SOP-QC-001样本无菌检验标准操作规程(SOP)

1、泛宇生物工程科技有限公司题目:产品无菌检验标准操作规程编号：SOP-QC-001版本号：01页数：6颁发部门：质量管理机构生效日期：分发部门：生产部门制定人：审核人：批准人：制定日期：2016/6/15审核日期：批准日期：目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。范围：本标准适用于本公司静脉注射产品无菌检验操作。责任者：质管部、化验室主任、 QC检验员内容：1、标准依据：中国药典2010年版二部附录 XI H。2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。3、环境

2、要求：该项检查应在环境洁净度万级（ C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。其全过程必须严格遵守无 菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检 出。操作前环境洁净度应经验证。日常检验需对试验环境进行监控。4、方法验证：进行该项检查前应按照无菌检查方法验证规程确认 该方法的适用性。5、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技 术培训。6、检验数量及检验量 ：6.1、每支供试品接入每种培养基的最少量：5ml （ 100ml-500ml ） , 1ml（20-100ml）,0.5ml（5-20ml）。7、细菌培养温度为 3035 C,真菌

3、培养温度为 2328 C。8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、微量移液器、剪刀、镶子、注射器盒、75%酒精棉球9、消毒剂配制:9.1、 75%乙醇溶液（配制酒精棉球用）。9.2、 0.2 %新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。9.3、 2%来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。题目:产品无菌检验标准操作规程编号：SOP-QC-001版本号：01页数：6颁发部门：质量管理机构生效日期：分发部门：生产部门制定人：审核人：批准人：制定日期：2016/6/15审核日期：批准日期：10、试剂及培养基 的配制：10.

4、1、 0.1 %蛋白陈水溶液：取蛋白陈1.0g,加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1 ±0.2,分装，灭菌。10.2、 pH7.0灭菌氯化钠蛋白冻缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白陈1.0g,加水1000ml微温溶解，滤清， 分装，灭菌。10.3、 根据供试品特性，可选用其他经验证的适宜溶液作为稀释液、冲 洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性 剂或中和剂。10.4、 硫乙醇酸盐流体培养基：按商品说明称取培养基，配制，摇匀， 分装，按培养基说明高压灭菌，保存备用。分装的容器应适当，具装量与 容器高度

5、比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深 度的1/2。供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5,否则须经100c水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却只限加热一次，并应防止被污染。10.5、 改良马丁培养基：取商品干燥培养基28.5g,加水1000ml,加热溶解，分装，121c高压灭菌15分钟（若干燥培养基结块应勿使用）。10.6、 选择性培养基：按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培 养基灭菌或使用前加入适量的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方 法验证试验（附表1常见干扰物的中和剂或灭活方法见微生物限度检查法 中）。10.

6、7、 营养肉汤培养基：按商品说明称取培养基，配制，加热，溶解， 分装，按培养基说明高压灭菌，保存备用。10.8、 营养琼脂培养基：取商品干燥培养基3.4g,加蒸储水1000ml,加热溶解分装，121c高压灭菌15分钟。10.9、 改良马丁琼脂培养基：取商品干燥培养基制备或按改良马丁培养 基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调节PH值使灭菌后PH值为6.4 ±0.2,题目:产品无菌检验标准操作规程编号：SOP-QC-001版本号：01页数：6颁发部门：质量管理机构生效日期：分发部门：生产部门制定人：审核人：批准人：制定日期：2016/6/15审核日期：批准日期：分装，121c高压灭菌1

7、5分钟。10.10、 制备好的培养基应保存在225C,避光的环境中。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用。若保存于密闭容器中，一般可 在一年内使用。10.11、 条件允许一般建议购买质量合格培养基成品。11、试验前的准备工作11.1、 用具的洗刷11.1.1、 玻璃器皿：如试管、量筒、移液管、刻度吸管、离心管、三角 瓶、双碟等用清洁液浸泡，用流水洗涤，再用蒸储水洗涤45次，倒置,晾干。试管、移液管、三角瓶等使用过后，应先消毒倒出内容物后，再清 洗晾干。11.1.2、 注射器用水冲洗后，用洗涤剂冲洗，然后用水冲洗干净，再用 蒸储水冲洗3次。11.1.3、 剪刀、银子用水及去污粉洗涤，用水

8、冲洗干净，再用蒸储水洗 涤3次。11.1.4、 多用薄膜过滤器，玻璃管等用饮用水及蒸储水洗净、晾干。11.1.5、 洁净服、裤、帽子、口罩等用水洗涤洁净后，晾干。11.2、 用具的包扎及灭菌11.2.1、 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松塞入少许脱脂药物，然 后每支管用白纸严密卷好，再用两层牛皮纸一起包扎。11.2.2、 洗涤洁净的注射器及适配针头各部件与剪刀、银子一并入垫有 纱布的铝盒内，一层层放好，盖上纱布，将铝盒盖好，用牛皮纸包扎。11.2.3、 试管、三角瓶等在管（瓶）口塞上纱布棉纱用牛皮纸包装严密。11.2.6、 将洁净服、等用布口袋配套装入，扎紧口袋，用牛皮纸包扎好。11.2.7

9、、 将以上包扎好的用具在 121c蒸汽灭菌20分钟。或采取适宜的 灭菌方法。（适宜高温灭菌的器皿可采用160 c干热灭菌）11.2.8、 物品灭菌完毕，勿立即置冷处，以免急速冷却导致染菌，应置 恒温培养箱中干燥。题目:产品无菌检验标准操作规程编号：SOP-QC-001版本号：01页数：6颁发部门：质量管理机构生效日期：分发部门：生产部门制定人：审核人：批准人：制定日期：2016/6/15审核日期：批准日期：11.3、 洁净室的清洁与灭菌11.3.1、 洁净室及超净台，每周用高钮酸钾加甲醛薰蒸灭菌。11.3.2、 在每次操作前，应作好清洁工作，并用0.2%新洁尔灭溶液或2%来苏尔或75 %乙醇擦

10、洗超净台工作台面及可能污染的死角，然后开启紫 外线灯杀菌半小时，超净台空气过滤器自净半小时。操作完毕后，用上述 消毒液，再次处理工作台面，开紫外光灯杀菌30分钟以上。12、操作12.1、 开启传递窗外侧门，将物品表面消毒后置传递窗内，关闭窗门。12.2、 操作人员按进入洁净室更衣程序洗手、更衣换工作鞋，换无 菌衣、裤、口罩。进入洁净室内，开启内侧门，取出物品，关闭内侧门， 经缓冲间带入洁净室内，物品放置于实验台上，关闭洁净室门，人员离开 洁净室，继续用紫外灯照射半小时，关灯，再将用具放入超净台内。12.3、 配制的培养基应在凉暗处保存，一般不得超过2周。临用前细菌和霉菌培养基分别经 3035c

11、和2025 c培养不少于 48小时和72小时, 证明无菌生长时方可使用。12.4、 阳性对照试验：12.4.1、 应根据供试品特性选择阳性对照菌，无抑菌作用及抗革兰阳性 菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试 品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品以生抱梭菌为对照品；抗真 菌的供试品以白色念珠菌为对照品。12.4.2、 阳性对照试验的菌液制备同方法验证试验。12.4.3、 取各阳性对照菌悬液（含菌量小于100CFU）及供试品（用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量），以无菌操作加入相应培养基中，培养4872小时，检查应生长良好。（阳性对照试验操作应与微生物限度检

12、查操作隔离进行，防止交叉污染）。12.6、 阴性对照试验：取供试品的相应溶剂或稀释剂冲洗液同法操作， 培养7日应无菌生长。12.7、 供试品检查：题目:产品无菌检验标准操作规程编号：SOP-QC-001版本号：01页数：6颁发部门：质量管理机构生效日期：分发部门：生产部门制定人：审核人：批准人：制定日期：2016/6/15审核日期：批准日期：12.7.1、 供试品外部消毒：包装瓶外壁用75%乙醇擦拭，待干。12.7.2、 供试品的制备：用灭菌银子取出注射器，在火焰旁将针芯插入 针管并安上针头，注射器针头应迅速通过火焰数次，用注射器以无菌操作 直接吸取供试液。或抽至已灭菌玻璃容器中，用稀释剂稀释

13、为供试液，如 为可溶于水的固体供试品，应取规定量，加入适宜的灭菌稀释液溶解做为 供试液。12.7.3、 直接接种法：取供试品，按上述操作进行外部消毒和制备后，用灭菌注射器或微量移液器以无菌操作自每管中吸取供试品，在近火焰旁以左手持培养基，以 拇指和食指拔开培养基平板上盖，边缘通过火焰，移至火焰下侧，分别将 各供试品20ul （或规定量，除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符 合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%）沿培养基一端波浪形划线，每个供试品均分别接种葡萄糖琼脂培养基，硫乙醇酸盐流体培养基及 改良马丁培养基各1个，另取硫乙醇酸盐培养基一支，同法操作，操作结束后，接种对照菌液 20

14、ul （小于100CFU）作为供试品阳性对照。注入供试 液后，应用封口膜将硫乙醇酸盐培养基平板边缘封住隔绝空气。12.7.4、 硫乙醇酸盐培养基在3035c培养 7天,改良马丁培养基在2328c培养7大。培养期间应逐日检查是否有菌生长，并填写无菌检查 记录。如供试品管出现轻微浑浊或菌落，经培养后不能从外观判断时，可 取该培养基接种在另一支相同新鲜培养基中，细菌培养2大，真菌培养 3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现菌落；或取培养液涂片，染色， 镜检，判断是否有菌。12.8、 果判断：阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。 否则，试验无效。若供试品平板均正常经确证无菌生长，判供试品符

15、合规定；若供试品管中菌落并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明实验结果 无效，即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时，方可 判试验结果无效：题目:产品无菌检验标准操作规程编号：SOP-QC-001版本号：01页数：6颁发部门：质量管理机构生效日期：分发部门：生产部门制定人：审核人：批准人：制定日期：2016/6/15审核日期：批准日期：无菌检查试验所用设备及环境的 微生物监控结果不符合无 菌检查要 求；(2)回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素；(3)供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和(或) 无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试