血糖与血清胆固醇测定

1、血糖与血清胆固醇测定一、酶法（一、酶法（GOD-PODGOD-POD）测血清）测血清葡萄糖含量葡萄糖含量实验目的实验目的u 掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法u 掌握测定血糖的临床意义掌握测定血糖的临床意义 邻甲苯胺法邻甲苯胺法 酶法：酶法： 血糖的测定方法：血糖的测定方法：准确度、灵敏度准确度、灵敏度高，稳定性好高，稳定性好葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法过氧化物酶偶联法 （GOD-POD）实验原理实验原理偶联酶法测血糖偶联酶法测血糖 葡萄糖葡萄糖O2H2O2葡萄糖酸葡萄糖酸葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（GOD）H2O24-4-氨基氨基

2、安替比林安替比林H2O醌亚胺染料醌亚胺染料过氧化物酶过氧化物酶（POD）红色红色 红色醌亚胺染料在红色醌亚胺染料在500nm500nm处具有吸收峰处具有吸收峰 采用标准对比法可计算得到样品中葡萄糖采用标准对比法可计算得到样品中葡萄糖 浓度浓度 红色醌亚胺染料的生成量与葡萄糖含量红色醌亚胺染料的生成量与葡萄糖含量 成正比成正比实验器材实验器材 试管试管1.51.55cm5cm（3 3）、试管架）、试管架 吸量管吸量管2mL2mL（11）、洗耳球）、洗耳球 微量加样器：微量加样器：2020l l的的PipetmanPipetman 恒温水浴箱恒温水浴箱 离心机、离心管离心机、离心管10ml10ml

3、（2 2）实验试剂实验试剂 葡萄糖测定试剂盒：原装试剂在葡萄糖测定试剂盒：原装试剂在2 288避光保存，避光保存，有效期有效期1515个月。混合后个月。混合后2 288可稳定可稳定11个月，室温个月，室温可稳定可稳定3 3天天 葡萄糖标准液：葡萄糖标准液：100mg/Dl(5100mg/Dl(5.55mmol/L).55mmol/L) 实验样品：新鲜无溶血血清实验样品：新鲜无溶血血清实验操作实验操作1. 1. 酶工作液配置酶工作液配置（直接用试（直接用试剂盒）剂盒）2. 2. 标本处标本处理理抽取全血抽取全血 3-3-5 5 mLmL3737保温保温15分钟分钟30003000转转/min/m

4、in离心离心10min10min取上清液备用取上清液备用3. 3. 取取3 3支干净干燥的小试管按表加入试剂支干净干燥的小试管按表加入试剂4. 4. 各管加好后混匀，置各管加好后混匀，置3737水浴水浴 30minmin，0.5cm光径比色杯，以空白试剂调零，在光径比色杯，以空白试剂调零，在500nm500nm波长下比波长下比色色先加体积少的，先加体积少的，再加多的再加多的 管号管号试剂试剂空白管空白管标准管标准管待测管待测管蒸馏水蒸馏水(L ）10标准葡萄糖标准葡萄糖(L ）10待测血清待测血清(L ）10酶工作液酶工作液(mL ）1.51.51.5u 标准液吸取后应立即上盖，以防水分挥发标

5、准液吸取后应立即上盖，以防水分挥发u 工作液混浊或有絮状物视为失效工作液混浊或有絮状物视为失效u 本法特异性高，维生素本法特异性高，维生素C C，谷胱甘肽，左，谷胱甘肽，左 旋多巴引起负偏差旋多巴引起负偏差u 1010l l液体必须全部溶于液体必须全部溶于1.5ml1.5ml酶工作液中酶工作液中注意注意u 1010LL液体不易精确加入，实验时要仔细检查移液液体不易精确加入，实验时要仔细检查移液枪的密封性。此外，移液枪外壁不要沾有液体。枪的密封性。此外，移液枪外壁不要沾有液体。二、酶法（二、酶法（COD-PAPCOD-PAP）测血清总胆固醇测血清总胆固醇(TC)(TC)实验目的实验目的u 掌握酶

6、法测定血清总胆固醇含量的原理掌握酶法测定血清总胆固醇含量的原理u 熟悉酶法测定血清总胆固醇含量的操作方法熟悉酶法测定血清总胆固醇含量的操作方法u 了解总胆固醇测定的临床意义了解总胆固醇测定的临床意义胆固醇酯酶胆固醇酯酶+FFA胆甾烯酮胆甾烯酮+ H+ H2 2OO2 2胆固醇氧化酶胆固醇氧化酶COD实验原理实验原理+4-氨基安替比林氨基安替比林+酚酚醌亚胺醌亚胺过氧化物酶过氧化物酶H2O2PAP 胆固醇酯胆固醇酯 游离胆固醇游离胆固醇 红色的醌型化合物在红色的醌型化合物在510nm处有吸收峰，颜色深浅处有吸收峰，颜色深浅与总胆固醇的浓度成正比。与总胆固醇的浓度成正比。 采用标准对比法可计算其含

7、量。采用标准对比法可计算其含量。 总胆固醇含量正常参考值范围为总胆固醇含量正常参考值范围为实验器材实验器材u 小试管（小试管（3）、试管架）、试管架u 刻度吸量管刻度吸量管2mL（1）、洗耳球）、洗耳球u 微量加样器微量加样器(20l)u 恒温水浴箱恒温水浴箱u 离心机、离心管离心机、离心管10ml（2）实验试剂实验试剂u R1 R1液：磷酸盐缓冲液、对氯酚液：磷酸盐缓冲液、对氯酚u R2 R2液：液：4-4-氨基安替比林、酶氨基安替比林、酶u 胆固醇标准液：胆固醇标准液：5.2mmol/L5.2mmol/L实验步骤实验步骤u 1. 工作试剂配制：工作试剂配制： R1 10ml+R2 1ml混

8、合，可保存混合，可保存1周周u 2. 标本处理标本处理:抽取全血抽取全血35ml37保温保温15分钟分钟3000转转/min离心离心10min取上清液备用取上清液备用u 最适样品为当日空腹采集无溶血无乳糜的血清。最适样品为当日空腹采集无溶血无乳糜的血清。u3. 取取3支小试管编号，按表加入试剂支小试管编号，按表加入试剂 管号管号 试剂试剂空白管空白管标准管标准管待测管待测管蒸馏水蒸馏水（l）1010标准液标准液（l）1010样品样品（l）1010工作试剂工作试剂（ml）0.60.60.60.60.60.6充分混合，充分混合，3737水浴水浴1515分钟分钟蒸馏水蒸馏水（ml）1.01.01.0

9、1.01.01.0u0.5cm光径比色杯，以空白试剂调零，在光径比色杯，以空白试剂调零，在510nm波长下比色波长下比色注意事项注意事项u 最后加酶工作试剂，各管反应时间应一致最后加酶工作试剂，各管反应时间应一致u 工作试剂防止葡萄糖和甘油三酯污染工作试剂防止葡萄糖和甘油三酯污染u 若需检测游离胆固醇含量，将酶试剂去掉胆固醇酯若需检测游离胆固醇含量，将酶试剂去掉胆固醇酯酶即可酶即可实验结果与讨论实验结果与讨论u 计算结果计算结果u 记录结果记录结果A标标=标准管吸光度标准管吸光度A待待=待测管吸光度待测管吸光度 C待待=A待待A标标C标标C标标=血液中葡萄糖或胆固醇浓度血液中葡萄糖或胆固醇浓度

10、C标标=标准液中葡萄糖或胆固醇浓度标准液中葡萄糖或胆固醇浓度血清葡萄糖测定临床意义血清葡萄糖测定临床意义 病理性高血糖：病理性高血糖： 常见于糖尿病；颅内压升高，如颅内出血，颅外伤等常见于糖尿病；颅内压升高，如颅内出血，颅外伤等；脱水引起的高血糖，如呕吐、腹泻和高热等也可使；脱水引起的高血糖，如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖升高；胰岛血糖升高；胰岛 细胞瘤等细胞瘤等 病理性低血糖：病理性低血糖： 常见于胰岛素分泌异常、肝功能严重衰退等；严重肝常见于胰岛素分泌异常、肝功能严重衰退等；严重肝病患者，肝脏不能有效地调节血糖；糖原累积症。病患者，肝脏不能有效地调节血糖；糖原累积症。 危险阈值：危险阈值：

11、 高胆固醇血症：高胆固醇血症：6.2mmol/L TC增高：常见于动脉粥样硬化、高脂蛋白血症增高：常见于动脉粥样硬化、高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾病综合征、甲状腺功能低下、梗阻性黄疸、肾病综合征、甲状腺功能低下、慢性肾功能衰竭、糖尿病等慢性肾功能衰竭、糖尿病等 TC降低：常见于低脂蛋白血症、贫血、肝脏疾病降低：常见于低脂蛋白血症、贫血、肝脏疾病、营养吸收不良、恶性肿瘤等。、营养吸收不良、恶性肿瘤等。血清总胆固醇测定临床意义血清总胆固醇测定临床意义思考题思考题u 正常人的血糖为什么能维持在一定水平正常人的血糖为什么能维持在一定水平?u 胰岛素和肾上腺素对血糖有何影响胰岛素和肾上腺素对血糖有何影响

12、? 为什么为什么?u 测定血清总胆固醇的临床意义有哪些？测定血清总胆固醇的临床意义有哪些？ 722722型分光光度计型分光光度计 能在可见光谱区域内对样品物质作定量分析。广能在可见光谱区域内对样品物质作定量分析。广泛应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工泛应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制，是生物化学实验室常用分析、环境保护、质量控制，是生物化学实验室常用分析仪器之一。仪器之一。原理原理 不同的物质对光的吸收具有选择性，有其不同的物质对光的吸收具有选择性，有其各自的吸收光谱。当某单色光通过溶液时，能量会被各自的吸收光谱。当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减

13、弱，能量减弱程度和物质浓度有一定关系吸收而减弱，能量减弱程度和物质浓度有一定关系“MODEMODE”键：键： 用于设置测用于设置测试方式试方式“100%T100%T”键：键： 用于自动用于自动调整调整100.0%T(1100.0%T(100.000.0透射比透射比)或零吸光或零吸光度度 “0%T0%T”键：键： 用于自动用于自动调整零透射比调整零透射比“波长设置波长设置”旋钮：旋钮： 用于设置用于设置分析波长分析波长722E722E型型比色皿的使用方法比色皿的使用方法 拿比色皿时，只能拿毛玻璃面，不能碰透光面，以拿比色皿时，只能拿毛玻璃面，不能碰透光面，以免污染免污染 使用前，一般先用水冲洗，

14、再用蒸馏水润洗，还要使用前，一般先用水冲洗，再用蒸馏水润洗，还要用所盛溶液润洗用所盛溶液润洗 外壁的水用擦镜纸或吸水纸沾干，以保护透光面外壁的水用擦镜纸或吸水纸沾干，以保护透光面 所盛液体量约占总体积的所盛液体量约占总体积的3/4，即距管口，即距管口1cm左右左右 722E型分光光度计操作方法型分光光度计操作方法1. 1. 预热仪器（关盖，拉半档，预热仪器（关盖，拉半档，TT模模式）式） 2. 2. 选定波长选定波长 5. 5. 调调 T=100T=100 (关盖，拉杆全推进，光路对关盖，拉杆全推进，光路对着空白管着空白管）4. 4. 调调 T=T= 0% (0% (关盖，拉半档，光路对着关盖

15、，拉半档，光路对着11、2 2格格间的挡板）间的挡板） 3. 3. 放入样品（光面对着光路的方向放入样品（光面对着光路的方向）7. 7. 将模式调至将模式调至“A A”，拉动拉杆至标准管和样本管，分，拉动拉杆至标准管和样本管，分别测定别测定A A值并记录值并记录8. 8. 按回按回“TT”模式，推回半档的位置，拿出比色皿，关机模式，推回半档的位置，拿出比色皿，关机 6. 6. 重复重复4-54-5步至仪器显示数值稳定。步至仪器显示数值稳定。返回光路返回光路返回u 朗伯比尔定律：朗伯比尔定律： A= c lA= c l：摩尔吸光系数：摩尔吸光系数 c：溶液的浓度：溶液的浓度 l：液层的厚度：液层的厚度 A：物质的吸光度：物质的吸光度 当某单色光通过溶液时，其能量就当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理度有一定的比例关系，也即符合于比色原理-朗伯朗伯-比耳定