。动物麻醉后行气管切开，保证实验过程中呼吸通畅。脚侧进路显露听泡.暴ar耳蜗。在耳蜗底转的鼓阶和前庭阶分别钻孔作为人工外淋巴灌注的进液孔和出液孔。灌注时灌注液经鼓阶而进，绕蜗孔由前庭阶而出.在听泡底部放吸引针头，以免液体积聚而影响蜗内电位的记录。灌注速度分5组，分别为：5同/min、50尸1/min、100勘/min、250/xl/min、500M/min.灌注时间均为30min

9、。生理性人工外淋巴液参考Marcus"】的配方如下：NaCl125tnmol/L,KCl4mmol/L>NaHCO325mmol/L,NaH2PO40.51mmol/L»MgCi21«14mmol/L,CaClz1.3mmol/L,Glucose3mmol/LUrea2mmol/L,pH7.4.渗透压300mmol/Lo灌注前先充氧。在耳蜗第二转中阶处骨壁钻孔作为蜗内电位记录电极的入路。用尖径为2pm左右的玻璃微电极作为引导电极，将Ag-AgO丝插于玻璃微电极管腔里150mmol/L的KC1溶液中,作为记录电极。参考电极与颈部切口肌肉相联。在显微镜下用微电极

10、操纵器将玻璃微电极尖端经骨壁钻孔向中阶穿刺，在电极刚一接触螺旋钿带时将系统调琴。微电极刺入蜗管后.立即引导到一个正的75mV左右直流电位。一般先观察起始电位5min,然后开动做量注射机，分别以不同灌注速度对耳蜗外淋巴间隙进行海注，观察不同灌注速度对蜗内电位的影响.组织学观察，灌注结束后，用中性福尔马林固定耳蜗，作火棉胶包埋，沿耳蜗长轴行连续切片，片厚l"m,HE染色.光镜下观察蜗管形态变化.2结果2.1蜗内电位的变化见附表。附衰实验劫耳蜗濯注疽速不同蝌内电位变化分组起始电位注30min停灌lOmin(pl/min)Cmv)<mv)(mv)575.875.475.25076.67

11、1.673.010077.842.270.225076.633.438.650076.06.05.0如上表所示，S/min及50pl.zmin时，灌注对蜗内电位无明显影响.当灌注速度为100试/min时可使蜗内电位下降，但停灌后电位可恢复。而灌注速度进一步提高为250Hl/min以上后蜗内电位即出现不可逆的下降（P<0.01）。2,2形态学观察。在灌注速度分别为5/min、50田/min和lOOpl/min时.连续切片观察未发现异常。在250/xl/min组中有一耳发现前庭膜埸陷。在500试/min组中发现有3耳有前庭膜塌陷或破裂（见附图）.3讨论设想对因使用耳毒性药物而致听力损害者进行

12、人工外淋巴量换，突破内耳屏障，直接清315315附图流速500试/分，显示疆注液出口及前庭腰破裂洗此类患者的外淋巴腔而清除蓄积的耳毒性物质，并灌注耳毒性药物拮抗剂，有可能会对此类患者产生一些有益效果。Takada用含庆大零素的溶液进行外淋巴灌注，使豚鼠耳蜗微音器电位F降后，再用含钙溶液行外淋巴腔海洗，可使消失的耳蜗微音电位重新恢复。外淋巴液作为螺旋器的内环境，当其发生改变时将使耳蜗功能受到影响。作者为极登患者行电子耳蜗植入术中曾多次发现有些患者存在外淋巴液“枯竭”现象，打开这些患者的鼓阶后，见其外淋巴液呈浅黄色且比正常的外淋巴液明显稠厚，可以推测这些患者的外淋巴“枯竭”现象与听力下降有一定关系

13、。Wak&no等8】曾报道在行人工外淋巴灌注时，当灌注液溶质度大于372.6mmol/L时出现蜗内电位下降，溶质度越高.蜗内电位下降越明显。对于各种原因导致外淋巴液理化因素发生改皮的患者进行人工生理性外淋巴灌洗，洗掉病理性外淋巴液，用符合内耳器官生理需要的人工外淋巴液替代之，有可能使某些目前难以治疗的疾肩成为可治之症。当然要证明此方法的可行性.还需要作进步研究。本实验用人工生理性外淋巴液对豚鼠耳蜗外淋巴腔以不同流速进行灌注,观察蜗内电位变化，并以耳蜗火棉胶包理连续切片观察蜗内结构的形态变化，用以推测人工外淋巴灌注的流速安全阈。结果发现当灌注速度达到100试/min,蜗内电位即F降但停止

14、灌注后蜗内电位可恢复到起始电位水平。而当以500Pl/min的流速进行灌注时，蜗内电位快速下降，且停止灌注后亦无明显恢复。蜗内电位与内耳生理功能和病理过程有密切关系。血管纹上Na+/K+-ATPSI的分布对蜗内电位形成和维持起主要作用。蜗内电位不仅反映血管纹的功能状态，也反映耳蜗环境稳定状况，是感受器电位和听神经动作电位产生的基础。当进行人工外淋巴灌注时，将使蜗内静水压升高蜗内静水压达到一定程度后即可影响血管纹细胞的功能，而使蜗内电位下降。流速过高还可使蜗内结构遭到破坏，出现前庭膜破裂塌陷。当蜗管结构完整性被损害时，将使内外淋巴液混合在一起而改变维持蜗内电位所需的内淋巴液高K+浓度状态，而使蜗

15、内电位K降。在灌注速度为100以/min时出现的蜗内电位一过性F降即可能与耳蜗内静水压暂时性升离有关。本实验中当流速为500Pl/min时，5耳中有3耳观察到前庭膜塌陷°Hara经豚鼠圆窗膜穿刺，在1秒钟内吸取4同外淋巴液(相当于240Ml/min速度)，即刻行切片观察，在22耳中发现2耳有Reissner's膜膨隆，7耳有Reissner'膜塌陷，其结果与本实验结果相似。通过本实验观察.人工外淋巴灌注速度不宜过快，本实验在豚鼠耳所作试验提示，流速以不超过lOOjzl/min为宜。勇文献BrummettRE.FoxKE.Aminoglycoside-inducedhe

16、aringlossinhuman.AntimicrobialAgentsandChemotherapy331797JuhnSK.Barriersystemsintheinnerear.ActaOto-laryngol,1988;(Suppl458)：791 SchindlerRA,GladstoneHB,ScottN.etal.EnhancedpreBervationoftheauditorynervefollowingcochlearperfusionwithnervegrowthfactor.AmJOtol.1995,16,304SheaJJ.SymposiunionMeniere5300

17、21南宁市广西壮族自治区人民医院耳鼻咽喉科2 SheaJJ.SymposiunionMeniere530021南宁市广西壮族自治区人民医院耳鼻咽喉科sdisease*June.1988. HarvardUnivKuglerandGhediniPublications,1989：464王正敏.耳显微外科.上海科学技术文献出版社.1989, 263285MarcusDCMarcusNYThalmannR.Changesincationcontentsofstriavasculariswithouabainandpotassiumfreeperfusion.HearRes*198114：1493 T

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19、aM*NomuraYSaitoK.Histopathologicstudyoftheperilymph-suctionedlabyrinth.AnnOtolRhi-nolLaryngo!,1990j99：316（收稿1996-0213）咽侧壁恶性血管内皮瘤1例刘祷朱习平.患者女34岁.因阵发性喂部刺搞11年，咽昇物S2年余拟咽右侧肿物性质待查收入院.体查，一般情况可.咽部潮红.右扁桃体窝后方见条索状肿物，上至鼻咽部隆突，下达杓会厌昙，表面光滑.触之软,鼻及喉部未见异常.颈部无肿大淋巴结实验室检查：血沉31mm/hr,EB-VCA-IgA阴性.鼻咽部活检：粘腆慢性炎症.咽部肿物穿剌细胞学检查：未见恶性依据.X线胸片：双藤未见实质性病变.X线35部侧位片：咽部肿物下界这第四殖椎体中份.入院诊断：咽右俩壁肿物性质待查.于1992年6月3日在全麻下行气管切开咽右侧肿物摘除术术中见肿物上界达颅底,下界达杓会厌襄平面.基底较广,质软，表面呈暗红色.有数个小结察而介'陈惹.节突出,与周0!组纵连联紧密，肿物