细菌涂片制备及染色学习教案

1、会计学1细菌涂片制备细菌涂片制备(zhbi)及染色及染色第一页，共20页。学习细菌(xjn)涂片的基本技术掌握细菌(xjn)的简单染色和革兰氏染色法第2页/共20页第二页，共20页。1、物理因素如：细胞、物理因素如：细胞及细胞物质对染料的及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸毛细现象、渗透、吸附作用等。附作用等。2、化学因素如：正负、化学因素如：正负离子之间的相互吸引离子之间的相互吸引等等第3页/共20页第三页，共20页。染色剂，按其电离后所带电荷的性质(xngzh)分：1、酸性染料酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑2、碱性染料碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱

2、性染料染色第4页/共20页第四页，共20页。3、中性染料：伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）4、单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多(ddu)是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。第5页/共20页第五页，共20页。第6页/共20页第六页，共20页。菌种 牙垢细菌；大肠杆菌24 h培养液； 枯草杆菌12 h 培养液载玻片、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴显微镜、吸水纸、酒精乙醚(y m)溶剂第7页/共20页第七页，共20页。(一) 细菌染色方法 1单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生

3、物及它的特殊(tsh)构造 2复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等染色技术：涂片 干燥 固定 染色 媒染 脱色 复染水洗 干燥 镜检第8页/共20页第八页，共20页。(二) 牙垢细菌单染色法 菌种：牙垢细菌涂片干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热(ji r)固定染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色1 min水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无染料颜色为止干燥：空气中自然干燥镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图第9页/共20页第九页，共20页。第10页/共20页第十页，共20页。第11页/共20页第十一页，共2

4、0页。(三) 革兰氏染色法 革兰氏染色是Gram发明的一种(y zhn)细菌鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化学组成有关。第12页/共20页第十二页，共20页。涂片初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶(jijng)紫染液，染1 min，倾去染液，流水冲洗至无紫色媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1 min，后水洗脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30 sec，后立即用流水冲洗复染：滴加番红染色液，染1 min，水洗后用吸水纸吸干镜检：观察染色结果并绘图第13页/共20页第十三页，共20页。第14页/共20页第十四页，共20页。第15页/共20页第十五页，共20页。第16页/共20页第十六页，共20页。第17页/共20页第十七页，共20页。要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些(nxi)操作？第1