蛋白质的共价结构

1、l蛋白质是分子量很大的生物分子蛋白质是分子量很大的生物分子l对任一种给定的蛋白质，其所有分子对任一种给定的蛋白质，其所有分子在在AAAA组成和顺序以及肽链的长度方面组成和顺序以及肽链的长度方面都应是相同的，即所谓均一的蛋白质。都应是相同的，即所谓均一的蛋白质。l蛋白质与多肽无严格的界线蛋白质与多肽无严格的界线 通常将通常将6000Dr6000Dr以上的多肽称为蛋白质。以上的多肽称为蛋白质。l蛋白质分子量变化范围很大蛋白质分子量变化范围很大蛋白质蛋白质月示月示胨胨多肽多肽肽肽AAAA 1*104 5*103 2*103 1000 200 100 -500 蛋白质有蛋白质有单体蛋白质单体蛋白质和和

2、寡聚寡聚/多聚蛋白质多聚蛋白质之分。之分。第二节第二节 蛋白质的结构蛋白质的结构l关于蛋白质结构的组织层次关于蛋白质结构的组织层次一级结构一级结构( (primary structure) ): :也称蛋白质的共价也称蛋白质的共价结构结构, , 指多肽链的氨基酸序列指多肽链的氨基酸序列, ,也包括多肽链中也包括多肽链中连接氨基酸残基的共价键连接氨基酸残基的共价键( (主要是肽键和二硫键主要是肽键和二硫键) )。二级结构（二级结构（secondary structure ）:多肽链主链借多肽链主链借助氢键折叠和盘绕成的有规则的构象。（只助氢键折叠和盘绕成的有规则的构象。（只涉及肽链主链的构象及链

3、内或链间形成的氢键，涉及肽链主链的构象及链内或链间形成的氢键，与侧链与侧链R的构象无关）的构象无关）三级结构（三级结构（tertiary structure）：在二级结构基础：在二级结构基础上，多肽链借助各种非共价键弯曲、折叠成的特上，多肽链借助各种非共价键弯曲、折叠成的特定空间构象。（包括多肽链中所有原子的空定空间构象。（包括多肽链中所有原子的空间排布）间排布）四级结构（四级结构（quaternary structure）:由数条具有独由数条具有独立的三级结构的多肽链通过非共价键缔合而成的立的三级结构的多肽链通过非共价键缔合而成的聚合体结构。聚合体结构。超二级结构（或称基序、模体，超二级结构

4、（或称基序、模体，supersecondary structure, motif）：蛋白质结构中，若干相邻的：蛋白质结构中，若干相邻的二级结构元件（主要是二级结构元件（主要是- -螺旋和螺旋和- -折叠片）彼折叠片）彼此相互作用，形成种类不多的、有规则的、在空此相互作用，形成种类不多的、有规则的、在空间上可辨认的二级结构组合体，在多种蛋白质中间上可辨认的二级结构组合体，在多种蛋白质中充当三级结构的构件。充当三级结构的构件。结构域（结构域（domain）: :多肽链在二级结构或超二级结多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相构的基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相对

5、独立的紧密球状体，是球状蛋白质的折叠单位。对独立的紧密球状体，是球状蛋白质的折叠单位。蛋白质空间结构包括其二、三、四级结构。每一种天然蛋蛋白质空间结构包括其二、三、四级结构。每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构或称三维结构，这种三维白质都有自己特有的空间结构或称三维结构，这种三维结构通常被称为蛋白质的构象。结构通常被称为蛋白质的构象。( (一个蛋白质分子为获得复杂结构所需的全部信息都包含于一级结一个蛋白质分子为获得复杂结构所需的全部信息都包含于一级结构即多肽链的氨基酸序列中构即多肽链的氨基酸序列中-内因内因) )一、蛋白质的一级结构一、蛋白质的一级结构l一级结构是对多肽链中连接氨基酸残基的所

6、有一级结构是对多肽链中连接氨基酸残基的所有共价键（主要是肽键和二硫键）的描述。共价键（主要是肽键和二硫键）的描述。l一级结构中最重要的要素是氨基酸的序列。一级结构中最重要的要素是氨基酸的序列。 关于肽链中的二硫键关于肽链中的二硫键1. 胰岛素胰岛素 1953 年年 Sanger(英英) 报道了胰岛素的一级结报道了胰岛素的一级结构，这是第一个被确定一级结构的蛋白质。构，这是第一个被确定一级结构的蛋白质。（1）作用：动物胰脏）作用：动物胰脏-细胞分泌的一种分子量细胞分泌的一种分子量较小的蛋白质激素，有降低血糖含量的作用。较小的蛋白质激素，有降低血糖含量的作用。(2) 结构：结构： 51个氨基酸个氨

7、基酸 分子量：分子量：5700-6000 两条链：两条链： A链链21肽，肽， B 链链30肽。肽。 3对二硫键对二硫键用了大约用了大约1010年时间和近年时间和近100g 100g 蛋白质。蛋白质。2. 核糖核酸酶核糖核酸酶20世纪世纪50年代末，美年代末，美国国Stanford Moore等等人完成了牛胰核糖核人完成了牛胰核糖核酸酶的全顺序分析。酸酶的全顺序分析。（1）结构：）结构：124个氨个氨基酸基酸, 分子量分子量12600,单单一肽链一肽链, 4对对-S-S-键。键。（2）作用：水解核）作用：水解核糖核酸磷酸二酯键。糖核酸磷酸二酯键。3. 人血红蛋白人血红蛋白-和和-链的氨基酸顺序

8、链的氨基酸顺序 -链链 141氨基酸氨基酸 -链链146氨基酸氨基酸 肌红蛋白链肌红蛋白链153氨基酸氨基酸 -和和-链相同的氨基酸：链相同的氨基酸：63个个 -、-和肌红蛋白三者相同的有和肌红蛋白三者相同的有19个个l测定蛋白质一级结构的意义：测定蛋白质一级结构的意义： 有助于理解蛋白质的高级结构和功能；有助于理解蛋白质的高级结构和功能； 可在分子水平上研究生物进化。可在分子水平上研究生物进化。一、肽的一、肽的概念、分类和命名概念、分类和命名 1. 1. 肽键（肽键（peptide bond）：一个氨基酸的：一个氨基酸的-羧羧基与另一氨基酸的基与另一氨基酸的-氨基脱水缩合而成的键氨基脱水缩合

9、而成的键第三节第三节 肽的结构与功能肽的结构与功能（一）概念（一）概念2.2.肽肽（peptide）：氨基酸通过氨基酸通过肽键相连而形成肽键相连而形成的聚合物（也常称作肽链的聚合物（也常称作肽链peptide chain） 构成肽的氨基酸由于参加肽键的形成已非原来构成肽的氨基酸由于参加肽键的形成已非原来完整的分子，故称完整的分子，故称氨基酸残基（氨基酸残基（residue）。）。（二）肽的分类（二）肽的分类 1.寡肽（寡肽（oligopeptide）：由：由210个氨基酸残基个氨基酸残基缩合成的肽缩合成的肽 2.多肽多肽( polypeptide ) : 由由1250个氨基酸残基个氨基酸残基缩

10、合成的肽，典型的多肽缩合成的肽，典型的多肽 Mr 104 (一般以胰岛素的一般以胰岛素的Mr5733为下限为下限)l除少数环状肽链外，在多肽链的一端含有一个除少数环状肽链外，在多肽链的一端含有一个游离的游离的 - -氨基，称为氨基端或氨基，称为氨基端或N-N-端；在另一端端；在另一端含有一个游离的含有一个游离的 - -羧基，称为羧基端或羧基，称为羧基端或C-C-端。端。 （三）肽的书写法（三）肽的书写法l 在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列,这种排列顺序称为肽链的氨基酸序列。这种排列顺序称为肽链的氨基酸序列。l 按照惯例，肽链序列是从按照惯例，肽链序列

11、是从N-端的氨基酸残基端的氨基酸残基开始，以开始，以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序。端氨基酸残基为终点的排列顺序。即左边为即左边为N端，右边为端，右边为C端。端。NH2 -甘甘-丙丙-谷谷组组-甲硫甲硫-COOH C- C-末端末端 N-N-末端末端 1 2 3 n-1 n1 2 3 n-1 n或或 H-Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu-OH或或 SGYAL（四）肽的命名（四）肽的命名命名为命名为 丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸l1 1、寡肽的命名、寡肽的命名l2 2、多肽和蛋白质的命名、多肽和蛋白质的命名 一般是根据其来源或一般是根据其来源或/ /和功能

12、进行命名。和功能进行命名。举例：举例： 胰高血糖素，血红蛋白胰高血糖素，血红蛋白二、肽键的结构与性质二、肽键的结构与性质 1.1.肽键肽键 （1 1）肽键中的）肽键中的C-N键具有部分双键性质，不能键具有部分双键性质，不能自由旋转。自由旋转。 （2 2）与肽键相关的）与肽键相关的6 6个原子处于同一平面。个原子处于同一平面。 （3 3）在大多数情况下，以反式结构存在。）在大多数情况下，以反式结构存在。图图 X-Pro 之间的反式肽键和顺式肽键之间的反式肽键和顺式肽键 （4 4）肽键中氮原子上的孤对电子与羰基具有明）肽键中氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用，是一个共轭杂化体。显的共轭作用

13、，是一个共轭杂化体。lN带部分正电荷，带部分正电荷，O带部分负电荷带部分负电荷。酰胺平面酰胺平面的存在，使得肽的存在，使得肽链中的任何一个氨基酸残链中的任何一个氨基酸残基只有基只有2个角度可以旋转。个角度可以旋转。由由C -N单键旋转的角度被单键旋转的角度被称为称为 (phi)，C -C单键旋单键旋转的角度被称为转的角度被称为 (psi)。当。当一条肽链上所有氨基酸残一条肽链上所有氨基酸残基的基的 和和 确定以后，该肽确定以后，该肽链主链骨架的基本走向也链主链骨架的基本走向也就确定了。就确定了。 离子晶体，熔点高离子晶体，熔点高 两性解离两性解离解离基团：解离基团：-氨基氨基 、 -羧基、羧基

14、、R- -基可解离基团基可解离基团 双缩脲反应双缩脲反应（biuret reaction）是肽和蛋白是肽和蛋白质所特有的一个反应（质所特有的一个反应（生成紫红色或兰紫色复合物，生成紫红色或兰紫色复合物，可用分光光度法定量测定蛋白质或多肽可用分光光度法定量测定蛋白质或多肽） 在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。蛋白质的亚单位。 但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，在很低浓度下发挥效力，常称为活性肽。如：脑在很低浓度

15、下发挥效力，常称为活性肽。如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；谷胱甘肽；啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等。蛇毒多肽等。 商业合成的二肽：商业合成的二肽：L- -天冬氨酰天冬氨酰- -L- -苯丙氨酸苯丙氨酸甲酯，是甲酯，是1 1种人造甜味剂。种人造甜味剂。四、四、 几种天然存在的活性肽几种天然存在的活性肽1、谷胱甘肽、谷胱甘肽( glutathione, GSH ) GSH容易氧化，二分子容易氧化，二分子GSH脱氢以二硫键相连脱氢以二硫键相连成成氧化型氧化型的谷胱甘肽（的谷胱甘肽（GSSG） 谷胱甘肽谷胱甘肽是某些酶的辅酶，在体内氧化还原过是某些酶的辅酶，在体内氧化还原过

16、程中起重要作用程中起重要作用 -肽键肽键 GSH与与GSSG间的转换间的转换H2O22H2OGSH GSH过氧化物酶过氧化物酶 还原酶还原酶2GSHGSSGNADP+NADPH + H+催产素催产素: : 使子宫和乳腺平滑肌收缩使子宫和乳腺平滑肌收缩l促进遗忘升压素升压素 : 促进血管平滑肌收缩，升高血压、抗促进血管平滑肌收缩，升高血压、抗 利尿激素利尿激素 环状部分参与环状部分参与学习记忆的巩固学习记忆的巩固 直链部分参与直链部分参与记忆的恢复过程记忆的恢复过程l 大脑分泌的大脑分泌的ACTH参与意识行为的调控；参与意识行为的调控；l 腺垂体分泌的腺垂体分泌的ACTH主要作用于肾上腺皮质主要

17、作用于肾上腺皮质 刺激肾上腺皮质的生长和肾上腺皮质激素的合刺激肾上腺皮质的生长和肾上腺皮质激素的合成、分泌成、分泌 有镇痛作用而又不会像吗啡那样使病人上有镇痛作用而又不会像吗啡那样使病人上瘾的药物瘾的药物 从猪脑中分离出一种从猪脑中分离出一种31肽的具有较强的肽的具有较强的吗啡样活性与镇痛作用的吗啡样活性与镇痛作用的-内啡肽。内啡肽。 人类的人类的-内啡肽第内啡肽第23，27位分别为位分别为Va1、His, 而而31位是位是Gln。-内啡肽降解产物：第内啡肽降解产物：第117位的片位的片段称为段称为-内啡肽内啡肽，无鸦片样活性也无镇痛作用，无鸦片样活性也无镇痛作用，但显示出行为效应，具有抗精神

18、分裂症的疗效。但显示出行为效应，具有抗精神分裂症的疗效。 5、胆囊收缩素、胆囊收缩素 一种由一种由33个氨基酸组成的肽个氨基酸组成的肽6、胰高血糖素、胰高血糖素 29肽肽l调控肝糖原降解产生葡萄糖，以维持血糖调控肝糖原降解产生葡萄糖，以维持血糖浓度；引起血管舒张，抑制肠蠕动及分泌浓度；引起血管舒张，抑制肠蠕动及分泌7.-鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱 环状环状8肽肽 NHCOCH2NHCOCHNHCOCH3CHCHOHCH2OHCHHNCNHCHCNHCH2CCOCHNHHOCH2NHNHCHCHCH3CH2CH3COOOOCH2CH2SOOH鹅膏覃碱的化学结构 抑制真核细胞抑制真核细胞RNARNA聚合酶聚

19、合酶和和的活性的活性 L-LeuD-PheL-ProL-Val L-Orn L-Orn L-ValL-ProD-PheL-Leu 短杆菌肽短杆菌肽S(S(环十肽环十肽) )( (毒性较大，毒性较大，LD50LD50为为17mg/kg(17mg/kg(大鼠腹腔注射大鼠腹腔注射) )，现已很少使用，现已很少使用) )8. 抗生素类多肽：抗生素类多肽：短杆菌肽短杆菌肽S 由细菌分泌的多肽，含有由细菌分泌的多肽，含有D-氨基酸和一些不氨基酸和一些不常见氨基酸，如鸟氨酸常见氨基酸，如鸟氨酸 (Ornithine, 缩写为缩写为 Orn)。 生长激素释放抑制激素生长激素释放抑制激素 10肽肽内皮素内皮素

20、21肽肽心钠素心钠素 28肽肽促肾上腺皮质释放激素促肾上腺皮质释放激素 41肽肽生长激素释放激素生长激素释放激素 44肽肽甲状旁腺素甲状旁腺素 84肽肽神经肽神经肽P物质和脑啡肽物质和脑啡肽抗生素肽抗生素肽短杆菌肽短杆菌肽A，博莱霉素，博莱霉素9. 其它活性肽其它活性肽10.10.基因工程产品基因工程产品神经生长因子神经生长因子 118118个氨基酸个氨基酸-干扰素干扰素 127127134134个氨基酸个氨基酸-干扰素干扰素 165165166166个氨基酸个氨基酸白细胞介素白细胞介素 133 133个氨基酸个氨基酸促红细胞生成素促红细胞生成素 157157个氨基酸个氨基酸 第四节第四节 测

21、定蛋白质一级结构测定蛋白质一级结构 (测序测序) 的策略的策略（1 1）测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目（2）拆分蛋白质分子的多肽链）拆分蛋白质分子的多肽链（3）断开多肽链内的二硫键）断开多肽链内的二硫键（4）分析每一多肽链的氨基酸组成）分析每一多肽链的氨基酸组成 （5）鉴定多肽链的）鉴定多肽链的N-末端和末端和C-末端残基末端残基 （6）裂解多肽链成较小的肽段（用）裂解多肽链成较小的肽段（用2种或几种不种或几种不 同的断裂方法）同的断裂方法） （7）测定各肽段的氨基酸序列）测定各肽段的氨基酸序列 （8）利用重叠肽段推断）利用重叠肽段推断(重建重建)完整多肽链的氨基完整

22、多肽链的氨基 酸序列酸序列 （9）确定二硫键的位置）确定二硫键的位置 简言之，蛋白质必须首先裂解成可测定简言之，蛋白质必须首先裂解成可测定的足够小的单个片段，然后通过各片段的重叠的足够小的单个片段，然后通过各片段的重叠序列构建出起始蛋白质的一级结构。序列构建出起始蛋白质的一级结构。N-和和C-末端氨基酸残基分析末端氨基酸残基分析 N- -末端分析末端分析 已学：二硝基氟苯法，丹磺酰氯法，已学：二硝基氟苯法，丹磺酰氯法，最常用的最常用的 为异硫氰酸苯酯法为异硫氰酸苯酯法 （三）蛋白质测序的常用方法（三）蛋白质测序的常用方法图图 N-末端分析末端分析2,4-二硝基氟苯法二硝基氟苯法黄色黄色图图 N

23、-末端分析末端分析Edman降解法降解法（1）肼解法）肼解法NH2NH2100 肼化物能与苯甲醛缩合成水不溶性肼化物能与苯甲醛缩合成水不溶性的沉淀的沉淀, ,而利于而利于C-C-端氨基酸分离端氨基酸分离（2） 多肽链多肽链C-末端的氨基酸，可用硼氢化锂还末端的氨基酸，可用硼氢化锂还原成相应的原成相应的-氨基醇。肽链完全水解后，分析氨基醇。肽链完全水解后，分析C-末端的末端的-氨基醇。氨基醇。（3）羧肽酶法）羧肽酶法最有效、最常用最有效、最常用氨基酸的释放量氨基酸的释放量(mol)反应时间反应时间羧肽酶法鉴定肽链羧肽酶法鉴定肽链C-末端残基及末端残基及C-末端序列末端序列l羧肽酶羧肽酶A、B、C

24、 及及 Y 分别来自牛胰、猪胰、柑橘叶、面包酵母分别来自牛胰、猪胰、柑橘叶、面包酵母l羧肽酶羧肽酶A：当当C-C-末端为末端为ProPro、ArgArg 和和 LysLys 时，或时，或 倒数第二个是倒数第二个是ProPro时，该酶均不能作用。时，该酶均不能作用。l羧肽酶羧肽酶B：只水解以只水解以 ArgArg 和和 Lys Lys 为为C-C-末端残基末端残基 的肽键，但要求的肽键，但要求倒数第二个不是倒数第二个不是ProPro。l羧肽酶羧肽酶A、B 混合物：混合物：当当倒数第二个不是倒数第二个不是ProPro时时, , 能水解释放能水解释放除除ProPro以外的任一以外的任一C-C-末端残

25、基。末端残基。l羧肽酶羧肽酶Y：可作用于任何一个可作用于任何一个C-C-末端残基的肽键末端残基的肽键 设计自动化序列仪设计自动化序列仪-AA-AA-Lys-AA-AA-Arg-AA-AA-Pro-AA-AA-pro-AA羧肽酶羧肽酶A不能作用不能作用-AA-AA-Lys-AA-AA-Arg羧肽酶羧肽酶B能作用能作用羧肽酶羧肽酶A、B均不能作用均不能作用（1 1）过甲酸氧化法）过甲酸氧化法半胱氨磺酸衍生物半胱氨磺酸衍生物2、二硫键的断裂、二硫键的断裂-主要有主要有2种方法种方法 （2）巯基化合物还原法）巯基化合物还原法巯基乙醇或二硫苏糖醇巯基乙醇或二硫苏糖醇8mol/L尿素尿素或或6mol/L盐

26、酸胍盐酸胍 可以用碘乙酸等烷基化试剂保护生成的半胱氨酸可以用碘乙酸等烷基化试剂保护生成的半胱氨酸的的-SH，以防其重新被氧化，以防其重新被氧化+H I +S-S-羧甲基衍生物羧甲基衍生物3 3、氨基酸组成的分析、氨基酸组成的分析图图 氨基酸自动分析仪记录的氨基酸混合物分析结果氨基酸自动分析仪记录的氨基酸混合物分析结果（四）、氨基酸组成的分析（四）、氨基酸组成的分析1 1、酶解法酶解法: :l内切酶：内切酶：胰蛋白酶胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜蛋白酶、 胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶l外切酶：羧肽酶和氨肽酶外切酶：羧肽酶和氨肽酶多肽链的选择性降解多肽链的选择性降解 （五）、多肽链的部分裂

27、解和（五）、多肽链的部分裂解和 肽段混合物的分离纯化肽段混合物的分离纯化lR1=Lys（K）和）和Arg（R）l专一性较强，水解速度快专一性较强，水解速度快lR2=Pro（抑制）（抑制）NH CH COR4NH CH COR3NH CH COR2NH CH COR1肽链肽链水解位点水解位点胰蛋白酶胰蛋白酶trypsinlR1=Phe（F）、）、 Trp（W）Tyr（Y）等疏水性）等疏水性AAlLeu、Met和和His稍慢稍慢lR2=Pro（抑制）（抑制） lpH8-9NH CH COR4NH CH COR3NH CH COR2NH CH COR1肽链肽链水解位点水解位点糜蛋白酶糜蛋白酶/胰凝乳

28、蛋白酶（胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）水解速度与相邻水解速度与相邻AAAA性质有关性质有关: : 酸性：酸性：-/-/碱性：碱性：+ +lR2=Phe（F）、）、 Trp（W）、）、 Tyr（Y）、）、Leu（L）、）、Ile（I）、）、Met（M）、）、Val（V）及其它疏水性强的及其它疏水性强的AA水解速度较快水解速度较快NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1肽链肽链水解位点水解位点R2= Pro或或Gly，不水解，不水解R1或或R3=Pro，抑制水解，抑制水解嗜热菌蛋白酶嗜热菌蛋白酶（thermolysin)lR1和和/或或R2Phe（F）、）、Trp

29、（W）、）、Tyr（Y）、）、 Leu（L）及其它疏水性）及其它疏水性AA水解速度较快水解速度较快 lR1=Pro（抑制）（抑制）lpH2NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1肽链肽链水解位点水解位点胃蛋白酶胃蛋白酶PepsinNHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1肽链肽链水解位点水解位点羧肽酶和氨肽酶羧肽酶和氨肽酶2 2、化学裂解法、化学裂解法 溴化氰水解法溴化氰水解法(Cyanogen bromide)选择性地切割由选择性地切割由MetMet羧基形成的肽键。羧基形成的肽键。CH3S：CH2CH2CHNHCNHCHCOOR+BrC+NBr-

30、CH3S+CH2CH2CHNHCNHCHCOORCNCH3SCN CH2CHNHCNHCHCOORCH2+H2O+CH2CHNHCOCH2OH3N+CHCOR高丝氨酸内酯（五）、多肽链的部分裂解和（五）、多肽链的部分裂解和 肽段混合物的分离纯化肽段混合物的分离纯化多肽链的选择性降解多肽链的选择性降解 NH2OH断裂：断裂： 较专一性断裂较专一性断裂Asn-Gly之间的肽键之间的肽键 Asn-Leu及及Asn-Ala键也能部分断裂键也能部分断裂 3、肽段氨基酸序列的测定、肽段氨基酸序列的测定3种测定肽段序列的方法种测定肽段序列的方法 Edman降解法降解法（传统方法）（传统方法） C端降解法端降解法（经硫氰酸铵和醋酸酐处理）（经硫氰酸铵和醋酸酐处理） 质谱法质谱法4 4、肽段在多肽链中次序的决定、肽段在多肽链中次序的决定 重叠肽段拼凑法重建多肽链序列重叠肽段拼凑法重建多肽链序列5 5、二硫桥位置的确定、二硫桥位置的确定对角线电泳对角线电泳 一般采用胃蛋白酶处理原来的含二硫键的一般采用胃蛋白酶处理原来的含二硫键的多肽链，利用双向电泳（多肽链，利用双向电泳（对角线电泳）对角线电泳）技术，技术，分别对用过甲酸处理前、后的肽段进行电泳，分别对用过甲酸处理前、后的肽段进行电泳，分离出各个肽段，将每个肽段进行组成及顺序分离出各个肽段，将每个肽段进行组成及顺