胃癌Her2的检测--南京军区总医院周晓军主任

1、HER2HER2，又名，又名HER2/neuHER2/neu，c-erbB-2c-erbB-2，表皮生长，表皮生长因子受体（因子受体（EGFREGFR）家族成员；）家族成员；原癌基因，位于原癌基因，位于17q2117q21，编码相对分子量，编码相对分子量185KD185KD的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体，的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体，表皮生长因子样分子），在细胞表面表达；表皮生长因子样分子），在细胞表面表达；通过参与信号传道通路的一系列活动影响细通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。胞的增殖与分化。HER2基因基因信号传导信号传导至细胞核至细胞核细胞核细胞核接合部接合部酪

2、氨酸激酶酪氨酸激酶活性部分活性部分细胞浆细胞浆细胞膜细胞膜生长因子（配体）生长因子（配体）癌基因活化癌基因活化细胞分裂细胞分裂HER2 HER2 受体跨膜二聚体的信号传导途径受体跨膜二聚体的信号传导途径1 = 1 = 基因拷贝数基因拷贝数2 = 2 = mRNA 转录转录3 = 3 = 细胞表面受体蛋白表达细胞表面受体蛋白表达4 = 4 = 细胞外受体功能域释放细胞外受体功能域释放A = HER2 DNAB = HER2 mRNAC = HER2 receptor protein正常正常扩增扩增/ /过度表达过度表达细胞核细胞核细胞质细胞质细胞膜细胞膜1234CBAHER2HER2过度表达：正

3、常状态的过度表达：正常状态的10-10010-100倍倍 HER2HER2癌基因的致瘤机制：癌基因的致瘤机制： 抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭 力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明：研究表明： 3030以上的人类肿瘤中存在以上的人类肿瘤中存在HER2HER2基因的扩增基因的扩增/ / 过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等););l 胃癌中胃癌中HER-2/neuHER-2/neu基因的过表达率为基因的过表达率为7

4、%- 7%- 27%(- 27%(-4545%)%)，通过，通过FISHFISH检测基因扩增率为检测基因扩增率为 1010% %-20-20% %胃癌组织学类型胃癌组织学类型(WHO2000)： 1管状腺癌（管状腺癌（adenocarcinoma）最多见。）最多见。分高、中、低分化，此型癌多为高分化，恶性分高、中、低分化，此型癌多为高分化，恶性度较低，转移较晚。度较低，转移较晚。2乳头状腺癌（乳头状腺癌（ papillary form）：腺腔内）：腺腔内 出现许多乳头。出现许多乳头。 3印戒细胞癌（印戒细胞癌（signet-ring cell）：癌细胞）：癌细胞胞浆内出现大量偏酸性粘液，常将胞

5、核挤压于胞浆内出现大量偏酸性粘液，常将胞核挤压于癌细胞浆之一侧，形似戒指，故称之为印戒细癌细胞浆之一侧，形似戒指，故称之为印戒细胞癌。胞癌。4. Lauren分型分型(1965): 根据胃癌细胞形态和胃癌根据胃癌细胞形态和胃癌组织中粘液性质将胃癌分为肠型和弥漫型两大组织中粘液性质将胃癌分为肠型和弥漫型两大类。类。肠型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多见，发生于肠肠型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多见，发生于肠化生上皮；肠型胃癌多见于老年患者，恶性度较低，化生上皮；肠型胃癌多见于老年患者，恶性度较低，分化程度差别大，与肿瘤大小反比，组织学上多为分化程度差别大，与肿瘤大小反比，组织学上多为乳头状腺癌或腺管状

6、腺癌。乳头状腺癌或腺管状腺癌。弥漫型胃癌中中性粘液多见。弥漫型胃癌多见于青弥漫型胃癌中中性粘液多见。弥漫型胃癌多见于青年人，恶性度较高，肉眼类型多为皮革胃，组织学年人，恶性度较高，肉眼类型多为皮革胃，组织学上多为粘液细胞癌（印戒细胞癌）及未分化癌。上多为粘液细胞癌（印戒细胞癌）及未分化癌。Ming（1977）：）：膨胀型膨胀型 VS 浸润型浸润型胃癌胃癌HER2检测检测HER2 geneHER2 geneHER2 gene双链靶基因双链靶基因变性的单链变性的单链DNADNA与荧光标记探针复与荧光标记探针复性性 产生荧光信号产生荧光信号荧光原位杂交法原理荧光原位杂交法原理 Fluorescenc

7、e in situ Hybridisation (FISH)HER2 probeCEP 17 probeHER2 / CEP17 ratio = 1HER2 / CEP17 ratio = 1HER2 / CEP17 ratio = 7No amplification No amplification; tetraploidyHER2 gene amplification (ratio 2.2)比值比值 2.2提示提示Her-2有扩增有扩增比值介于比值介于2.2临界值临界值Aneusomy, Not amplifiedDenature target DNAand hybrid

8、ise probePrimary antibodybinds to the probeSecondary antibody (with unactivatedvisualisation agent)binds to primary antibody色素原位杂交法原理色素原位杂交法原理chromogenic in situ hybridization (CISH)chromogenic in situ hybridization (CISH) CISHCISH：无：无HER2HER2基因扩增基因扩增CISHCISH： HER2HER2基因低扩增基因低扩增 CISHCISH： HER2HER2基因

9、基因高拷贝扩增高拷贝扩增 组织固定组织固定方法方法IHC vs FISH C-erbB2 scoreGene amplification by FISH04%17%210-35%390%For internal use onlyHER2检测流程检测流程组织采集组织采集组织形态组织形态检测耗时检测耗时评分标准评分标准足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本胃癌胃癌HER2检测的流程检测的流程 For internal use only多处活检的必要性多处活检的必要性Image courtesy of Prof. G VialeFor internal use onlyHER2

10、检测流程检测流程组织采集组织采集检测耗时检测耗时评分标准评分标准足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本胃癌胃癌HER2检测的特性检测的特性 肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片组织形态组织形态For internal use onlyHER2检测流程检测流程和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC） 检测HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+明视野方法优先足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片检测耗时检测耗时评分标准评分标准组织采集组织

11、采集组织形态组织形态胃癌胃癌HER2检测的特性检测的特性 For internal use only明视野技术有利于发现明视野技术有利于发现HER2阳性肿瘤区域阳性肿瘤区域 相比乳腺癌，相比乳腺癌，着色异质性着色异质性在胃癌和胃食管结合部癌在胃癌和胃食管结合部癌更常见更常见1 1 胃癌中，胃癌中， 530%530%病例会病例会出现肿瘤异质性出现肿瘤异质性1-31-3Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805.Rschoff J, et al. der pathologe 2010; 31:20817. Rschoff J, et al. V

12、irchovs Archive 2010; accepted for publication. Image courtesy of Prof. G VialeFor internal use onlyHER2检测流程检测流程和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC） 检测HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+明视野方法优先足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片检测耗时检测耗时组织采集组织采集组织形态组织形态胃癌胃癌HER2检测的特性检测的特性 10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧膜强染或完全膜强

13、染定义为IHC阳性不界定活检标本染色的肿瘤细胞占总体肿瘤细胞的百分比：需要5个 (成簇) 细胞染色评分标准评分标准For internal use onlyFor internal use only手术标本手术标本 染色结果染色结果活检标本活检标本 染色结果染色结果评分评分HER2过表达情况评估过表达情况评估无反应或无反应或10%肿瘤细胞膜染色肿瘤细胞膜染色无反应或任何肿瘤细胞无膜染色无反应或任何肿瘤细胞无膜染色0阴性阴性 10% 肿瘤细胞微弱或隐约可见肿瘤细胞微弱或隐约可见膜染色膜染色; 细胞仅有部分膜染色细胞仅有部分膜染色肿瘤细胞团微弱或隐约可见膜染色肿瘤细胞团微弱或隐约可见膜染色（不管染

14、色的肿瘤细胞所占整体百分（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分比）比）1+阴性阴性 10% 肿瘤细胞有弱到中度的基肿瘤细胞有弱到中度的基侧膜、侧膜或完全膜染侧膜、侧膜或完全膜染肿瘤细胞团有弱到中度的基侧膜、侧肿瘤细胞团有弱到中度的基侧膜、侧膜或完全膜染（不管染色的肿瘤细胞膜或完全膜染（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分比）所占整体百分比）2+可疑可疑10% 肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或完全膜的强染色完全膜的强染色肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或完全膜的肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或完全膜的强染色（不管染色的肿瘤细胞所占整强染色（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分比）体百分比）3+阳性阳性Hercept

15、in EU SmPC: http:/www.ema.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/Herceptin/emea-combined-h278en.pdf.胃癌HER2检测的评分标准For internal use only完全、基侧膜或侧膜染色反应HER2阳性胃癌和胃食管阳性胃癌和胃食管结合部癌可能表现为结合部癌可能表现为基侧基侧膜、侧膜或完全膜染膜、侧膜或完全膜染底侧膜、侧膜染色的发生底侧膜、侧膜染色的发生通常与低分化胃腺癌细胞通常与低分化胃腺癌细胞结构有关结构有关Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805.I

16、mage reproduced courtesy of TARGOS Molecular Pathology GmbH.For internal use only 2.5x 5x20 x 40 x40 x10 x 20 x放大放大: x-倍倍评分评分3+2+1+0强染色 (无放大)弱到中度染色隐约可见 (更高放大倍数) 阴性染色强度染色强度IHC染色强度对应的放大倍率染色强度对应的放大倍率为了分辨明显的细胞间（完全、底侧膜或侧膜）的膜染色，所需的为了分辨明显的细胞间（完全、底侧膜或侧膜）的膜染色，所需的显微镜放大倍率（显微镜放大倍率（ 工作距离）工作距离）For internal use on

17、ly10 x20 x需更高的放大倍数IHC 2+20 x需高倍放大IHC 1+40 x40 x5x无需放大视野可见膜染色IHC 3+甚至无需显微镜也可见5x放大倍率和放大倍率和HER2评分评分For internal use only肿瘤组织肿瘤组织内内边缘挤压所边缘挤压所至的假象至的假象IHC: 样本排除标准HER2检测ICH法染色的活检/手术标本 排除保存情况差的肿瘤组织排除非特异性染色非肿瘤组非肿瘤组织内织内肠型化生、肠型化生、再生（邻近再生（邻近溃疡）溃疡）胞浆、核、仅底边、腔缘部分胞浆、核、仅底边、腔缘部分着色着色For internal use only评分为0无染色 (40 x

18、放大倍率)IHC: 评分标准完全膜染色或基侧膜、侧膜染色染色强度 (可见的不可疑的膜染色) 强染色 (2.5x5x 放大倍率)弱到中度染色(10 x20 x 放大倍率)必须至少有:活检标本中5个 (成簇) 细胞染色手术标本中10%的肿瘤细胞染色评分为2+隐约可见染色(40 x 放大倍率)评分为1+评分为3+特异性膜染色 (明显的 & 细胞间的) For internal use onlyHER2检测流程检测流程和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC） 检测HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+明视野方法优先足够数量的有代表性的活检标本（推荐68个）有代表性的手术标本肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片组织采集组织采集组织形态组织形态胃癌胃癌HER2检测的特性检测的特性 10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧膜强染或完全膜强染定义为IHC阳性不界定活检标本染色的肿瘤细胞占总体肿瘤细胞的百分比：需要5个 (成簇) 细胞染色评分标准评分标准检测耗时检测耗时检测所需时间不应该超过5个工作日 (晚期胃癌进展十分快)需应用多学科方法For internal use only0FISH+可接受赫赛汀治疗可接受赫赛汀治疗可接受可接受赫赛汀胃癌治疗赫赛汀胃癌治疗的欧盟标准的欧盟标准+1+2+3IHC肿瘤标本肿