BCA法测定蛋白质浓实用教案

1、 一一 实验目的实验目的 二二 实验原理实验原理(yunl)(yunl) 三三 实验材料与仪器实验材料与仪器 四四 实验步骤实验步骤 五五 注意事项注意事项 六六 思考题思考题第1页/共12页第一页，共13页。 一 实验(shyn)目的 学习BCA法测定蛋白质浓度的基本 原理(yunl) 掌握BCA法测定蛋白质的技术第2页/共12页第二页，共13页。二 实验(shyn)原理BCA (bicinchoninic acid，二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂(shj)反应,使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm有强

2、烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。第3页/共12页第三页，共13页。其反应式为: 蛋白质+BCA试剂+Cu2+ 复合物 混合物由苹果绿变为紫兰色复合物BCA测定蛋白质的范围是20g/ml200g/ml，微量BCAg/ml 10g/ml。 此方法被科研工作者广泛(gungfn)选用第4页/共12页第四页，共13页。 三 实验(shyn)器材与试剂1器材: 分光光度计；恒温水浴箱；枪式移液管；试管13支；吸管2ml 1支、0.1ml 3支试剂: 试剂A；试剂B；蛋白质标准(biozhn)液；待测样品第5页/共12页第五页，共13页。 四 实验(

3、shyn)步骤1. 取试管(shgun)13支，编号（除空白管只做1管外，其它各号测定管均重复做两管），按下表操作并记录：第6页/共12页第六页，共13页。管号试剂(l)空白管标准管测定管21222324252蛋白质标准液(1.5mg/ml)20406080100蒸馏水(ml)100604020待测样品(ml)100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0 混匀后，在摄氏度下保温(bown) 分钟，比色测定BCA法测定蛋白质含量(hnling)第7页/共12页第七页，共13页。2以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制(huzh)标准曲线3用测定管平均光吸收值在标准曲线

4、上查出相应的蛋白质含量，计算求出该待测血清(xuqng)蛋白质的含量(g/L)。4从标准管中选择一管与测定管光吸收值相接近者，按比色法计算公式计算求出该待测血清(xuqng)的蛋白质浓度(g/L)。第8页/共12页第八页，共13页。 试比较法、双缩脲法、Lowery法的异同.为什么法常用(chn yn)与科研？与其他方法相比它有什么特点和优势？第9页/共12页第九页，共13页。 特点：1.操作简便( jinbin)快速，比经典的lowry法快4倍2.灵敏度高ug3.准确，试剂稳定性好，在20ug/ml2000ug /ml 浓度范围内有良好的线性关系4.经济实用，可在微孔板中进行，待测样品体积为1ul20ul，大大节约样品和试剂用量5.抗干扰能力较强，不受绝大部分样品中的去污剂、尿素等化学物质影响第10页/共12页第十页，共13页。第11页/共12页第十一页，共13页。感谢您的观看(gunkn)！第12页/共12页第十二页，共13页。NoImage内容(nirng)总结一 实验目的。第1页/共12页。第2页/共12页。BCA (bicinchoninic acid，二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应(fnyng),使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm有强烈的光吸