DB41∕T 2188-2021 金银花组织培养育苗技术规程

1、 ICS 65.020.01CCS B 3041河 南 省 地 方 标 准DB41/T 21882021金银花组织培养育苗技术规程2021-10-19发布2022-01-18实施 DB41/T 21882021目次前言. II123456范围. 1规范性引用文件 . 1术语和定义 . 1设施设备 . 1组织培养 . 2温室驯化 . 3附录A（资料性）培养基成分. 4I DB41/T 21882021前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。II DB41/T 21882021金银花组织培养育苗技术规程12范围本文件规定了金银花组织培养育

2、苗的术语和定义、设施设备、组织培养和温室驯化。本文件适用于金银花组织培养育苗。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T 18822010林木组织培养育苗技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.13.2金银花忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）。组织培养在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，在人工培养基和人工控制的环境中，使其再生新植株的过程和技术。3.3外植体用于植物组织

3、培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。3.4初代培养在组织培养过程中,最初建立的外植体无菌培养阶段。3.5继代培养将初代培养获得的茎段或愈伤组织，通过分离切割接种在新的培养基中，从而获得大量无菌幼苗的培养阶段。4设施设备4.1组织培养设施设备4.1.1基本要求组织培养室选址应环境清洁，远离微粒和烟雾等污染源，水电供应充足，交通运输便利。1 DB41/T 21882021组织培养室包括洗涤室、灭菌室、培养基配制室、缓冲室、无菌接种室和无菌培养室等。4.1.2洗涤室设备配备自动或半自动洗瓶机、水槽、收纳箱、量瓶架等。4.1.3灭菌室设备配备高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外线灯、烘干箱、微孔过

4、滤器等。4.1.4培养基配制室设备配备电子天平（0.0001 g,0.01 g）、酸度计、微波炉、冰箱等。4.1.5缓冲室设备配备衣帽柜、风淋装置等。4.1.6无菌接种室设备配备超净工作台、器械消毒器、酒精灯等。4.1.7无菌培养室设备配备培养架、紫外灯、臭氧发生器、空气加湿器、除湿机、时控装置等。温室驯化设施设备4.2日光温室，配备温湿度调节装置、光照控制装置、灌溉设备、栽培床、穴盘等。5组织培养5.1外植体取材与灭菌5.1.1外植体取材选取生长健壮、无病虫害的金银花当年生嫩枝，截取长度为0.5cm3cm的芽段，每个芽段包含13个腋芽。5.1.2外植体处理将截取的芽段置于1%中性洗涤剂中浸泡

5、10 min，再用自来水冲洗30 min。5.1.3外植体灭菌在超净工作台内，将处理过的芽段置于无菌培养瓶中，加入2.5%次氯酸钠（按有效氯计）溶液浸泡20 min，再用灭菌蒸馏水冲洗4次，以获得无菌的外植体用于接种。5.25.32培养基成分芽段初代培养与继代培养所需培养基成分见附录A，培养基pH 5.8。外植体的接种将经过灭菌的芽段置于超净工作台内，无菌接种。 DB41/T 218820215.4初代培养外植体接种于300 mL650 mL培养瓶中，每瓶分装培养基高度1.0 cm1.5 cm，每10 mL培养基接种1个芽段。置于无菌培养室中培养20 d30 d。培养室设置光照强度2000 l

6、x3000 lx，光照时间14 h/d，湿度60%，温度25±2。5.5继代培养将初代培养获得的不定芽分割成1cm的不定芽块，按5.4的方法接种培养，扩繁获得大量的不定芽3块。5.6生根培养从继代培养获得的不定芽块中分离高度2 cm的健壮不定芽，按5.4的方法接种培养，其中光照强度设置为3000 lx。获得根芽齐全的金银花无菌幼苗。6温室驯化6.1将根芽齐全的无菌幼苗带瓶转移至温室中，日光锻炼5 d7 d，然后开瓶锻炼3 d5 d，及时加水保湿。6.2将锻炼好的幼苗从培养瓶中取出，用自来水冲洗根部10min，洗净根系附着的培养基，置于适宜浓度的农用杀菌剂中，浸泡处理，然后定植于珍珠岩

7、基质的穴盘中，喷水保湿。3 DB41/T 21882021AA附录 A（资料性）培养基成分金银花组织培养培养基成分见表A.1。表A.1金银花组织培养培养基成分表初代培养基mg/L16501900170继代培养基生根培养基mg/L825培养基成分mg/L16501900170硝酸铵硝酸钾NH4NO3KNO3950磷酸二氢钾 KH2PO485七水硫酸镁 MgSO47H2O二水氯化钙 CaCl22H2O四水硫酸锰 MnSO44H2O37037018544044022022.36.222.36.222.36.2硼酸H3BO3无机成分七水硫酸锌 ZnSO47H2O8.68.68.6碘化钾KI0.830.250.0250.02537.327.81000.830.250.0250.02537.327.81000.830.250.0250.02537.327.8100二水钼酸钠 Na2MoO42H2O五水硫酸铜 CuSO45H2O六水氯化钴 CoCl26H2O乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA2H2O七水硫酸亚铁 FeSO47H2O肌醇Myo-inositol盐酸硫胺素 Thiamine HCl盐酸吡哆醇 Pyridoxine HCl0.10.10.1维生素0.50.50.5烟酸Nicotinic AcidGlycine0.50.50.5氨基酸甘氨酸