欧洲葡萄的质量标准研究

1、欧洲葡萄的质量标准研究                                 作者：李占军 布仁 张金花 薛培凤【摘要】  目的建立欧洲葡萄中齐墩果酸的薄层色谱鉴别方法和含量测定方法。并测定不同产地的欧洲葡萄中齐墩果酸的含量。方法采用薄层色谱法（TLC）鉴别，

2、并采用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。结果测得欧洲葡萄中齐墩果酸含量为0.36%以上,平均回收率为98.33% ,相对标准偏差RSD为1.59%。结论该方法操作简便,结论可靠,可用于欧洲葡萄的质量控制。 【关键词】  欧洲葡萄 齐墩果酸 薄层色谱 高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo establish a TLC method for identification and an HPLC method for content determination of oleanolic acid from Vitis vinifera L.MethodsTLC was

3、 used to identify and HPLC was employed to determine the content. ResultsContent of oleanolic acid in Vitis vinifera L. was above 0.36%, the average recovery was 98.33% with RSD 1.59% (n=5). ConclusionThe method is simple, convenient and accurate and can be used for the quality control of Vitis vini

4、fera L.Key words：Vitis vinifera L；   Oleanolic acid；   TLC；  HPLC“欧洲葡萄”名称源于其植物名，蒙药名“乌珠木”1，为欧洲葡萄Vitis vinifera L.的干燥果实。欧洲葡萄以蒙药“贡布如木”载于认药白晶鉴，无误蒙药鉴称其“茎长，状如铁线莲，缠绕，叶圆且大，花红色很小，故难碰见，果实红紫色，果皮极薄，每串果实近百粒大小如黄豆，黄色，无核者为佳”。中华本草·蒙药卷以“葡萄干”（蒙药名“乌珠木”）收载本品1。内蒙古植物药志内蒙古植物志亦收载本品23。据中华本草·

5、;蒙药卷记载，本品可清肺热，止咳平喘，滋补强身。主治肺热咳嗽，痰盛气喘，肺水肿，疹热，湿热烦渴1。欧洲葡萄广泛运用于蒙医临床和生产，但目前对欧洲葡萄尚无完善的质量标准。    欧洲葡萄果实中含有葡萄糖、果糖，少量蔗糖、木糖，酒石酸、草酸、枸橼酸、苹果酸，各种花色素的单葡萄糖苷和双葡萄糖苷，亦含蛋白质、钙、磷、铁、锰、胡萝卜素、硫胺素、核黄色、尼克酸、维生素C。葡萄皮中含矢车菊素、芍药花素、飞燕草素。种子含脂肪油。又含焦性儿茶酚、没食子儿茶酚、没食子儿茶精、没石子酸盐等。尚含亮氨酸、酪氨酸。另含矢车菊酚低聚物1。此外，含白藜芦醇、齐墩果酸、原花青素4。齐墩果酸做为欧

6、洲葡萄中的生物活性成分之一，其含量高低与欧洲葡萄的功效具有直接的关系，故以齐墩果酸为对照品，分别建立欧洲葡萄的薄层色谱鉴别方法和高效液相含量测定方法。1  器材1.1  仪器大连依利特公司提供依利特高效液相色谱仪（P230高压恒流泵，UV230+紫外-可见检测器，EC2000色谱数据处理系统）；北京慧易德公司提供kromasil色谱（kromasil100-5C-18, 5 m, 250 mm×4.6 mm）；1.2  试剂试药齐墩果酸对照品购自药品生物制品检定所（批号110709-200304）;流动相所用甲醇为Fisher公司提供的色谱纯试剂;水为市

7、售娃哈哈纯净水;硅胶G（青岛海洋化工公司）；其他试剂试药均为分析纯。1.3   欧洲葡萄药材于20060810分别采摘于呼和浩特土左旗和托克托县，部分采购于呼市天力药材公司，经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞究生教授鉴定，均为蒙医习用欧洲葡萄正品。2  方法和结果2.1  薄层色谱鉴别取本品粉末约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加甲醇10 ml,密塞，静置30 min，超声提取15 min，滤过，用20 ml甲醇分次洗涤容器和残渣，水浴挥干溶剂，残渣用3 ml甲醇溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品适量，加醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对

8、照品溶液。吸取上述供试品溶液、对照品溶液各510 l，分别点于同一0.5%羧甲基纤维素钠水溶液制成的硅胶G薄层板上，以环己烷丙酮醋酸乙酯(521)为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，置日光或紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。见图1。1         2.2  含量测定精密称取28.0 mg齐墩果酸标准品，置10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密吸取上述储备液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml

9、置10 ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品溶液。称取干燥的欧洲葡萄粉末约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加甲醇10 ml,密塞，静置30 min，超声提取15 min，滤过，用20 ml甲醇分次洗涤容器和残渣，水浴挥干溶剂，用甲醇转溶于10 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密量取上述对照品溶液各20 l进样,以色谱峰面积(Y)对浓度(X)进行回归，齐墩果酸的线性回归方程为Y =2 465.6X +51.159, r =0.999 7，线性范围为0.1400.700 mg/ml。取同一份本品供试品溶液，连续进样5次，20 l/次，测得齐墩果酸峰面积RSD为0.34%

10、 ，表明仪器进样精密度良好。取同一批欧洲葡萄药材5份，按供试品溶液方法制备，分别进样20 l，测定齐墩果酸的含量RSD为1.73% ，表明该方法的重复性较好。取同一供试品5份，分别加入齐墩果酸对照品，按供试品溶液制备方法制备，进样20 l，得回收率分别为98.33% ，RSD1.59%。结果见表1。表1  加样回收率测定结果（略）3   讨论3.1  流动相pH值选择本实验考察了不同浓度的冰醋酸和磷酸，最终确定以甲醇-水-磷酸（9460.1）的峰形最好，且无干扰峰。3.2  方法学考察本实验考察了不同种类和不同浓度的溶媒，不同溶媒量，不同的提取时间；对超声提取与加热回流两种方法也作了比较。最后确定以10 ml甲醇为溶媒，静置30 min后超声15 min提取效率最高。齐墩果酸是中蒙药中一种重要的药效成分。 欧洲葡萄为常用蒙药之一，以齐墩果酸为对照品的薄层色谱法的建立，为欧洲葡萄的定性鉴别提供了一种快速有效的方法。采用HPLC法测定欧洲葡萄中齐墩果酸的含量，方法稳定、快速、重现性好、杂质干扰小，适合欧洲葡萄中齐墩果酸的含量测定，可作为欧洲葡萄的一种质量控制手段。【】  1国家中医药管理局，中华本草编委会.中华本草