实验：酵母细胞的固定化

1、实验四实验四 酵母细胞的固定化酵母细胞的固定化高大响高大响一、一、 实验目的和要求实验目的和要求l了解固定化细胞的原理。了解固定化细胞的原理。l掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。二、二、 实验原理实验原理l工业上常用包埋法固定微生物细胞。根据包埋剂的特性工业上常用包埋法固定微生物细胞。根据包埋剂的特性，海藻酸钠在水相中加热溶解呈溶液状。将细胞加入混，海藻酸钠在水相中加热溶解呈溶液状。将细胞加入混匀，滴入氯化钙溶液中，由于离子的转移作用而凝固，匀，滴入氯化钙溶液中，由于离子的转移作用而凝固，形成凝胶颗粒，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。形成凝胶颗粒，

2、凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。l海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可新陈海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可新陈代谢代谢（固定活细胞），（固定活细胞），也可以利用细胞中的酶进行酶促也可以利用细胞中的酶进行酶促反应反应（固定死细胞）。（固定死细胞）。l本实验利用海藻酸钙凝胶包埋酵母生长细胞。本实验利用海藻酸钙凝胶包埋酵母生长细胞。 l固定化细胞材料固定化细胞材料n2.5海藻酸钠溶液20mL，加热助溶，冷至45备用。 n配制50mL 1.5CaCl2。 20毫升注射器，毫升注射器，150ml烧杯和烧杯和50ml烧杯各一个、三角瓶、烧杯各一个、三角瓶、玻璃棒、温度计、镊子玻璃棒、温

3、度计、镊子三、三、 实验材料和仪器实验材料和仪器l酵母细胞的活化酵母细胞的活化n取市售干酵母按1g投入到20ml 3638的温水中活化1520分钟，酵母细胞活化时体积会变大，活化前应该选择体积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器外。四、四、 实验方法和步骤实验方法和步骤l酵母细胞的固定化酵母细胞的固定化n在冷却至4550左右海藻酸钠溶液中，加入5mL预热至35的酵母培养液，混合均匀。将混合液装入注射器中，装上大好针头，以缓慢而稳定的速度将其滴入1.5CaCl2溶液中，边滴边摇动三角瓶，即可制得直径为3mm左右的凝胶珠。n在CaCl2溶液中钙化30min，即可使用。四、四、 实验方法和步

4、骤实验方法和步骤 l加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环n一定要溶解彻底，在溶解过程中不断搅拌，在降温过程中不能低于45 ，否则会凝固。 五、注意事项五、注意事项 l海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量n如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；n如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 五、注意事项五、注意事项 l刚形成的凝胶珠应在刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形溶液中浸泡一段时间，以便形 成稳定的结构成稳定的结构 n检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法。检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法。n一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。n二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明二