高考语文一轮总复习 第6部分 写作 专题十七 记叙文写作训练（一）记叙文体编写提纲训练课件 (20)

1、第第35讲细胞工程讲细胞工程2017备考备考最新考纲最新考纲1.植物的组织培养植物的组织培养()。2.动物的细胞培养与体细胞克隆动物的细胞培养与体细胞克隆()。3.细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体()。考点一植物细胞工程考点一植物细胞工程自主梳理自主梳理1.细胞工程细胞工程(1)操作水平：操作水平： 。(2)目的：按照人的意愿来改变细胞内的目的：按照人的意愿来改变细胞内的或或获得获得。细胞水平或细胞器水平细胞水平或细胞器水平遗传物质遗传物质细胞产品细胞产品2.植物细胞的全能性植物细胞的全能性(1)概念：具有某种生物全部概念：具有某种生物全部的任何一个细胞的任何一个细胞,都都具有发育成具

2、有发育成的潜能。的潜能。(2)原理：细胞内含有本物种的原理：细胞内含有本物种的。(3)全能性表达条件：具有完整的细胞结构全能性表达条件：具有完整的细胞结构,处于处于 状态状态,提供一定的提供一定的和其他适宜外界条件。和其他适宜外界条件。遗传信息遗传信息完整生物体完整生物体全部遗传信息全部遗传信息离体离体营养、激素营养、激素3.植物组织培养技术植物组织培养技术(1)原理：植物细胞具有原理：植物细胞具有 。(2)过程：过程：全能性全能性脱分化脱分化再分化再分化人工种子人工种子4.植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术(1)概念：将概念：将 的植物体细胞的植物体细胞,在一定条件下融合成在一定条件下融合

3、成 ,并把杂种细胞培育成并把杂种细胞培育成的技术。的技术。(2)操作流程操作流程不同种不同种杂种细胞杂种细胞新的植物体新的植物体(3)流程分析流程分析过程过程a为去除为去除 获得具有活力的原生质体获得具有活力的原生质体,用到的酶是用到的酶是。过程过程b是原生质体的融合是原生质体的融合,其原理是其原理是 。诱导诱导b融合的两种方法：物理法包括融合的两种方法：物理法包括 等；等；化学法一般用化学法一般用作为诱导剂。作为诱导剂。过程过程c是原生质体融合后再生出是原生质体融合后再生出。过程过程d是是技术技术,其原理是其原理是 。(4)意义：意义：。细胞壁细胞壁纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶细胞膜具有

4、一定的流动性细胞膜具有一定的流动性离心、振动、电激离心、振动、电激聚乙二醇聚乙二醇(PEG)细胞壁细胞壁植物组织培养植物组织培养细胞的全能性细胞的全能性克服了远缘杂交不亲和的障碍克服了远缘杂交不亲和的障碍5.植物细胞工程的应用植物细胞工程的应用(1)植物繁殖的新途径植物繁殖的新途径(连线连线)(2)作物新品种的培育作物新品种的培育单倍体单倍体育种年限育种年限基因突变基因突变突变突变植物组织培养植物组织培养愈伤组织愈伤组织跟进题组跟进题组1.传统的人工繁殖兰花的方法是分株繁殖和用种子播种传统的人工繁殖兰花的方法是分株繁殖和用种子播种,随着科随着科学技术的进步学技术的进步,人们开始采用人们开始采用

5、“组织培养繁殖兰花组织培养繁殖兰花”,如图所如图所示。示。(1)植物组织培养是在植物组织培养是在_和人工培养条件下和人工培养条件下,将将_的植物组织、器官、细胞的植物组织、器官、细胞,培养在人工配制的培养在人工配制的_上上,诱导诱导其产生其产生_、丛芽、丛芽,最终发育成完整植株的过程。最终发育成完整植株的过程。(2)兰花的叶肉细胞之所以能培养为新个体兰花的叶肉细胞之所以能培养为新个体,是因为细胞中含有是因为细胞中含有_,具有发育成完整个体的潜能具有发育成完整个体的潜能,这种潜能叫这种潜能叫_。(3)请 用 简 单 的 文 字 和箭头请 用 简 单 的 文 字 和箭头 ,绘出绘出 之间的关 系之

6、间的关 系_。(4)有人想到利用植物体细胞杂交技术解决兰花生根速度慢、幼苗有人想到利用植物体细胞杂交技术解决兰花生根速度慢、幼苗生存能力弱的好办法生存能力弱的好办法,但操作后得到的但操作后得到的“韭菜韭菜兰花兰花”,并没有预并没有预想中的想中的“繁殖容易繁殖容易,香气浓郁香气浓郁”,可能的原因是可能的原因是_。(1)植物组织培养的关键植物组织培养的关键条件：离体条件：离体,一定营养物质一定营养物质,激素激素(生长素、细胞分裂素生长素、细胞分裂素)等。等。培养基状态培养基状态:固体培养基固体培养基(需脱分化生根培养基及生芽培养基需脱分化生根培养基及生芽培养基)体内细胞未表现全能性的原因：基因的表

7、达具有选择性。体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。(2)植物激素在植物组织培养中的作用植物激素在植物组织培养中的作用生长素/细胞分裂素的比值作用效果比值高时促进根分化、抑制芽形成比值低时促进芽分化、抑制根形成比值适中促进愈伤组织形成(3)光照的使用光照的使用脱分化阶段不需要给予光照脱分化阶段不需要给予光照,再分化阶段需要给予光照再分化阶段需要给予光照,以利于叶以利于叶绿素的形成。绿素的形成。2.(2015天津卷天津卷,7)DHA对脑神经发育至关重要。以对脑神经发育至关重要。以A、B两种单两种单细胞真核藻为亲本细胞真核藻为亲本,利用细胞融合技术选育高产利用细胞融合技术选育高产DHA

8、融合藻。融合藻。两种藻特性如下表。两种藻特性如下表。据表回答：据表回答：(1)选育的融合藻应具有选育的融合藻应具有A藻藻_与与B藻藻_的优点。的优点。(2)诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻,其目的是获得其目的是获得_。(3)通过以下三步筛选融合藻通过以下三步筛选融合藻,步骤步骤_可淘汰可淘汰B藻藻,步骤步骤_可淘汰生长速率较慢的藻落可淘汰生长速率较慢的藻落,再通过步骤再通过步骤_生产生产所需的融合藻。所需的融合藻。步骤步骤a：观察藻落的大小：观察藻落的大小步骤步骤b：用不含有机碳源：用不含有机碳源(碳源碳源生物生长的碳素来源生物生长的碳素来源)的培养的培养基进行

9、光照培养基进行光照培养步骤步骤c：测定：测定DHA含量含量(4)以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验,结果如下图。结果如下图。甲组条件下甲组条件下,融合藻产生融合藻产生H的细胞器是的细胞器是_；丙组条件；丙组条件下产生下产生ATP的细胞器是的细胞器是_。与甲、丙两组相比与甲、丙两组相比,乙组融合藻生长速率较快乙组融合藻生长速率较快,原因是在该培原因是在该培养条件下养条件下_。甲、乙两组甲、乙两组DHA产量均较高产量均较高,但实际生产中往往采用甲组的培但实际生产中往往采用甲组的培养条件养条件,其原因是其原因是_。参考答案参考答案(1)产生产生DHA

10、、自养特性快速增长、自养特性快速增长 (2)原生质体原生质体 (3)bac (4)线粒体、叶绿体线粒体线粒体、叶绿体线粒体融合藻既能光融合藻既能光能自养又能异养融合藻利用光能和简单的无机物能较快生长能自养又能异养融合藻利用光能和简单的无机物能较快生长,不需要添加葡萄糖不需要添加葡萄糖,既可降低成本既可降低成本,也可防止杂菌生长也可防止杂菌生长1.植物体细胞杂交后的遗传物质分析植物体细胞杂交后的遗传物质分析(1)遗传特性：杂种植株中含有两种植物的遗传物质遗传特性：杂种植株中含有两种植物的遗传物质,故杂种植株故杂种植株具备两种植物的遗传特性。具备两种植物的遗传特性。(2)染色体组数染色体组数染色体

11、组数两种植物体细胞内染色体组数之和。染色体组数两种植物体细胞内染色体组数之和。植物体细胞杂交形成的杂种植株植物体细胞杂交形成的杂种植株,有几个染色体组就称为几倍有几个染色体组就称为几倍体。体。2.植物组织培养与植物体细胞杂交的比较植物组织培养与植物体细胞杂交的比较考点二动物细胞工程考点二动物细胞工程自主梳理自主梳理1.动物细胞培养动物细胞培养动物细胞工程技术的基础动物细胞工程技术的基础(1)动物细胞的培养过程动物细胞的培养过程胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养二氧化碳二氧化碳培养箱培养箱胰蛋白酶胰蛋白酶传代传代(2)培养条件培养条件无菌、无毒的环境：对无菌、无毒的环境：对和所有培养用具进行无菌和

12、所有培养用具进行无菌处理处理,添加添加,定期更换培养液以清除定期更换培养液以清除。营养：除正常的有机和无机营养外营养：除正常的有机和无机营养外,加入加入 等一等一些天然成分。些天然成分。适宜的温度和适宜的温度和pH：温度为：温度为 (哺乳动哺乳动物物),pH为为。气体环境：含气体环境：含95%空气加空气加 的混合气体的混合气体,其中后者的其中后者的作用是作用是。(3)应用：生物制品的生产、检测应用：生物制品的生产、检测 、医学研究。、医学研究。培养液培养液抗生素抗生素代谢产物代谢产物血清、血浆血清、血浆36.50.5 7.27.45%CO2维持培养液的维持培养液的pH有毒物质有毒物质2.动物体

13、细胞核移植技术和克隆动物动物体细胞核移植技术和克隆动物(1)动物体细胞核移植技术的过程动物体细胞核移植技术的过程细胞培养细胞培养重组细胞重组细胞去核去核供体供体(2)原理：原理：。(3)结果：结果： 。(4)应用：应用：加速家畜加速家畜 进程进程,促进优良畜群繁育。促进优良畜群繁育。保保护护 。生产医用蛋白。生产医用蛋白。作为异种移植的供体。作为异种移植的供体。用用于组织器官的移植。于组织器官的移植。动物体细胞核具有全能性动物体细胞核具有全能性产生新个体产生新个体遗传改良遗传改良濒危物种濒危物种3.动物细胞融合和单克隆抗体的制备动物细胞融合和单克隆抗体的制备(1)动物细胞融合动物细胞融合原理：

14、原理：。融合方法：聚乙二醇融合方法：聚乙二醇(PEG)、 、电激等。、电激等。意义：突破了意义：突破了 的局限的局限,使使成为成为可能可能,也为制造也为制造 开辟了新途径。开辟了新途径。细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活的病毒灭活的病毒有性杂交方法有性杂交方法远缘杂交远缘杂交单克隆抗体单克隆抗体(2)单克隆抗体单克隆抗体制备过程制备过程优点：特异性强、优点：特异性强、 ,可大量制备。可大量制备。用途：作为用途：作为 ；用于治疗疾病和；用于治疗疾病和 。杂交瘤细胞杂交瘤细胞能产生所需抗体能产生所需抗体灵敏度高灵敏度高运载药物运载药物诊断试剂诊断试剂图图1中中a、b分别为骨髄瘤细胞和已免疫的分别为骨

15、髄瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞淋巴细胞,图图2为单为单克隆抗体制备流程克隆抗体制备流程(顺序已被打乱顺序已被打乱)。图图1图图2解读解读(1)针对图针对图1为了能充分发挥图中两种细胞各自的特点为了能充分发挥图中两种细胞各自的特点,经特殊经特殊处理处理,在促细胞融合因子的作用下在促细胞融合因子的作用下,两种细胞发生融合两种细胞发生融合,形成图中形成图中的的d细胞细胞,d细胞的特点是细胞的特点是_。由。由d细胞产生的细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较抗体与普通血清抗体相比较,具有具有_等特点。等特点。(2)图图2中中B注射的物质是什么？其目的是什么？注射的物质是什么？其目的是什么？(3)在获取在获取

16、C细胞时细胞时,曾筛选淘汰了哪些细胞？曾筛选淘汰了哪些细胞？(4)请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。序连接起来。提示提示(1)既能无限增殖既能无限增殖,又能产生特定的抗体特异性强、灵又能产生特定的抗体特异性强、灵敏度高、并可大量制备敏度高、并可大量制备(2)特定抗原刺激机体发生免疫应答特定抗原刺激机体发生免疫应答,从而产生效应从而产生效应B淋巴细淋巴细胞胞(浆细胞浆细胞)(3)未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“BB”细胞、细胞、“瘤瘤瘤瘤”细胞细胞)都会被淘汰都会被淘汰,

17、只有融合的杂交瘤细胞只有融合的杂交瘤细胞(“B瘤瘤”细细胞胞)才能生长才能生长(4)如图所示：如图所示： 跟进题组跟进题组1.回答下列有关动物细胞培养的问题：回答下列有关动物细胞培养的问题： (1)在动物细胞培养过程中在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面当贴壁细胞分裂生长到细胞表面_时时,细胞会停止分裂增殖细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的这种现象称为细胞的_。此时。此时,瓶壁上形成的细胞是瓶壁上形成的细胞是_层。要使贴壁的层。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来细胞从瓶壁上分离下来,需要用酶处理需要用酶处理,可用的酶是可用的酶是_。(2)随着细胞传代次数的增多随着细胞传代次数的增

18、多,绝大部分细胞分裂停止绝大部分细胞分裂停止,进而出现进而出现_现象；但极少数细胞可以连续增殖现象；但极少数细胞可以连续增殖,其中有些细胞会因其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成遗传物质发生改变而变成_细胞细胞,该种细胞的黏着性该种细胞的黏着性_,细胞膜表面蛋白质细胞膜表面蛋白质(糖蛋白糖蛋白)的量的量_。(3)现用某种大分子染料对细胞进行染色时现用某种大分子染料对细胞进行染色时,观察到死细胞被染色观察到死细胞被染色,而活细胞不被染色而活细胞不被染色,原因是原因是_。(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目,最好选用分裂最好选用分裂_期的细胞在显微镜

19、下进行观察。期的细胞在显微镜下进行观察。(5)在细胞培养过程中在细胞培养过程中,通常在通常在_条件下保存细胞。因为条件下保存细胞。因为在这种条件下在这种条件下,细胞中细胞中_的活性降低的活性降低,细胞细胞_速率速率降低。降低。参考答案参考答案(1)相互接触接触抑制单相互接触接触抑制单(或一或一)胰蛋白酶胰蛋白酶(2)衰老甚至死亡不死性降低减少衰老甚至死亡不死性降低减少(3)活细胞的细胞膜活细胞的细胞膜具有选择透过性具有选择透过性,大分子染料不能进入活细胞内大分子染料不能进入活细胞内(或死细胞的细或死细胞的细胞膜丧失了选择透过性胞膜丧失了选择透过性,大分子染料能够进入死细胞内而着色大分子染料能够

20、进入死细胞内而着色) (4)中中(5)冷冻冷冻(或超低温、液氮或超低温、液氮)酶新陈代谢酶新陈代谢(1)动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养的原动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养的原因：幼龄动物组织或胚胎的细胞分化程度低因：幼龄动物组织或胚胎的细胞分化程度低,增殖能力很强增殖能力很强,更易更易于培养。于培养。(2)正常动物细胞培养的特点正常动物细胞培养的特点贴壁生长和接触抑制。悬液中贴壁生长和接触抑制。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为贴壁生长。细胞数目不断称为贴壁生长。细胞数目不断增多增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时当贴壁细

21、胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂细胞就会停止分裂增殖增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。而癌细胞丧失了以上特性。这种现象称为细胞的接触抑制。而癌细胞丧失了以上特性。(3)培养过程培养过程2.(2015高考安徽卷高考安徽卷,31)科研人员采用转基因体细胞克隆技科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊术获得转基因绵羊,以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白医用蛋白,其技术路线如图。其技术路线如图。(1)由过程由过程获得的获得的A为为_。(2)在核移植之前在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核必须先去掉受体卵母细胞的核,目的是目的是_。

22、受体应选用。受体应选用_期卵母细胞。期卵母细胞。(3)进行胚胎移植时进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生生_,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆,理论上可获得无限理论上可获得无限个转基因绵羊个转基因绵羊,这是因为这是因为_。解析解析(1)在基因工程中在基因工程中,构建重组载体后才能将目的基因导入受体构建重组载体后才能将目的基因导入受体细胞。细胞。(2)核移植技术选用的成熟卵母细胞处于减数第二次分裂中核移

23、植技术选用的成熟卵母细胞处于减数第二次分裂中期期(M中期中期),需去掉细胞核以保证得到的克隆动物的核遗传物质需去掉细胞核以保证得到的克隆动物的核遗传物质来自于含目的基因的成纤维细胞。来自于含目的基因的成纤维细胞。(3)胚胎移植时受体动物对移入胚胎移植时受体动物对移入的胚胎基本不发生免疫排斥反应的胚胎基本不发生免疫排斥反应,这为胚胎的存活提供了可能。这为胚胎的存活提供了可能。(4)由于整合有目的基因的胎儿成纤维细胞具有增殖能力由于整合有目的基因的胎儿成纤维细胞具有增殖能力,可进行传代可进行传代培养培养,所以理论上可利用动物细胞培养技术和核移植技术所以理论上可利用动物细胞培养技术和核移植技术,获得

24、无获得无限个转基因绵羊。限个转基因绵羊。参考答案参考答案(1)含目的基因的重组载体含目的基因的重组载体(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞 M(3)免疫排斥反应免疫排斥反应(4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养(1)核移植时为何选核移植时为何选M中期卵母细胞？中期卵母细胞？此类细胞体积大此类细胞体积大,易于操作；易于操作；卵黄多卵黄多,营养物质丰富营养物质丰富,可为发育可为发育提供充足的营养；提供充足的营养；卵母细胞的细胞质中存在激发细胞核全能卵母细胞的细胞质中存在激发细胞核全能性表达的物质。性表

25、达的物质。(2)克隆动物是由重组的细胞经培养而来的克隆动物是由重组的细胞经培养而来的,该重组细胞的细胞质该重组细胞的细胞质基因来源于受体细胞基因来源于受体细胞,细胞核基因来源于提供细胞核的亲本细胞核基因来源于提供细胞核的亲本,其遗其遗传物质来自传物质来自2个亲本。个亲本。(3)核移植中供体动物、提供卵母细胞的动物、代孕动物和克隆核移植中供体动物、提供卵母细胞的动物、代孕动物和克隆动物之间的关系：克隆动物绝大部分性状与供体动物相同动物之间的关系：克隆动物绝大部分性状与供体动物相同,少数少数性状与提供卵母细胞的动物相同性状与提供卵母细胞的动物相同,与代孕动物的性状无遗传关系。与代孕动物的性状无遗传

26、关系。(4)动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术(克隆克隆)从生殖方式的角度看属无性生从生殖方式的角度看属无性生殖殖,重组细胞相当于受精卵重组细胞相当于受精卵,需要动物细胞培养和胚胎工程技术的需要动物细胞培养和胚胎工程技术的支持。支持。3.微载体是由天然葡聚糖等组成的颗粒微载体是由天然葡聚糖等组成的颗粒,其直径很小其直径很小,常用于贴壁常用于贴壁生长的细胞培养。微载体大规模细胞培养技术已广泛应用于生长的细胞培养。微载体大规模细胞培养技术已广泛应用于科研生产科研生产,其流程图如下。其流程图如下。(1)微载体加入培养罐中后微载体加入培养罐中后,通过搅动使其保持悬浮状态通过搅动使其保持悬浮状态,

27、这样不这样不仅能让细胞与培养液充分接触仅能让细胞与培养液充分接触,而且便于细胞的而且便于细胞的_,所以所以选用的微载体颗粒直径应尽可能小。选用的微载体颗粒直径应尽可能小。(2)图中过程图中过程a的处理是的处理是_。(3)培养罐培养所需的条件是培养罐培养所需的条件是_。(4)在产生单克隆抗体过程中在产生单克隆抗体过程中,杂交瘤细胞在加入培养罐前杂交瘤细胞在加入培养罐前,需需进行筛选进行筛选,其目的是筛选出其目的是筛选出_的细胞群。的细胞群。(5)转基因工程和动物细胞培养技术均能用于生产乙肝疫苗转基因工程和动物细胞培养技术均能用于生产乙肝疫苗,它它们的根本区别在于导入的受体不同们的根本区别在于导入

28、的受体不同,前者是导入能高效快速表前者是导入能高效快速表达的达的_,而后者是导入仓鼠卵巢细胞。而后者是导入仓鼠卵巢细胞。参考答案参考答案(1)生长繁殖和代谢生长繁殖和代谢(2)用胰蛋白酶或胶原蛋白酶用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理处理(3)无菌、无毒环境无菌、无毒环境,营养物质营养物质,适宜的温度和适宜的温度和pH及气体及气体环境环境(4)未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞(5)受精受精卵卵动物细胞融合与单克隆抗体制备的归纳动物细胞融合与单克隆抗体制备的归纳(1)制备单克隆抗体时选用一种抗原处理的制备单克隆抗体时选用一种抗原处理的B淋巴细胞与骨髓瘤淋巴细胞与骨髓

29、瘤细胞进行细胞融合细胞进行细胞融合,产生杂交瘤细胞产生杂交瘤细胞,杂交瘤细胞兼有两个亲本细杂交瘤细胞兼有两个亲本细胞的特性胞的特性在体外培养条件下能不断增殖在体外培养条件下能不断增殖,同时能产生出某种同时能产生出某种特异性的抗体。特异性的抗体。(2)进行动物细胞的诱导融合进行动物细胞的诱导融合,形成的杂种细胞有三种：形成的杂种细胞有三种：AA型、型、BB型、型、AB型。只有型。只有AB型才是我们所需要的杂种细胞型才是我们所需要的杂种细胞,所以需要所以需要用选择性培养基进行筛选。用选择性培养基进行筛选。(3)单克隆抗体制备过程中的两次筛选单克隆抗体制备过程中的两次筛选第一次筛选：利用特定选择培养

30、基筛选第一次筛选：利用特定选择培养基筛选,获得杂交瘤细胞获得杂交瘤细胞,即即AB型细胞型细胞(A为浆细胞为浆细胞,B为骨髓瘤细胞为骨髓瘤细胞),筛选掉筛选掉A、B、AA、BB型型细胞。细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原第二次筛选：利用多孔板法和抗原抗体杂交法筛选抗体杂交法筛选,获得产生获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。特定抗体的杂交瘤细胞。易错易混防范清零易错易混防范清零易错清零易错清零易错点易错点1不清楚动物细胞培养时不清楚动物细胞培养时,为何使用胰蛋白酶而不使用为何使用胰蛋白酶而不使用胃蛋白酶胃蛋白酶点拨进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞点拨进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说

31、明细说明细胞间的物质主要是蛋白质。分散细胞时不能用胃蛋白酶胞间的物质主要是蛋白质。分散细胞时不能用胃蛋白酶,因为因为胃蛋白酶作用的适宜胃蛋白酶作用的适宜pH约为约为1.8。胰蛋白酶作用的适宜。胰蛋白酶作用的适宜pH为为7.27.8,而多数动物细胞培养的适宜而多数动物细胞培养的适宜pH为为7.27.4。易错点易错点2混淆原代培养与传代培养混淆原代培养与传代培养点拨点拨(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养,没有分瓶培没有分瓶培养之前的细胞培养。养之前的细胞培养。(2)传代培养：原代培养的细胞生长、繁殖一定时间后传代培养：原代培养的细胞生长、繁殖一定时间后,由于

32、空由于空间不足或细胞密度过大导致接触抑制影响细胞的生长间不足或细胞密度过大导致接触抑制影响细胞的生长,因此需因此需要重新用胰蛋白酶等处理要重新用胰蛋白酶等处理,进行分瓶扩大培养进行分瓶扩大培养,即传代培养。即传代培养。易错点易错点3误认为动物细胞培养液中加入误认为动物细胞培养液中加入5%CO2的目的是维持的目的是维持气体平衡或用于呼吸气体平衡或用于呼吸点拨动物的细胞培养时点拨动物的细胞培养时,需向培养液中加入需向培养液中加入5%CO2(95%空气空气),加入加入CO2的目的是的目的是“维持培养液的维持培养液的pH”。易错点易错点4不清楚动物细胞克隆化培养时为何常选不清楚动物细胞克隆化培养时为何

33、常选10代以内的代以内的细胞细胞,而而“瘤细胞瘤细胞”却为却为“50代以后代以后”点拨取供体动物的体细胞培养点拨取供体动物的体细胞培养,一般选用传至一般选用传至10代以内的细代以内的细胞胞,因为因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型,保证了保证了供体细胞正常的遗传基础。然而欲获得供体细胞正常的遗传基础。然而欲获得“无限增殖无限增殖”的的“瘤细瘤细胞胞”则往往在则往往在“50代以后代以后”,其遗传物质已发生变化其遗传物质已发生变化,具具“癌变癌变”特性。特性。易错点易错点5不清楚植物脱毒苗培养时选择要求及原理不清楚植物脱毒苗培养时选择要求及原理点拨由

34、于植物分生区附近点拨由于植物分生区附近(如茎尖如茎尖)的病毒极少的病毒极少,所以常采用所以常采用茎尖组织培养技术获得脱毒苗。茎尖组织培养技术获得脱毒苗。易错点易错点6误认为植物组织培养均需误认为植物组织培养均需“再分化至幼苗再分化至幼苗”,误认为误认为“人工种子人工种子”即平常所说的即平常所说的“种子种子”点拨点拨(1)组织培养的目的不同组织培养的目的不同,培养的阶段不同。如：生产细培养的阶段不同。如：生产细胞代谢产物胞代谢产物,只需培养至愈伤组织时期；生产人工种子只需培养至愈伤组织时期；生产人工种子,则需要则需要培养至胚状体时期；获得植株就需培养至幼苗时期。培养至胚状体时期；获得植株就需培养至幼苗时期。(2)人工人工种子是通过无性生殖种子是通过无性生殖(植物体细胞的组织培养技术植物体细胞的组织培养技术