抗生素类药物的分析PPT学习教案

1、会计学1抗生素类药物的分析抗生素类药物的分析第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义抗生素的来源抗生素的来源1. 1. 生物合成（发酵）生物合成（发酵）2. 2. 化学合成或半合成化学合成或半合成 是指是指“在低浓度情况下对某些生物的生命活在低浓度情况下对某些生物的生命活动有特异性抑制作用一类化学物质的总称动有特异性抑制作用一类化学物质的总称”第1页/共138页化学纯度低化学纯度低同系物多同系物多异构体多异构体多降解物多降解物多发酵过程不易控制发酵过程不易控制易受污染易受污染工艺复杂，活性工艺复杂，活性组分易发生变异组分易发生变异产品稳定性差产品稳定性差分子结构大多不稳定，降解后疗分子结

2、构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用效下降、失效或增加毒副作用第2页/共138页第3页/共138页第4页/共138页含量测定或效价测定含量测定或效价测定1、微生物检定法、微生物检定法稀释法稀释法比浊法比浊法管碟琼脂扩散法管碟琼脂扩散法抑菌圈抑菌圈灵敏度高、需用量少灵敏度高、需用量少适用范围广适用范围广纯品、不纯品、已知的和新的纯品、不纯品、已知的和新的可一次测定同类型抗生素的总效价可一次测定同类型抗生素的总效价无需分离纯化无需分离纯化与临床的应用要求一致与临床的应用要求一致操作繁琐、费时费力操作繁琐、费时费力误差较大误差较大效价效价:是指每是指每mlml或每或每mgmg中含有某种抗

3、生中含有某种抗生素有效成分的多少素有效成分的多少是以抗生素对微生物的杀伤或是以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来判断效价的抑制程度为指标来判断效价的一种方法一种方法是结构复杂和多组分抗生素效价测是结构复杂和多组分抗生素效价测定的首先方法定的首先方法第5页/共138页2、物理化学法、物理化学法 HPLCLC-MSUV容量法容量法准确可靠、专属性高、操作简单、省时、样品准确可靠、专属性高、操作简单、省时、样品用量少用量少1、对结构已知或提纯的抗生素、对结构已知或提纯的抗生素2、需要标准品对照、需要标准品对照分析方法分析方法第6页/共138页分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）： 内酰胺类

4、、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗生素类第7页/共138页NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类一、结构与性质一、结构与性质ABA:-内酰胺环；内酰胺环；B：氢化噻唑环：氢化噻唑环sc10076第8页/共138页头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOABA:-内酰胺环；内酰胺环；B：氢化噻嗪环：氢化噻

5、嗪环sc10076第9页/共138页CONSOHNCOOHCH3CH3CH2（青霉素（青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）第10页/共138页NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）第11页/共138页NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2第12页/共138页C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第13页/共138页头孢氨苄头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2第14页/共138页头孢拉定头孢拉定CH2NH2CONONHSCH3COOH第15页/共138页头孢噻

6、吩头孢噻吩钠钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONa第16页/共138页NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO第17页/共138页NSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 第18页/共138页与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2第19页/共138页NSO123456787654321NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20D 头孢菌素类头

7、孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 第20页/共138页 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有母核有O=C-N-C=CO=C-N-C=C 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UV第21页/共138页青霉素钠青霉素钠头孢氨苄头孢氨苄第22页/共138页水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定性因素不稳定性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 第23页/共138页（某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）失效失效降解降解青霉素类青霉素类酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶某些

8、氧化剂某些氧化剂第24页/共138页青霉素的降解途径青霉素的降解途径NSC H3C H3C O O HONHRO1234567HH NSC H3C H3C O O HONHRO1234567HO H青青 霉霉 素素 酶酶青青 霉霉 噻噻 唑唑 酸酸强强 酸酸 性性 环环 境境NSC H3C H3C O O H1234HNRH O O CN酸酸 性性 加加 热热C H2C O N H C H2C H OCC H3H SC H3CHC O O HH2N+弱弱 酸酸 性性青青 霉霉 醛醛青青 霉霉 胺胺ONORN HC H3C H3H SC O O H青青 霉霉 烯烯 酸酸N H 2 O H青青 霉

9、霉 噻噻 唑唑 酸酸 酰酰 基基 羟羟 胺胺 酸酸H g C l2青青 霉霉 酸酸与含水量和纯度密切相与含水量和纯度密切相关关第25页/共138页第26页/共138页失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类内内酰酰胺胺酶酶 第27页/共138页K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + HAc白白 K+第28页/共138页（二）呈色反应（二）呈色反应1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟羟肟肟酸酸衍衍生生物

10、物Fe3+/3H+第29页/共138页2、与与H2SO4 - HNO3反应反应亮黄亮黄红棕红棕黄色黄色头孢噻肟钠头孢噻肟钠头孢噻吩钠头孢噻吩钠头孢氨苄头孢氨苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类第30页/共138页NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23. 茚三酮茚三酮反应反应蓝紫色蓝紫色氨基氨基茚三酮茚三酮 - -氨基氨基第31页/共138页4. 双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 （开环分解）（开环分解）第32页/共138页5. 与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西

11、林HCHOCHSOH ”羰基侧链含“羰基侧链含“（分解）（分解）变色酸变色酸显色显色第33页/共138页NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150（缩合）（缩合）色色褐褐第34页/共138页6. 与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸 OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮第35页/共138页7. 与铜盐反应与铜盐反应 CuSOHAc头孢氨苄头孢氨苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反应专属反应第36页/共138页（三）沉淀反应（三）沉淀反应1. 遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾

12、 H青霉素的青霉素的碱金属盐碱金属盐的溶解性的溶解性第37页/共138页2. 有机胺盐反应有机胺盐反应（1）重氮化）重氮化 - 偶合反应偶合反应 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基第38页/共138页C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第39页/共138页NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2 第40页/共138页（2）与三硝基苯酚反应）

13、与三硝基苯酚反应 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺第41页/共138页光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法A,Emin,max,%1cm1 光光谱谱图图样品、分解产物样品、分解产物头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50第42页/共138页2、IR法法117401815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺第43页/共138页3、NMR法法 利用不同结构的原子核在利用不同结构的原子核在D2O中中有有不同的不同的NMR光谱进行鉴别光谱进

14、行鉴别JP以吸收峰频率对峰强度进行作图以吸收峰频率对峰强度进行作图 主要研究原子核的磁化性质及其在主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律第44页/共138页色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法和斑点颜色和斑点颜色比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件fR2、HPLC法法Rt比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件第45页/共138页第46页/共138页第47页/共138页第48页/共138页第49页/共138页2112RRttr异构体异构体A A异构体异构体B B头孢呋头孢呋辛辛第50页/共138页第51页/共138页第5

15、2页/共138页第53页/共138页三、三、 含量测定含量测定HPLCHPLC、碘量法、汞量法、酸碱滴定法、可、碘量法、汞量法、酸碱滴定法、可见紫外分光光度法等见紫外分光光度法等第54页/共138页 IINaOH头孢菌素族头孢菌素族青霉素族青霉素族（水解）（水解） H碘量法碘量法（一）（一）1.原理原理水解产物水解产物 OSNaNaIOSNaI定量过量定量过量剩余剩余-内酰胺类内酰胺类第55页/共138页反应分两步进行：反应分两步进行：1. 水解反应水解反应 (按化学计算量进行按化学计算量进行)2. 氧化氧化-还原反应还原反应 (无固定的无固定的量量关关系，受温度、系，受温度、pH值和时间等因

16、素值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定用标准品平行对照测定)第56页/共138页例例注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因青霉素 含量测含量测定定 取装量差异项下的内容物，精密称取装量差异项下的内容物，精密称取约取约0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，置碘瓶中，加加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml放置放置20分钟，再加分钟，再加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml与醋酸与醋酸-醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml，精密，精密加入

17、碘滴定液加入碘滴定液(0.01mol/L)15ml，密塞，密塞，摇匀，在摇匀，在2025暗处放置暗处放置20分钟，用分钟，用硫代硫酸钠滴定液（硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，）滴定，第57页/共138页至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸，置碘瓶中，加醋酸-醋酸醋酸钠缓冲液（钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴，精密加入碘滴定液（定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定分钟

18、，用硫代硫酸钠滴定液（液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。出供试品的含量。第58页/共138页V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回回滴滴 V对空对空V对对2.方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴第59页/共138页 空白试验空白试验A A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B B、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰、消除样品中其他消耗碘的杂

19、质的干扰C C、消除碘挥发造成的误差、消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定第60页/共138页空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2第61页/共138页 采用标准品平行对照测定采用标准品平行对照测定A A、可消除温度、可消除温度、pHpH、操作、环境等条件、操作、环境等条件的影响的影响B B、使本法测定结果与微生物检定法一致、使本法测定结果与微生物检定法一致第62页/共138页3.条件条件（1）弱酸性）弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3- + I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀（2）温度）温度 2

20、426温度温度38 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘第63页/共138页（3）水解时间）水解时间以水解以水解20分钟后的分钟后的耗碘量最大耗碘量最大（4）反应时间）反应时间反应反应20分钟后，分钟后，耗碘量随时间的耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误变化较小，可减小含量测定的误差差第64页/共138页第65页/共138页4.特点特点（1）灵敏度高）灵敏度高样品样品 : 碘碘 = 1 : 8（2）反应条件、实验操作要求高）反应条件、实验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同第66页/共13

21、8页5.计算计算原料原料%100 平平均均装装量量）（）（含含量量样样对对对对对对空空样样样样空空DUWUCVVVVO第67页/共138页汞量法汞量法（二）（二）1.原理原理SHROH 青霉素族青霉素族（水解）（水解）HgRS ）（青霉素族青霉素族 Hg .pH碱性水解产碱性水解产物青霉噻唑物青霉噻唑酸，进一步酸，进一步水解产物青水解产物青霉胺霉胺第68页/共138页2.方法方法 总总样样VNOHgHNONaOH 醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解 降降空空醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液VNOHg pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定第69

22、页/共138页例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置，摇匀，放置15分钟，加分钟，加1mol/L硝酸溶硝酸溶液液5ml，醋酸盐缓冲液，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水及水20ml，摇匀，照电位滴定法，摇匀，照电位滴定法(附录附录 A),用铂电极为指示电极，汞用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极硫酸亚汞电极为参比电极，在为参比电极，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液定液(0.02mol/L)缓慢滴定，缓慢滴定，第70页/共138页（控制滴定过程约为（

23、控制滴定过程约为15分钟），不计第分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于相当于7.128mg的总青霉素的总青霉素(按按C16H17N2NaO4S计算计算)。 另取本品约另取本品约0.5g，精密称定，加水，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液液(0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上滴定，终点判断方法同上.第71页/共138页 每每1ml硝酸汞滴定液

24、（硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于）相当于7.128mg的降解物（按的降解物（按C16H17N2NaO4S计算计算）。）。 总青霉素的百分含量与降解物的百分含总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。量之差值即为青霉素的含量。第72页/共138页3、讨论讨论（1）以第二次滴定突跃为终点以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终点电位法指示终点 （2）反应摩尔比反应摩尔比 1 : 1（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品第73页/共138页%WFTV%WFTV% 空空空空样样样样含量含量4、计算计算%FTWVWV% ）

25、（含量含量空空空空样样样样第74页/共138页 精密称取含水量为精密称取含水量为0.5%的青霉素的青霉素钠钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。燥品计算，求样品中青霉素的含量。例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 .T第75页/共138页 %. %. 第7

26、6页/共138页（三）（三）1、原理原理青霉噻唑酸青霉噻唑酸青霉素类青霉素类NaOH（钠盐）（钠盐）OHNaClHClNaOH （剩剩余余）-内酰胺类内酰胺类-内酰内酰胺环的不胺环的不稳定性稳定性第77页/共138页2、方法方法 供试液供试液内酰胺类内酰胺类OHNaOH定定量量过过量量 HCl回滴回滴中和中和加加NaOHNaOH中和中和 %WFTVV% 样样空空含量含量第78页/共138页3、讨论讨论（1）水解前先中和溶剂和样品水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收加热时避免吸收CO2 CONaNaOHCO不能使酚酞变红不能使酚酞变红（3）空白试验校正空白试验校正(消除消除Na2CO3干扰

27、干扰)（4）特点特点 简便快速简便快速 不适用于有残留酯的产品不适用于有残留酯的产品第79页/共138页（四）可见（四）可见- -紫外分光光度法紫外分光光度法原理：利用青霉素的降解产物青霉烯酸在原理：利用青霉素的降解产物青霉烯酸在320 nm320 nm360 nm360 nm处有强烈吸收特性，并且处有强烈吸收特性，并且该降解产物与该降解产物与CuCu2+2+或或HgHg2+2+形成稳定并易于测形成稳定并易于测定的配位化合物，从紫外分光光度法测定。定的配位化合物，从紫外分光光度法测定。硫醇汞盐法硫醇汞盐法酸水解铜盐法酸水解铜盐法羟肟酸比色法羟肟酸比色法第80页/共138页nmCupHA 青霉烯

28、酸青霉烯酸青霉素族青霉素族（水解）（水解）1、酸水解法（铜盐法）酸水解法（铜盐法）（1）原理）原理稳定剂稳定剂JP青霉素族青霉素族酸性降酸性降解产物解产物第81页/共138页（2）方法）方法标标样样枸橼酸枸橼酸硫酸铜硫酸铜标准液标准液供试液供试液AAnmA 320H+ （3）特点）特点实验条件随各药物稳定性不同而定实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对照法标准品对照法第82页/共138页2、硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理）原理青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞盐盐青青霉霉素素族族 HgCl（咪唑）（咪唑）nmmax 青霉素族青霉素族催化剂催化剂第83页/共138页（2）方法）方法对照品法对照品法标标

29、样样咪唑咪唑硼酸缓冲液硼酸缓冲液标准液标准液供试液供试液AAHgCl 2pH 9%WWAA%对照品对照品样样标标标标样样 第84页/共138页（3）讨论）讨论a. 咪唑催化的水解产率高，硫咪唑催化的水解产率高，硫 醇汞盐稳定（醇汞盐稳定（3h）b. 侧链有侧链有-NH2时，需加醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才能发生上述将其乙酰化后才能发生上述 反应反应第85页/共138页（4）特点）特点A、简便快速、简便快速B、用标准品对照，重现性良、用标准品对照，重现性良 好，好，RSD1%第86页/共138页3、羟肟酸比色法羟肟酸比色法Fe3+/3H+红色红色-内酰胺类内酰胺类 HClNOHH内酰胺类

30、内酰胺类羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物第87页/共138页HPLCHPLC法法内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）第88页/共138页哌拉西宁哌拉西宁 原料药原料药 含量测定含量测定色谱条件色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇醇0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氢钠溶液磷酸二氢钠溶液1010氢氧化四乙基氢氧化四乙基铵溶液铵溶液水（水（40040050503 3547547）用磷酸调节）用磷酸调节pHpH值值至

31、至5.55.5为流动相。检测波长为为流动相。检测波长为254nm254nm。第89页/共138页生物样本中生物样本中- -内酰胺类抗生素的分析内酰胺类抗生素的分析血浆血浆尿样尿样唾液唾液胆汁胆汁生物样生物样本本色谱柱色谱柱：Hypersil ODS C18 (200 mm4.6 mm, I.D. 5m)样品制备样品制备：取血浆取血浆200L，加入内标，加入内标5L，再加入，再加入HCLO4，窝旋提取窝旋提取Internal standard IS第90页/共138页第91页/共138页第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素苷苷苷元苷元糖糖缩合缩合 氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖缩

32、合缩合 链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素一、结构与性质一、结构与性质第92页/共138页链霉素链霉素苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺第93页/共138页链霉素：链霉素：链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺OOOOHOOHOHCH3CHOOHCH2OHOHOHHNCH3HNHNCCNHNH2NHH2N第94页/共138页巴龙霉素巴龙霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脱氧链霉胺脱氧链霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龙霉糖巴龙霉糖巴龙胺巴龙胺苷元苷元巴龙二糖胺巴龙二糖胺 糖糖 第95页/共138页庆大霉素庆大霉素

33、 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 + 脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 第96页/共138页ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺第97页/共138页C2b R=R1=H R2=CH3第98页/共138页性质：性质：多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3 3个个庆大霉素庆大霉素 5 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）巴龙霉素巴龙霉素 4个个第99页/共138页链霉素链霉素 pH57

34、.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定UV（三）（三）稳定性稳定性（四）（四）链霉素水解产物反应链霉素水解产物反应（五）（五）第100页/共138页二、二、 鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）蓝紫色蓝紫色庆大霉素庆大霉素链霉素链霉素茚三酮茚三酮羟基胺结构羟基胺结构第101页/共138页N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（二）（二）甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺庆大霉素庆大霉素链霉素链霉素水解水解 N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛 H+樱桃红色樱桃红色（Elson-Morgan反应）反应）第102页/共138页 麦芽酚反应麦芽酚反应（三）（三

35、） 链霉素特有反应链霉素特有反应链霉糖链霉糖链霉素链霉素 OH麦麦芽芽酚酚紫紫红红色色 3FeH+分子重排分子重排第103页/共138页 （四）（四）Molisch反应反应 具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷类抗生素经酸水解具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸作用下脱水生成后，在盐酸作用下脱水生成糠醛糠醛或或羟甲基糠醛羟甲基糠醛，加，加入入 萘酚萘酚（红紫色红紫色）或）或蒽酮蒽酮（蓝紫色蓝紫色）第104页/共138页第105页/共138页（六）（六） 24SO反应反应白白 BaSOSOBaH+庆大霉素无庆大霉素无UV吸收吸收nmmax 链霉素链霉素（七）（七） UV法法第106页/

36、共138页第107页/共138页第108页/共138页第109页/共138页对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量2 2、庆大霉素庆大霉素C C组分的测定组分的测定衍生化后衍生化后HPLCHPLC组分组分C C的毒副作用的毒副作用和耐药性与庆大和耐药性与庆大霉素有差异，导霉素有差异，导致产品的效价和致产品的效价和临床疗效临床疗效第110页/共138页 .pH吲哚衍生物吲哚衍生物巯基醋酸巯基醋酸邻苯二醛邻苯二醛氨基氨基

37、max = 330nm（1 1）衍生化原理）衍生化原理 或电化学检测器或电化学检测器或蒸发光散射检测器或蒸发光散射检测器第111页/共138页RPHPLC（2 2）方法）方法 规定规定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050%（3 3）计算）计算 %AAAAA%ACCCCiiaa 峰面积归一化法峰面积归一化法第112页/共138页第113页/共138页四、四、 含量测定含量测定链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素微生物检定法微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品

38、两者的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。，以测定供试品效价的一种方法。第114页/共138页第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素一、结构与性质一、结构与性质2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1123456789101112第115页/共138页性质性质 两性两性（一）（一）1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 C C1010酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性C C4 4二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性第116页/共138页吸湿性吸湿

39、性（二）（二）多含结晶水多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV具有共轭双键体系（吸收波长为长波方向）具有共轭双键体系（吸收波长为长波方向）（三）（三）与金属离子络合与金属离子络合（四）（四）pH3 7.5 荧光荧光 酚羟基、酚羟基、烯醇基烯醇基第117页/共138页不稳定性不稳定性（四）（四） 差向异构化差向异构化差向金霉素差向金霉素差向四环素差向四环素金霉素金霉素四环素四环素 pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光第118页/共138页RRRRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410RRRRHN(CH3)2

40、OHCONH2OOHOOHOHABCD410弱酸性环境弱酸性环境ETC差向四环素差向四环素第119页/共138页RH3CO HR HN (C H3)2O HC O N H2OO HOO HO HABCD410RR HN (C H3)2O HC O N H2OOO HO HO HABCD410C H366强酸性环境强酸性环境ATC脱水四环素脱水四环素第120页/共138页 碱性下降解碱性下降解异四环素异四环素四环素四环素 OH（荧光）（荧光）HOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2第121页/共138页RH3COHRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410RRH

41、N(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410CH366O碱性环境碱性环境EATC异四环素异四环素差向脱水四环差向脱水四环素素第122页/共138页二、二、 鉴别试验鉴别试验H2SO4反应反应（一）（一）黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 SOH第123页/共138页FeCl3反应反应（二）（二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 FeCl含有酚羟基含有酚羟基第124页/共138页Cl-反应反应（三）（三）白白 AgClAgClHNOnmmax 溶剂：溶剂：1mol/L盐酸盐酸-甲醇甲醇浓度：浓度：0.01mg/mlUV法法（四）（四）第125页/共138页荧光法荧光法（五）（五）土霉素土霉素金霉素金霉素四环素四环素绿色荧光绿色荧光蓝色荧光蓝色荧光黄色荧光黄色荧光 OHUV绿色荧光绿色荧光H+U