基因工程仪器操作系统(二)

1、 超净工作台是一种局部净化设备，即利用空气净化技术使一定操作区内的空间达到相对的无尘、无菌状态。使用时，必须放置在洁净的空间。其接种数量不受无菌空间的限制，操作比较简便，可以较大幅度地提高工作效率，适用于大规模生产。为了保证接种成功率，接种时使用酒精灯，效果更好。垂直双面流层 当操作液体或半液体，例如摇动、倾注、搅拌，或将液体滴加到固体表面上或另一种液体时，均有可能产生气溶胶。在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶、采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移至微量培养板中、对感染性物质进行匀浆及涡旋震荡、对感染性液体进行离心以及继续动物操作时，这些实验室操作都可能产生感染性气溶胶。 由于肉眼无法

2、看到直径小于5m的气溶胶以及直径为5100 m的微小液滴，因此实验室工作人员通常意识不到这样大小的颗粒在生成，并可能吸入或交叉污染工作台面的其他材料。已经表明，正确使用生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的伤害。2.2.生物危害（生物危害（BiohazardBiohazard） 一种对人体能产生有害因子的生物源性的力量，例如：由植物一种对人体能产生有害因子的生物源性的力量，例如：由植物和动物传播的微生物、毒素和过敏原感染和毒害人。和动物传播的微生物、毒素和过敏原感染和毒害人。实验室生物安全（实验室生物安全（BiosafetyBiosafety ） 为防止实验室的生物危害采取合适的实验程序

3、和操作，使用必为防止实验室的生物危害采取合适的实验程序和操作，使用必要的防护设备保证人员及环境的安全。要的防护设备保证人员及环境的安全。 年月日，卫生部法监司在北京召开年月日，卫生部法监司在北京召开生物安全生物安全实验室认证管理专家研讨会实验室认证管理专家研讨会呼吁：呼吁： 尽快：建立机构、制订法规。尽快：建立机构、制订法规。 落实：建设前论证、建设后验收、使用中监督。落实：建设前论证、建设后验收、使用中监督。 年月日，国家科技部召开年月日，国家科技部召开“全国生物安全实验全国生物安全实验室管理工作会议室管理工作会议”实验室生物安全应纳入法制管理实验室生物安全应纳入法制管理根据：“实验室生物安

4、全通用准则”据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级，依次为： 一级生物安全防护实验室（一级生物安全防护实验室（BSL-1BSL-1） 无致病作用的微生物，如教学的普通微生物实验室等 二级生物安全防护实验室（二级生物安全防护实验室（BSL-2BSL-2相当于相当于P2 )P2 ) 具有中等潜在危害的微生物。 ( 其中“P”的定义为Physical Protecton物理的保护 / Physical containment物理的防护 )三级生物安全防护实验室（三级生物安全防护实验室（BSL-3BSL-3相当于相当于P3 )P3 ) 呼吸传播，使人传染严重甚至是致病微生物及其毒素，传播途径明确，

5、目前已有疫苗有疫苗 四级生物安全防护实验室（四级生物安全防护实验室（BSL-4BSL-4相当于相当于P4 )P4 ) 高度危险性，通过气溶胶传播或传播途径不明，目前尚无疫无疫苗苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。 3. 生物安全实验室的划分一级生物安全防护实验室无须使用生物安全柜应穿工作服，手上皮肤有破损戴手套应穿工作服，手上皮肤有破损戴手套实验室设计和建造无特殊要求：实验室设计和建造无特殊要求：有可开启的窗户，应设置纱窗，设洗手池，有可开启的窗户，应设置纱窗，设洗手池，围护结构内表面应易于清洁。围护结构内表面应易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯。实验台

6、表面应不透水，耐腐蚀、耐热，实验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热，有专门放置生物废弃物容器的台（架）有专门放置生物废弃物容器的台（架）二级生物安全防护实验室（二级生物安全防护实验室（BSL-2BSL-2） 适用于：适用于： (1) (1) 含漱液、血清和血液等样品的诊断检测含漱液、血清和血液等样品的诊断检测 (2) (2) 溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和/ /或无传或无传染性病毒基因片段染性病毒基因片段 （3 3）常规的细菌和毒素检测）常规的细菌和毒素检测 （4 4）能产生气溶胶的样品处理）能产生气溶胶的样品处理 （5 5）临床样品的包装、分装）临床样

7、品的包装、分装 （6 6）离心管和离心机转头的封闭与开启）离心管和离心机转头的封闭与开启4. 使用生物安全柜的场所如下情况使用生物安全柜： （1）致病微生物气溶胶或溅出的操作应在生物安全柜 （级生物安全柜为宜）（2）处理高浓度或大容量感染性材料均须在生物安全柜 (级安全柜为宜）或物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。（3）上述材料的离心操作如果使用密封的离心机转子 或安全离心杯，且它们只在生物安全柜中开闭和装载感染性材料，则可在实验室中进行。总结：总结：生物安全防护将是今后临床实验室建设的重要基础设施,进行传染性标本的操作的临床实验室应配备生物安全柜今后临床实验室的建设应具备二级实验室的生物

8、安全性,传染病专科医院或三级综合医院至少要一个城市要 有一个P3实验室 级生物安全柜级生物安全柜至少装一个高效过滤器对排气进行净化，至少装一个高效过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化无涡流单向流空气。工作空间为经高效过滤器净化无涡流单向流空气。正面推拉窗打开一半，上为观察窗，下为操作窗。正面推拉窗打开一半，上为观察窗，下为操作窗。外部空气由操作窗口吸进，而不能逸出。外部空气由操作窗口吸进，而不能逸出。既保证工作人员不受侵害，既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象不受污染（工作原理见图）也保证实验对象不受污染（工作原理见图）5. 生物安全柜原理及分型级生物安全柜级生物安全柜四大要素：

9、四大要素： 1. 1. 物理屏障物理屏障 2. 2. 高效过滤高效过滤 3. 3. 空气屏障空气屏障 4. 4. 定向层流定向层流机理机理 诱捕效应 静电效应 拦截效应 沉降效应 扩散效应小于0.3 um 的病毒通过HEPA Filter渗透测试结果显示，每30,000,000 个颗粒中才有1 2个可以通过过滤器 三级生物安全柜 至少装一个高效过滤器对排气净化，工作空间为经高效至少装一个高效过滤器对排气净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流单向流空气。正面上部为观察窗，下部过滤器净化的无涡流单向流空气。正面上部为观察窗，下部为手套箱式操作口。箱内对外保持负压可确保人体与柜内为手套箱式操作口。

10、箱内对外保持负压可确保人体与柜内物品全隔绝。物品全隔绝。三级生物安全柜隔水式恒温培养箱的电器结构图隔水式恒温培养箱的电器结构图主要由箱体、加热器、鼓风机和温控仪等几部分组成细胞培养细胞培养对生长环境对生长环境要求要求无菌环境无菌环境恒定的温度恒定的温度气体环境气体环境细胞培养基细胞培养基细胞培养箱工作原理图细胞培养箱工作原理图 细胞培养箱气路原理图细胞培养箱气路原理图 加热方式加热方式不同不同 气套式气套式细胞培养箱细胞培养箱 水套式水套式细胞培养箱细胞培养箱 供气种类不同供气种类不同 二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱 三气细胞培养箱三气细胞培养箱 灭菌功能不同灭菌功能不同 普通细胞培养箱普通细胞培养箱 高温灭菌培养箱高温灭菌培养箱 细胞培养箱的分类：细胞培养箱的分类： 二氧化碳培养箱控制中心二氧化碳培养箱控制中心细胞培养箱的结构细胞培养箱的结构细胞培养箱的结构细胞培养箱的结构p细胞培养箱的性能指标：细胞培养箱的性能指标：p温度控制精度温度控制精度p二氧化碳浓度控制精度及测量系统自动校准二氧化碳浓度控制精度及测量系统自动校准功能湿度控制系统功能湿度控制系统p相对湿度相对湿度 操作者可以通过培养箱前面附带的橡胶手套在箱内进行操操作者可以通过培养箱前面附带的橡胶手套在箱内进行操作，使厌氧菌