HLA分型技术PPT学习教案

1、会计学1HLA分型技术分型技术2Major Histocompatibility Complex(MHC)What is MHC?HLAH-2Minor histocompatibility antigens第1页/共35页3第2页/共35页4第3页/共35页5autologous: in the same individual (autograft)isologous: between genetically Identical individuals (isograft), i.e., identical twins (inbred animals)homologous: between

2、individuals of the same species (allograft)heterologous: between individuals different species (xenograft)第4页/共35页6第5页/共35页7minor histocompatibility antigens also cause rejectionThe rejection time is variable but longer than that for major histocompatibility antigenThey have additive effects第6页/共35页

3、8第7页/共35页9第8页/共35页10class IIclass IDPDQDRBCABCADPDQDR122211931 221 3第9页/共35页11IDKAEclass IIclass Iclass Iclass III(C4, factor-B,TNF, etc.)第10页/共35页12 HLA基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数正式命名显示多态性的正式命名显示多态性的HLA基因座位有基因座位有31个，共个，共2 320个等位基因。个等位基因。 图中所示为常见基因座位的图中所示为常见基因座位的等位基因数。等位基因数。第11页/共

4、35页13JackJillDPDQDRBCA1234BoKimMoLee13412342第12页/共35页14第13页/共35页15If Jack and Jill have four children; Bo, Kim, Mo and LeeTheyll all inherit antigens of the parental MHCOft their haplotypes will be of the father or motherUnless during meiosis, a crossover should occur第14页/共35页16Class-I expressed on

5、all nucleated cells in man, and also on erythrocytes in mice.Class-II expressed primarily on antigen presenting cells (dendritic cells, macrophages and B cells, etc.)第15页/共35页17Alloreactivity of T cells:MLR and CTL generationCD4+TH1CD8+CTLCD8+preCTL第16页/共35页18Alloreactivity of T cellsT CELLT CELLDRW

6、11DRW17PositiveSelectionThymusAlloreaction(MLR)Proliferation and Differentiation第17页/共35页19InflammationlysisADCClysisIL2, IFN TNF, NO2IL2, IL4, IL5IL2, TNF, IFN rejection第18页/共35页20type of rejectionaccelerateddaysreactivation of sensitized T cells (secondary response)acutedays-weeksprimary activatio

7、n of T cellshyperacuteminutes- hourspreformed anti-donor antibodies and complement第19页/共35页21第20页/共35页22Removal of T cells from marrow graft MagnetMagnetic antibodies第21页/共35页23第22页/共35页24HLA抗原检测法抗原检测法第23页/共35页25微量细胞毒试验微量细胞毒试验原理原理当特异性抗体与淋巴细胞表面当特异性抗体与淋巴细胞表面HLA分子分子结合，激活补体，使细胞溶解。在显微镜下结合，激活补体，使细胞溶解。在显微镜

8、下可见细胞被活性染料着色。可见细胞被活性染料着色。淋巴细胞只表达淋巴细胞只表达HLA I分子，如欲测分子，如欲测定定HLA II类分子，需用细胞。类分子，需用细胞。第24页/共35页26微量细胞毒试验微量细胞毒试验 HLA I类分型法类分型法方法方法1.加板：加板：Terasaki板中加入特异性抗板中加入特异性抗HLA I类分类分子抗体。子抗体。2.分离分离PBMC。制成浓度为制成浓度为1 106/ml的细胞悬液的细胞悬液。3.每孔内加入每孔内加入1 l细胞悬液。细胞悬液。4.室温培育室温培育30min。5.1 l兔补体。室温培育兔补体。室温培育60min。6.每孔内加入每孔内加入5 l 5%

9、伊红水溶液。室温伊红水溶液。室温5min。7.每孔内加每孔内加37%甲醛固定。甲醛固定。8.倒置相差显微镜下观察结果。倒置相差显微镜下观察结果。第25页/共35页27微量细胞毒试验微量细胞毒试验 HLA II类分型法类分型法与与HLA类分型法区别类分型法区别1须用富含细胞的淋巴细胞悬液。须用富含细胞的淋巴细胞悬液。2抗体与细胞培育时间为抗体与细胞培育时间为1h。3加补体后培育时间为加补体后培育时间为2h。第26页/共35页28微量细胞毒试验微量细胞毒试验应用实践应用实践 个体个体HLA分型可用于移植前供者和受者分型可用于移植前供者和受者配型，亲子鉴定，法医鉴定等。配型，亲子鉴定，法医鉴定等。第

10、27页/共35页29交叉配型交叉配型 用于测定受者血清中受含有抗供者用于测定受者血清中受含有抗供者HLA的抗体。如受者血清中具有抗供者红细胞血的抗体。如受者血清中具有抗供者红细胞血型抗原抗体和型抗原抗体和/或抗白细胞抗原抗体，会引或抗白细胞抗原抗体，会引起超急排异反应。所以移植前应作红细胞血起超急排异反应。所以移植前应作红细胞血型测定，以及测定患者血清中是否具有抗供型测定，以及测定患者血清中是否具有抗供者者HLA抗体。抗体。第28页/共35页30交叉配型交叉配型方法方法1. 分离供体分离供体PBMC。2. 分离受者血清，作分离受者血清，作1：2，1：4和和1：8稀释。加稀释。加入入Terasa

11、ki板，每孔板，每孔1 l。其余步骤同微量细胞毒试验。其余步骤同微量细胞毒试验。如结果为阳性，表明受者血清中具有抗供者如结果为阳性，表明受者血清中具有抗供者HLA抗体。抗体。第29页/共35页31细胞学分型法细胞学分型法 细胞学分型法已被血清学和分子生物学细胞学分型法已被血清学和分子生物学方法代替。单相混合淋巴细胞培养实验还方法代替。单相混合淋巴细胞培养实验还在使用。在使用。第30页/共35页32分子生物学技术为基础的分子生物学技术为基础的HLA分型法分型法原理原理HLA的多态性是由基因中核苷酸序列突变引起的多态性是由基因中核苷酸序列突变引起的。同一基因的不同等位基因之间核苷酸序的。同一基因的不同等位基因之间核苷酸序列大多是相同的，变异集中在几个列大多是相同的，变异集中在几个DNA片段片段中。在这些片断中，不同的等