植物制片技术研究生课件

1、 植物解剖与制片技术植物解剖与制片技术 Plant Anatomy and Sectioning Technology 学时分配：学时分配：理论课理论课 4学时；实验课学时；实验课 24学时学时。 教学目的：教学目的：通过对植物制片技术的掌握，为研通过对植物制片技术的掌握，为研究植物胚胎学、植物解剖学、作物栽培、遗传究植物胚胎学、植物解剖学、作物栽培、遗传育种等教学、科研提供必备的技术。育种等教学、科研提供必备的技术。 主要参考书目：主要参考书目：1 植物显微技术，王灶安主编，农业出版社；植物显微技术，王灶安主编，农业出版社；2 植物制片技术，李正理编著，科学出版社；植物制片技术，李正理编著，

2、科学出版社；3 西北植物学报西北植物学报，植物研究植物研究，武汉植物学武汉植物学研究研究，植物分类学报植物分类学报等学术杂志。等学术杂志。考核方式：撰写实验报告：对所观察的器官结构考核方式：撰写实验报告：对所观察的器官结构进行详细的描述并作进一步的讨论，附上植物器进行详细的描述并作进一步的讨论，附上植物器官显微结构图。官显微结构图。植物显微制片技术植物显微制片技术 植物制片的类型和方法u切片法：徒手切片法徒手切片法 石蜡切片法石蜡切片法 滑走切片机切片法滑走切片机切片法 半薄切片法半薄切片法 超薄切片法超薄切片法u非切片法：非切片法：离析法离析法 压片法压片法 整体封存法整体封存法石蜡法制片原

3、理与方法石蜡法制片原理与方法 一、材料的选择与分割一、材料的选择与分割 1. 新鲜、健康、有代表性的材料；新鲜、健康、有代表性的材料； 2.生长发育的不同阶段生长发育的不同阶段; 3.大小适当，大小适当，0.5cm左右左右. 二、杀生、固定与保存二、杀生、固定与保存 杀生：杀生： 固定：固定： 1 根据固定目的物本身的结构性质；根据固定目的物本身的结构性质； 2 分割大的材料；分割大的材料； 3 抽气；抽气； 4 标记标记. (整染）整染） 固定液的配置及使用：固定液的配置及使用： FAA固定液：固定液： 适用范围：根、茎、叶、花药、子房适用范围：根、茎、叶、花药、子房 固定时间：固定时间：2

4、4h 低温低温 配方配方 ： 福尔马林福尔马林 5ml 冰醋酸冰醋酸 5ml 70% 酒精酒精 90ml 卡诺固定液：卡诺固定液： 适用范围：根尖、花药、子房适用范围：根尖、花药、子房 固定时间：小于固定时间：小于24h ，15-30分钟分钟 配方配方 ： a b 纯酒精纯酒精 15ml 30ml 氯仿氯仿 5ml 冰醋酸冰醋酸 5ml 1ml 保存：保存： 70% 酒精酒精 三、脱水三、脱水 作用：作用：1 除去组织内的水分；除去组织内的水分； 2 使石蜡顺利进入细胞内使石蜡顺利进入细胞内脱水剂：脱水剂： 1 酒精：酒精：50%-70%-85%-95%-100%（梯度脱水）（梯度脱水） 2

5、二氧杂环己烷二氧杂环己烷 3 正丁醇正丁醇 4 叔丁醇叔丁醇 5 丙酮丙酮 四四 、透明、透明 作用：作用：1 使材料透明、干净；使材料透明、干净； 2 便于包埋剂及封固剂的进入便于包埋剂及封固剂的进入 透明剂：透明剂： 1 二甲苯：二甲苯：1/2纯酒精纯酒精+1/2二甲苯二甲苯 二甲苯二甲苯 2 甲苯或苯；甲苯或苯； 3 氯仿氯仿 4 丁香油、香柏油等丁香油、香柏油等 五、浸蜡五、浸蜡 1 低温浸蜡：低温浸蜡：40左右（左右（1夜）夜） 2 高温浸蜡：高温浸蜡：58左右左右 （6小时以内）小时以内） 六、包埋六、包埋 1 选取合适熔点的石蜡；选取合适熔点的石蜡； 2 包埋用具的准备包埋用具的

6、准备 要点：动作迅速要点：动作迅速 七、切片七、切片 1 修块修块; 2 切片切片: 厚度在厚度在8-14m a 切片有裂纹切片有裂纹 b 蜡带弯曲蜡带弯曲 c 材料破碎材料破碎 d 切片卷成圆筒切片卷成圆筒 e 蜡带皱缩蜡带皱缩 八、粘片与展片八、粘片与展片 粘片剂粘片剂: 明胶明胶 1 g 石炭酸石炭酸 2 g 甘油甘油 15 ml 蒸馏水蒸馏水 100ml 方法方法: a 38 左右左右 b 涂抹粘片剂涂抹粘片剂 c 将蜡片置于玻片中央将蜡片置于玻片中央 d 材料呈透明质感材料呈透明质感 e 38 烘烤至干燥烘烤至干燥 f 标记标记 九、脱蜡九、脱蜡 方法方法: 二甲苯二甲苯 30分钟分

7、钟(40 温箱中温箱中) 二甲苯二甲苯 10分钟分钟 十、染色十、染色 （一）染料的分类（一）染料的分类 a 来源：天然来源：天然 人工人工 b 化学性质：碱性：番红化学性质：碱性：番红 酸性：固绿酸性：固绿 中性：中性： c 性能：性能： 核染料：核染料： 苏木精、番红苏木精、番红 细胞质染料：固绿、苯胺蓝细胞质染料：固绿、苯胺蓝 细胞壁染料：番红细胞壁染料：番红 组织化学染料；苏丹组织化学染料；苏丹 荧光染料：荧光染料： （二）几种常用染料的性质及配制（二）几种常用染料的性质及配制 a 苏木精：溶于酒精、甘油和热水中。苏木精：溶于酒精、甘油和热水中。 b 番红：溶于酒精、水中。番红：溶于酒

8、精、水中。 c 固绿固绿 ：易溶于酒精。：易溶于酒精。 d 碱性品红：作为组化试剂，用于检验碱性品红：作为组化试剂，用于检验DNA、多糖物质等、多糖物质等 （三）一般的染色方法（三）一般的染色方法 1 材料是否完整材料是否完整: 整体染色整体染色 切片染色切片染色 2 染料的种类染料的种类: 单染单染 二重染色二重染色 三重三重(多重多重)染色染色 （四）染色时注意的事项（四）染色时注意的事项 1 根据观察目的、样品的结构性质；根据观察目的、样品的结构性质； 2 溶液和染液的浓度相同；溶液和染液的浓度相同； 3 碱性染液先染，酸性染液后染；碱性染液先染，酸性染液后染； 4 染色可深不可浅；染色

9、可深不可浅； 5 染色的时间；染色的时间； 十一、封藏与封藏剂十一、封藏与封藏剂目的：目的：1 长期保存长期保存 2 使材料可以清楚的显现出来使材料可以清楚的显现出来封藏剂种类：封藏剂种类： 1 树脂性封藏剂：树脂性封藏剂：香柏油、合成树脂香柏油、合成树脂、加拿大加拿大树胶：溶于二甲苯、氯仿等溶剂，熔点为树胶：溶于二甲苯、氯仿等溶剂，熔点为61，不能加热，折光率近似玻璃，不能加热，折光率近似玻璃，1.547。 2 水溶性封藏剂水溶性封藏剂：阿拉伯树胶、甘油、明胶、：阿拉伯树胶、甘油、明胶、糖浆等。糖浆等。 十二十二 显微观察与照相显微观察与照相石蜡法制片流程石蜡法制片流程 步骤一：步骤一： （

10、整染）（整染） 取材取材 固定固定脱水脱水(70%酒精酒精85%酒精酒精95%酒精酒精100%酒精酒精100%酒精酒精,每每步步2-4h)透明（透明（1/2二甲苯二甲苯+1/2酒精，酒精， 2h；纯二甲苯，；纯二甲苯，2h）低温浸蜡（加碎蜡低温浸蜡（加碎蜡至饱和，至饱和，40，过夜）（一天），过夜）（一天） 步骤二：步骤二：继续低温继续低温浸蜡浸蜡（40，过夜），过夜）高温浸蜡（高温浸蜡（58，换纯蜡，每，换纯蜡，每2h换蜡一次，换蜡一次，不超过不超过6h）包埋包埋（一个蜡船放（一个蜡船放3-4个材料）（一天）个材料）（一天） 步骤三：步骤三：修块修块切片切片粘片粘片展片展片 烘片（一天）烘片（一天） 步骤四：脱蜡与染色：步骤四：脱蜡与染色：二甲苯二甲苯（30分钟，分钟，40度温箱）度温箱）二甲苯二甲苯（10分钟）分钟） 复水（复水（ 1/2二二 甲苯甲苯+1/2酒精酒精100%酒精酒精95%酒精，酒精，每步每步10分钟分钟） 染色（番红，染色（番红，85%酒精配置，酒精配置，过夜过夜）（半天）（半天） 步骤五：步骤五