实验《检测生物组织中的糖类、蛋白质、脂肪》职教中心王富生

1、学而时习之，不亦说乎学而时习之，不亦说乎？检测生物组织中的检测生物组织中的糖类糖类、脂肪脂肪和和蛋白质蛋白质一、实验原理一、实验原理 可溶性还原糖可溶性还原糖 蛋白质蛋白质 脂肪脂肪 斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂砖红色沉淀砖红色沉淀苏丹苏丹染液染液苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色红色红色紫色紫色颜色反应颜色反应 淀粉淀粉 碘液碘液蓝色蓝色二、几种重要的试剂二、几种重要的试剂 斐林斐林试剂试剂甲液（甲液（0.1g/mL0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液）溶液）乙液（乙液（0.05g/mL0.05g/mL的的CuSOCuSO4 4溶液）溶液）现配现用现配现用混合均匀混合均匀 双缩脲双缩脲

2、试剂试剂A A液（液（0.1g/mL0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液）溶液）B B液（液（0.010.01g/mLg/mL的的CuSOCuSO4 4溶液）溶液）现配现用现配现用先加先加A A液液再加再加B B液液v苏丹苏丹（ ）染液：用来鉴定脂肪的存在）染液：用来鉴定脂肪的存在碘液：碘液：用来鉴定淀粉的存在用来鉴定淀粉的存在三、实验方法与步骤三、实验方法与步骤v1、可溶性还原糖的鉴定、可溶性还原糖的鉴定(1)(1)制备制备组织样液组织样液：苹果洗净、去皮、切：苹果洗净、去皮、切块块取取5g5g加少许石英砂研磨加少许石英砂研磨加加5mL5mL水再水再研磨研磨漏斗垫纱布后过滤，得到样液漏斗垫

3、纱布后过滤，得到样液( (2)2)鉴定鉴定样液：取样液：取2mL2mL样液于试管中样液于试管中注入注入 2mL2mL刚配制的刚配制的斐林试剂斐林试剂，振荡混合振荡混合（淡蓝色）（淡蓝色） 水浴加热水浴加热2min2min左右，观察溶液颜色变化左右，观察溶液颜色变化（先变为（先变为棕色棕色，再变为，再变为砖红色砖红色）制备生物制备生物组织样液组织样液取材、研磨、过滤取材、研磨、过滤取样取样取取2ml组织样液注入试管注入试管中组织样液注入试管注入试管中注入试剂注入试剂向试管中注入向试管中注入1 ml刚配制的斐林试剂刚配制的斐林试剂加热和观察加热和观察(甲乙液等量混合均匀后再注入甲乙液等量混合均匀后

4、再注入)还原糖的检测和观察：还原糖的检测和观察：蓝色蓝色棕色棕色砖红色砖红色还原性糖鉴定的简易实验： 取一小块梨，用镊子夹住，滴加几滴新配置好的斐林试剂，然后放在酒精灯火焰上方，很快就会看到有有砖红色的颜色生成。2.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 取材：花生种子（浸泡取材：花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片），去皮，将子叶削成薄片 制片：制片：选取最薄的薄片移至载玻片中央选取最薄的薄片移至载玻片中央在薄片上滴加在薄片上滴加苏丹苏丹(或苏丹或苏丹) 染液染液2 3滴，滴，染色染色min滴加体积分数为滴加体积分数为50%的酒精的酒精溶液溶液12滴，洗滴，洗去浮色去浮色(多余的苏丹多余的苏丹 )吸去余液

5、，滴吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片临时装片显微观察：显微观察： 先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察现象：现象：有被染成有被染成橘黄色橘黄色(或红色或红色)的脂肪微粒的脂肪微粒脂肪微粒脂肪微粒 3、蛋白质的鉴定、蛋白质的鉴定(1)(1)制备制备组织样液组织样液：浸泡黄豆：浸泡黄豆1 12d2d去皮、切去皮、切成薄片，加少许石英砂及成薄片，加少许石英砂及5mL5mL水研磨水研磨漏斗垫漏斗垫纱布后过滤，得到样液（用蛋清要纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释稀释1010倍倍以以上，否则实验后黏住试管壁不

6、易洗净）上，否则实验后黏住试管壁不易洗净）(2)(2)鉴定鉴定样液：取样液：取2mL2mL样液于试管样液于试管中中加入加入 1mL1mL双缩脲试剂双缩脲试剂A A液液摇匀摇匀（造成一个（造成一个碱性环境碱性环境） 加入加入双缩脲试剂双缩脲试剂B B液液4滴滴，摇匀，注意颜色，摇匀，注意颜色变化（溶液变为变化（溶液变为紫色紫色）。另取）。另取 清水清水于试管于试管中中加入加入 摇匀摇匀 颜色变化，作为颜色变化，作为 。2mL2mL（A液、液、B液）液）无无对照对照制备生物制备生物组织样液组织样液取材研磨过滤或制备蛋清液取材研磨过滤或制备蛋清液注入组织注入组织样液样液取一支试管注入黄豆组织液（或蛋

7、清液）取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）2ml注入试剂注入试剂A加入加入2ml双缩脲试剂双缩脲试剂A加入双加入双缩脲试缩脲试剂剂B液液4滴滴观察颜观察颜色变化色变化在蛋白质鉴定实验中，必须先加在蛋白质鉴定实验中，必须先加A液再液再加加B液的原因是液的原因是: 为什么加入为什么加入4滴滴B液而不能过量？液而不能过量？在碱性溶液中，蛋白质容易与在碱性溶液中，蛋白质容易与Cu2+ 发生紫发生紫色反应，否则就容易生成蓝色色反应，否则就容易生成蓝色Cu (OH) 2沉沉淀对实验现象有遮蔽作用淀对实验现象有遮蔽作用加入过量的双缩尿试剂加入过量的双缩尿试剂 B液，液，CuSO4在在碱性溶液中生成大量的蓝色

8、碱性溶液中生成大量的蓝色Cu (OH) 2沉淀会遮蔽所产生的紫色。沉淀会遮蔽所产生的紫色。蛋白质的检测结果蛋白质的检测结果4.淀粉的鉴定淀粉的鉴定取材：马铃薯匀浆取材：马铃薯匀浆检测：检测：碘液碘液2滴滴现象：现象： 摇匀后变成蓝色摇匀后变成蓝色四、注意事项四、注意事项1斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂甲液（甲液（0.1g/ml的的NaOH溶液）和乙液（溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸铜溶液的硫酸铜溶液 ）分别配制、储存，使用）分别配制、储存，使用时再临时配制，甲乙液滴等量混合均匀后立即时再临时配制，甲乙液滴等量混合均匀后立即使用。使用。2 双缩

9、脲试剂的使用，应先加双缩脲试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的的NaOH溶液）溶液）1ml，造成碱性的反应环境，再，造成碱性的反应环境，再加加B液（液（ 0.01g/ml 的硫酸铜溶液的硫酸铜溶液 ）4滴。滴。 5在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验材料，必须提前浸泡材料，必须提前浸泡34个小时，浸泡时间短，个小时，浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成型，染色时间不易过长。薄片不易成型，染色时间不易过长。 4在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实验材料，必须

10、稀释，以免实验后粘住试管，不易验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。洗刷。 3在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲出试管，造成烫伤。冲出试管，造成烫伤。问题探讨问题探讨:1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出一部分样液？一部分样液？作对照作对照2、使用双缩脲试剂时为什么、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加液只能加34滴而不能

11、滴而不能过量？过量？ 过量的双缩脲试剂过量的双缩脲试剂B B会与试剂会与试剂A A反应，使溶液呈蓝色，反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。而掩盖生成的紫色。3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间太长，时间太长，Cu(OH)Cu(OH)2 2悬浊液就沉淀在试管底部而悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。无法参与反应。l深化深化比较项比较项目目试剂及成试剂及成分分原理原理溶液浓度溶液浓度方法方法加热加热与否与否结结果果可溶还可溶还原糖的原糖的鉴定鉴定斐林试剂斐林试剂NaOHNaOH和和CuSOCuSO4 4砖砖红红色色沉沉淀淀蛋白质蛋白质的鉴定

12、的鉴定双缩脲试双缩脲试剂剂NaOHNaOH和和CuSOCuSO4 4溶溶液液呈呈紫紫色色斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同？斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同？新配制新配制的的Cu(OH)2溶液溶液在碱性在碱性环境下环境下的的Cu2+NaOH浓度为浓度为0.1g/mLCuS04浓度为浓度为0.05g/mLNaOH浓度为浓度为0.1g/mLCuS04浓度为浓度为0.01g/mL先把先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液溶液混合混合，而后而后立即使用立即使用。先先加入加入Na0H1mL，然，然后后再加再加CuS044滴，摇匀。滴，摇匀。(不能过量不能过量)水水浴浴加加热热不不需需要要实验的材料的选择和

13、处理有什么要求？实验的材料的选择和处理有什么要求？材料的选择材料的选择材料的处理材料的处理还原性糖的鉴定还原性糖的鉴定脂肪的鉴定脂肪的鉴定含糖高，颜色为含糖高，颜色为白色的植物组织，白色的植物组织，如苹果和梨如苹果和梨富含脂肪的种子富含脂肪的种子，如花生，如花生浸泡浸泡34小时小时/蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定富含蛋白质的富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清黄豆或鸡蛋清黄豆需浸泡黄豆需浸泡1-2天，天，鸡蛋清要先稀释鸡蛋清要先稀释淀粉的鉴定淀粉的鉴定马铃薯马铃薯/ 各种可供实验的材料各种可供实验的材料梨梨 黄桃黄桃 胡萝卜胡萝卜 黄豆黄豆 花生种子花生种子 小麦种子小麦种子 其中适合于鉴定其中适合于鉴定可溶性

14、还原糖可溶性还原糖的是的是 ，理由是，理由是梨的组织细胞梨的组织细胞 ，你打算用什么试剂鉴定你打算用什么试剂鉴定? 。 小麦种子不如花生种子更适合用来鉴定脂肪，这是小麦种子不如花生种子更适合用来鉴定脂肪，这是因为因为 ，你打，你打算用什么试剂鉴定算用什么试剂鉴定? . 例例 做生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋做生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验时，需要根据实验需要选择不同的白质的鉴定实验时，需要根据实验需要选择不同的实验材料。请根据下表所列各种材料回答问题：实验材料。请根据下表所列各种材料回答问题：梨梨 颜色为白色，并且糖含量较高颜色为白色，并且糖含量较高 斐林试剂斐林试剂脂肪含量

15、不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用苏丹用苏丹或苏丹或苏丹试剂试剂小麦种子中糖类化合物小麦种子中糖类化合物 含量很高，却不适合用含量很高，却不适合用来鉴定来鉴定 _，这是因为，这是因为 _。 适合于鉴定蛋白质的是适合于鉴定蛋白质的是 ，理由是，理由是 ，鉴定所用的试剂是，鉴定所用的试剂是 。 蛋白质含量高蛋白质含量高 黄豆和花生黄豆和花生 双缩脲试剂双缩脲试剂淀粉淀粉 可溶性还原糖可溶性还原糖 淀粉是非还原糖且不溶于水淀粉是非还原糖且不溶于水 1、青苹果汁遇碘液显蓝色，熟苹果汁能与斐林试剂青苹果汁遇碘液显蓝色，熟苹果汁能与斐林试剂作用产生砖红色沉淀，下列结论中最合理

16、的是作用产生砖红色沉淀，下列结论中最合理的是 ( ) A青苹果汁中有淀粉，不含还原糖青苹果汁中有淀粉，不含还原糖 B熟苹果汁中含还原糖，没有淀粉熟苹果汁中含还原糖，没有淀粉 C苹果转熟时，大量淀粉水解成还原糖苹果转熟时，大量淀粉水解成还原糖 D苹果转熟时单糖聚合成淀粉苹果转熟时单糖聚合成淀粉 Cl例题例题、安徽阜阳劣质奶粉事件震惊全国，引起、安徽阜阳劣质奶粉事件震惊全国，引起世人注目。鉴定脱脂淡奶粉是否为伪劣产品，世人注目。鉴定脱脂淡奶粉是否为伪劣产品，肯定不需要用到的化学试剂是肯定不需要用到的化学试剂是( ) A.斐林试剂斐林试剂 B. 红墨水红墨水C.双缩脲试剂双缩脲试剂 D.苏丹苏丹染液染液 Bl例题例题