第二章 药物的鉴别试验

1、第二章 药物的鉴别试验第一节 定义与目的v定义：根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学或生物学方法来判断药物的真伪。v目的：不是对未知物进行定性分析，而是证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所收载的药物。v意义：它是药品质量检验工作中的首项任务，只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查、含量测定等分析才有意义。药物的鉴别试验药物的鉴别试验v性质：药物鉴别试验的试验方法虽有一定的专属性，但不足以确证其结构，因此不能赖以鉴别未知物。v化学药物的结构确证不同于药物鉴别试验，其主要任务是确认所制备的原料药的结构是否正确，适用于未知化合物的鉴别或者目标对象的结构确认。v项目鉴别项下规定的试验

2、方法仅用于鉴别药物的真伪，对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。v一、性状v性状：反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。v(一)外观：指药品的外表感观和色泽，包括药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。第二节 鉴别试验的项目例子：vCHP2010中盐酸异丙嗪的性状描述：v本品为白色或乳白色结晶性粉末；有微臭，味极苦；有引湿性；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。v盐酸异丙嗪片的性状描述：本品为糖衣片，除去包衣后显白色。色泽色泽晶晶型型聚集状态聚集状态气味气味v2、溶解度：一定程度上反映了药品的纯度、晶型或粒度。药品在不同溶剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶

3、解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。v3、物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。 (1) 熔点熔点固体熔化成液体的温度固体熔化成液体的温度熔融同时分解的温度熔融同时分解的温度自自初熔初熔至至全熔全熔的一段温度的一段温度例子：例子：雌二醇雌二醇熔点：本品的熔点为熔点：本品的熔点为175175180180；格列本脲格列本脲的熔点：本品的熔点为的熔点：本品的熔点为170170174174。CHP2010收载收载有三种测定方法有三种测定方法（2） 比旋度比旋度 在一定波长与温度

4、下，偏振光透过长在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每且每1ml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1g1g的溶液时测得的旋光度。的溶液时测得的旋光度。 作用：反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用作用：反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。维生素维生素C的比旋度测定：的比旋度测定：20.521.5例子例子OOHOOHHOHHO手性手性（3） 吸收系数吸收系数 在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。有单位浓度、单位液层厚度时

5、的吸收度称为吸收系数。有摩尔吸收系数与百分吸收系数两种。摩尔吸收系数与百分吸收系数两种。 中国药典收载是中国药典收载是%1cm1E例子例子盐酸氨溴索吸光系数测定其为盐酸氨溴索吸光系数测定其为233247不仅可以用来考察不仅可以用来考察原料药的质量，还原料药的质量，还是是UV测定含量的依测定含量的依据据二、一般鉴别试验（General Identification Test）只能证实是只能证实是某一类某一类药物，而不能证实是药物，而不能证实是哪一种哪一种药物！药物！只适用于只适用于纯品纯品，混合药物混合药物或有干扰时或有干扰时不适用不适用！ 依据某一类药物的依据某一类药物的化学结构化学结构或或物

6、化性质物化性质的特征，的特征，通过化学反应来通过化学反应来鉴别鉴别药物的药物的真伪真伪。v中国药典附录收载的一般鉴别项目v 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐、无机酸盐钠、钾、锂、镁、钠、钾、锂、镁、铁、钙、。铁、钙、。水杨酸、苯甲酸等水杨酸、苯甲酸等亚硫酸、亚硫酸氢亚硫酸、亚硫酸氢盐等盐等1.有机氟化物有机氟化物OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOH+Ce3pH4.3OOOOCH2NCeCH2COOHCH2COOHFF-（茜素氟蓝）（蓝紫色络合物）+有机氟化物变有机氟化物变成无机氟化物成无机氟化物2.有机酸盐有机酸盐FeCl3反应反应: :

7、加稀加稀HClHCl，即析出，即析出白色沉淀白色沉淀；分离，沉淀溶于；分离，沉淀溶于醋酸铵溶液。醋酸铵溶液。OHOHOOOOFeOHFeCl3H2O3HCl+中性时呈中性时呈红色红色酸性时呈酸性时呈紫色紫色水杨酸盐水杨酸盐v酒石酸盐:取供试品中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，即生成游离银并附在试管内壁形成银镜。CCHOHOCOOHCOOHHH+2Ag(NH3)2OH2Ag+CCCOONH4COONH4HOHO+2NH32H2O+3、芳香第一胺类:NH2R+NaNO2+2HClN2ClR+NaCl + 2H2O（偶氮反应）N2ClR+OH+NaOHNRNHO+ NaC

8、l+ H2O（缩合反应）v橙黄到橙黄到猩红色猩红色4、托烷生物碱类:Vitali反应ROOOHNO2NO2O2NOHHOOCOHHOOC水解3HNO3NNO2O2NOHHOOCOOHNNO2O2NOHHOOKKOHC2H2OHKOH（托烷类）（莨菪酸）（三硝基衍生物）（深紫色）托烷生物托烷生物碱均有莨碱均有莨菪酸结构菪酸结构醌型醌型产物产物Vitali反应反应5、无机金属盐:v焰色反应鉴定:v 焰色反应是某些金属或它们的挥发性化合物在无色火焰中灼烧时使火焰呈现特征的颜色的反应.有些金属或它们的化合物在灼烧时能使火焰呈特殊颜色。这是因为这些金属元素的原子在接受火焰提供的能量时，其外层电子将会被激

9、发到能量较高的激发态。处于激发态的外层电子不稳定，又要跃迁到能量较低的基态。不同元素原子的外层电子具有着不同能量的基态和激发态。在这个过程中就会产生不同的波长的电磁波，如果这种电磁波的波长是在可见光波长范围内，就会在火焰中观察到这种元素的特征颜色。利用元素的这一性质就可以检验一些金属或金属化合物的存在。这就是物质检验中的焰色反应。 v常见的焰色反应： 钠黄钾紫钙砖红 钡黄绿等.NH4+ OHNH3+H2OHg2Cl2+2Hg（黑色）+Hg(NH2)Cl +NH4Cl2NH3（使石蕊试纸变蓝）（使硝酸亚汞滤纸变黑）另外铵盐的检测另外铵盐的检测:6、无机酸根的鉴别:v氯化物:硝酸银鉴定法、二氧化锰

10、氧化法v硫酸盐:氯化钡鉴定法、醋酸铅鉴定法、盐酸排除法v硝酸盐:硫酸及硫酸亚铁显棕色法、与铜反应生成红棕色蒸气、高锰酸钾排除法三、专属鉴别试验（Specific Identification Test） 是证实是证实某一种药物某一种药物的依据，它是根据的依据，它是根据每一每一种种药物化学结构的药物化学结构的差异差异及其所引起的物理化学及其所引起的物理化学特性特性的的不同不同，选用某些特有的灵敏定性反应，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪。来鉴别药物真伪。NHNHCOOO123456司可巴比妥NHNHSOOO123456硫喷妥钠例子例子:同属巴同属巴比妥类比妥类使溴褪色使溴褪色硫化铅沉淀

11、硫化铅沉淀药物鉴别药物鉴别一般鉴别一般鉴别专属鉴别专属鉴别以某些类别药物的以某些类别药物的共同化学结构为依共同化学结构为依据据,根据其相同的物根据其相同的物理化学性质进行药理化学性质进行药物真伪的鉴别物真伪的鉴别,可以可以区别不同药物区别不同药物类别类别在一般鉴别的基础上在一般鉴别的基础上,利利用各种药物化学结构的用各种药物化学结构的差异来鉴别药物差异来鉴别药物,可以区可以区别同类药物或具有相同别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药化学结构部分的各个药物物单体单体第三节 鉴别方法化化学学鉴鉴别别法法呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法

12、气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法测定生成物的熔点测定生成物的熔点使试剂褪色的鉴别法使试剂褪色的鉴别法Vitali氯化物氯化物硫酸奎宁硫酸奎宁维维C胺胺(铵铵)应用少应用少光光谱谱鉴鉴别别法法UV鉴别法鉴别法IR鉴别法鉴别法NIR鉴别法鉴别法AAS鉴别法鉴别法NMR鉴别法鉴别法MS鉴别法鉴别法XRD鉴别法鉴别法紫外紫外近红外近红外红外红外原子吸收原子吸收核磁共振核磁共振质谱法质谱法X射线衍射线衍射射Rf=从基线至展开斑点中心的距离从基线至展开剂前沿的距离色色谱谱鉴鉴别别法法TLC鉴别法鉴别法HPLC鉴别法鉴别法GC鉴别法鉴别法颜色显显微微鉴鉴别别法法生物学鉴别法利用药效学和分子生物学等有关技

13、术来鉴利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法定药物品质的一种方法,主要用于抗生素、主要用于抗生素、生物药物以及中药的鉴别生物药物以及中药的鉴别,通常分为生物通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法两大类效应鉴别法和基因鉴别法两大类.按对象目的不同可分为：免疫鉴别法、按对象目的不同可分为：免疫鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价鉴别法、纯指标鉴别法、纯指标鉴别法、DNA遗传标记法，遗传标记法，mRNA差异显示鉴别法差异显示鉴别法指纹图谱与特征指纹图谱与特征图谱鉴别法图谱鉴别法1.1.紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法( (Ultraviolet spectr

14、ophotometry) )美法仑 测定测定maxmax，或同时测定，或同时测定minmin； 测定一定浓度的供试液在测定一定浓度的供试液在maxmax处的处的A A 规定规定和和E E 规定规定 和和A A1 1/A/A2 2 经化学处理后，测定其反应产物的吸经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。收光谱特性。122.2.红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法( (Infrared spectrophotometry) ) 用于组分单一、结构明确的原料药，特别适用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合不易区别的同类药物，专属性强，应用广泛。合不易区别的同类药物，专属性强，应用广泛。Ch.PCh.P

15、和和BPBP均采用均采用标准图谱对照法标准图谱对照法USPUSP采用采用对照品法对照品法试样制备方法：试样制备方法： 压片法、糊法、膜法、溶液法压片法、糊法、膜法、溶液法特征区指纹区3.质谱鉴别法质谱鉴别法 (Mass Spectrometry)9-HO-LPT #1664 RT: 9.39 AV: 1 NL: 5.18E6T: + c sid=-10.00 Q3MS 50.00-500.0050100150200250300350400450500m/z0102030405060708090100Relative Abundance427.17428.18432.18102.02274.21

16、318.2359.94302.22415.1768.96129.93362.28433.21246.16218.16144.95473.234.4.原子吸收法原子吸收法( (Atomic Absorption) ) 利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定性、定量分析。弱程度进行定性、定量分析。5.5.X X射线粉末衍射法射线粉末衍射法晶体对晶体对X X射线会产生衍射现象射线会产生衍射现象, ,不同的物质有其特定的衍射图不同的物质有其特定的衍射图 利用不同物质在不同利用不同物质在不同色谱条件色谱条件下，产生各自的下，产生各自的特征色谱行为（特征色谱行为（比移值比移值或或保留时间保留时间）进行的鉴别）进行的鉴别试验。试验。 采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，并采用与