实验六叶绿体色素质与叶绿素ab含量测定

1、实验六叶绿体色素质与叶绿素ab含量测定一、叶绿体色素的性质一、叶绿体色素的性质 实验原理实验原理光合膜叶绿体色素 实验原理实验原理叶绿体色素叶绿体色素叶绿素叶绿素类胡萝卜素类胡萝卜素胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素b叶绿素叶绿素a（含量占（含量占3/4）（含量占（含量占1/4） 实验步骤实验步骤1. 1. 叶绿体色素的提取：叶绿体色素的提取： 称取新鲜叶片称取新鲜叶片4g4g，剪碎。放入研钵中加丙酮，剪碎。放入研钵中加丙酮10ml10ml，少许碳酸钙（保护叶绿素）和石英砂（增大摩擦，使叶片少许碳酸钙（保护叶绿素）和石英砂（增大摩擦，使叶片研磨得更充分），研磨成匀浆，再加丙酮研磨得更充分

2、），研磨成匀浆，再加丙酮50ml50ml，避光保存，避光保存至残渣发白，以漏斗过滤之（三角烧瓶），即为色素提取至残渣发白，以漏斗过滤之（三角烧瓶），即为色素提取液，放于暗处备用。液，放于暗处备用。Chlb:C32H28O2N4MgCOOCH3COOC20H39Chla: C32H30ON4MgCOOCH3COOC20H39+ H2OMg 头部： 4个吡咯环+4个甲烯基连接，形成卟啉环，卟啉环+Mg，与四个吡咯环上的N相连，再与一个副环相连尾部：C20H39(叶醇)2. 2. 光照对叶绿素的影响光照对叶绿素的影响取两只试管，分别加入提取液少许：取两只试管，分别加入提取液少许： 一支放入黑暗处一支

3、放入黑暗处 一支放在直射光中一支放在直射光中 2 2小时后观察颜色变化小时后观察颜色变化 ？3. 3. 酸对叶绿素的影响酸对叶绿素的影响 取少许提取液于试管中，逐滴加入浓取少许提取液于试管中，逐滴加入浓HCl HCl 摇匀，观察颜色变化摇匀，观察颜色变化加醋酸铜粉末少许加醋酸铜粉末少许 水浴，微微加热水浴，微微加热观察颜色变化观察颜色变化？4. 4. 金属离子对叶绿素的影响金属离子对叶绿素的影响 对酸、碱、光、热不稳定对酸、碱、光、热不稳定酸性条件下：叶绿素的镁离子被酸性条件下：叶绿素的镁离子被H H取代取代碱性条件下：叶绿素水解，脱植基叶绿素碱性条件下：叶绿素水解，脱植基叶绿素叶绿素酶：叶绿

4、素脱植醇叶绿素酶：叶绿素脱植醇光照：引起叶绿素光敏氧化光照：引起叶绿素光敏氧化金属离子：镁离子可被铜、锌、铁等取代金属离子：镁离子可被铜、锌、铁等取代热处理：叶绿素转化为脱镁叶绿素热处理：叶绿素转化为脱镁叶绿素Mg 头部： 4个吡咯环+4个甲烯基连接，形成卟啉环，卟啉环+Mg，与四个吡咯环上的N相连，再与一个副环相连尾部：C20H39(叶醇)叶绿素的降解与色变-COOCH-COOCH3 3-COOCH-COOCH3 35. 5. 叶绿素的荧光现象：叶绿素的荧光现象： 取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光一侧提取液的颜色一侧提取液的颜色 ？

5、6. 6. 黄色素与绿色素的分离黄色素与绿色素的分离 取分液漏斗取分液漏斗 加加20ml20ml乙醚乙醚 加提取液加提取液10ml 10ml 摇动摇动 沿漏斗边缘加沿漏斗边缘加30ml30ml蒸馏水蒸馏水 轻摇，静置轻摇，静置 分层，弃去下层分层，弃去下层 蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗1 12 2次次 加加5ml 305ml 30KOHKOH甲醇溶液，甲醇溶液， 静置静置10min 10min 加水加水10ml 10ml 振动，静置振动，静置分层分层用力摇动用力摇动？ 作作 业业描述各实验结果并作出解释描述各实验结果并作出解释二、叶绿素二、叶绿素a a、b b含量测定含量测定 实验原理实验原理（含量占

6、（含量占3/4）（含量占（含量占1/4）叶绿体色素叶绿体色素叶绿素叶绿素类胡萝卜素类胡萝卜素胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素b叶绿素叶绿素au 分光光度法分光光度法 根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力，根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力，用用Lambert- BeerLambert- Beer定律计算出叶绿素的含量。定律计算出叶绿素的含量。 Lambert- Beer定律定律 A KLC 吸光度吸光度吸收系数吸收系数浓度浓度叶绿素叶绿素a a的最大吸收峰：的最大吸收峰：663nm663nm叶绿素叶绿素b b的最大吸收峰：的最大吸收峰：645nm645nm Lambert- Beer定律定律 A K LC A吸光度吸光度 K吸收系数吸收系数 C浓度浓度Ka663：Kb663：Ka645：Kb645：A663CaCbA645CaCbCaA663A645CbA645A663CA645A663 (mg / L)2. 2. 计算计算 1. 1. 提取液提取液1ml1ml，用丙酮稀释至，用丙酮稀释至10ml10ml分光光度计下分别读取分光光度计下分别读取A663A663