食品理化检验维生素的测定详解

1、会计学1食品理化检验维生素的测定详解食品理化检验维生素的测定详解一、概述一、概述 （二）常见维生素的生理功能（二）常见维生素的生理功能沸。沸。（一）脂溶性维生素的主要理化性质（一）脂溶性维生素的主要理化性质常用的测定方法有常用的测定方法有: 薄层色谱法、分光光度法、气相薄层色谱法、分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法等。色谱法、高效液相色谱法等。高效液相色谱法：高效液相色谱法：快速、高效、高灵敏度等优点，快速、高效、高灵敏度等优点， 是我国卫生标准分析方法是我国卫生标准分析方法 （二）脂溶性维生素的测定方法（二）脂溶性维生素的测定方法 却；却；1000100mX水溶性维生素的理化性质水溶性维

2、生素的理化性质维生素维生素B B1 1的测定的测定维生素维生素B B2 2的测定的测定维生素维生素C C的测定的测定 三、水溶性维生素的测定三、水溶性维生素的测定 （一）水溶性维生素的主要理化性质（一）水溶性维生素的主要理化性质 VB VB1 1又叫硫胺素、抗神经炎素又叫硫胺素、抗神经炎素 1 1、食品中、食品中VBVB1 1的存在形式的存在形式 常以游离态存在；常以游离态存在； 复合脂形式存在（磷蛋白）；复合脂形式存在（磷蛋白）； 辅羧酶形式存在辅羧酶形式存在 VBVB1 1在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色的蔬菜和牛乳、蛋黄中比较丰富，的蔬菜和牛乳

3、、蛋黄中比较丰富，动物组织不如植物动物组织不如植物含量丰富。含量丰富。2.VB2.VB1 1的性质的性质标准曲线法：标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。度，在标准曲线上求出浓度。称样三角瓶三角瓶高压水解高压水解盐酸溶液盐酸溶液调调pHpH值值乙酸钠溶液乙酸钠溶液酶解酶解淀粉酶淀粉酶定容定容样品样品热水热水酸性氯化钾酸性氯化钾收集酸性氯化钾定容收集酸性氯化钾定容 净化净化反应瓶编号反应瓶编号标准标准A A瓶瓶标准标准B B瓶瓶

4、样品样品A A瓶瓶样品样品B B瓶瓶加标准液或加标准液或样品液样品液标准液标准液5ml5ml 标准液标准液5ml5ml 样品液样品液5ml5ml 样品液样品液5ml5ml加氢氧化钠加氢氧化钠3ml3ml3ml3ml加碱性铁氰加碱性铁氰化钾化钾3ml3ml3ml3ml加正丁醇加正丁醇10ml10ml10ml10ml10ml10ml10ml10ml 荧光强度测定荧光强度测定(通过荧光分光光度计可以测得通过荧光分光光度计可以测得) 激发波长激发波长365nm365nm；发射波长；发射波长435nm435nm； 激发波狭缝激发波狭缝5nm5nm；发射波狭缝；发射波狭缝5nm5nm。（4 4）方法说明）

5、方法说明 本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适用于不适用于有有吸附吸附硫胺素能力的物质和含有影响硫色素荧光物质的样品硫胺素能力的物质和含有影响硫色素荧光物质的样品； 酸解、水解的目的：酸解、水解的目的：使结合型的使结合型的VBVB1 1成为游离型的成为游离型的； 紫外线会破坏硫色素，所以硫色素形成后，紫外线会破坏硫色素，所以硫色素形成后，反应瓶反应瓶要用要用黑布黑布遮盖或在暗室中进行荧光测定遮盖或在暗室中进行荧光测定，并且要，并且要迅速测定迅速测定；称样三角瓶三角瓶高压水解高压水解盐酸溶液盐酸溶液调调pHpH值值氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液酶解酶解淀粉酶

6、淀粉酶定容定容蛋白酶蛋白酶样品提取液样品提取液具塞试管具塞试管水水双氧水双氧水冰乙酸冰乙酸高锰酸钾高锰酸钾氧化去杂氧化去杂褪色褪色标准液按相同方法进行标准液按相同方法进行样品液样品液水水丙酮丙酮- -乙酸乙酸- -水混合液水混合液水水收集洗脱液收集洗脱液定容定容 * *标准液按相标准液按相同操作进行同操作进行1000100)()(1fmDCmBAX（三）维生素（三）维生素C的测定的测定 （第一法）荧光法（测总抗坏血酸）（第一法）荧光法（测总抗坏血酸）偏磷酸偏磷酸冰醋酸溶液：称取冰醋酸溶液：称取15g偏磷酸，加入偏磷酸，加入40mL冰醋冰醋酸，加水稀释至酸，加水稀释至500mL过滤后，贮存于冰箱

7、中；过滤后，贮存于冰箱中；硫酸：硫酸：0.15mol/L偏磷酸偏磷酸乙酸乙酸硫酸溶液：称取硫酸溶液：称取15g偏磷酸，加入偏磷酸，加入40mL冰醋酸，用冰醋酸，用0.015molL-1硫酸稀释至硫酸稀释至500mL；乙酸钠溶液：称取乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠溶解并稀释至乙酸钠溶解并稀释至1L；硼酸硼酸乙酸钠溶液：称取硼酸乙酸钠溶液：称取硼酸9g，加入，加入35mL乙酸钠溶液乙酸钠溶液，用水稀释至，用水稀释至1000mL；邻苯二胺溶液：称取邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺盐酸盐溶于邻苯二胺盐酸盐溶于100mL水水中；中；抗坏血酸标准溶液：准确称取抗坏血酸标准溶液：准确称取0.500g抗坏血

8、酸溶于偏磷酸抗坏血酸溶于偏磷酸冰醋酸溶液中，定容至冰醋酸溶液中，定容至500mL容量瓶中，吸取上述溶液容量瓶中，吸取上述溶液5mL，再用偏磷酸再用偏磷酸冰醋酸溶液定容至冰醋酸溶液定容至50mL；抗坏血酸标准使用溶液：抗坏血酸标准使用溶液：100g/mL百里酚蓝指示剂百里酚蓝指示剂(麝香草酚蓝麝香草酚蓝)：变色范围：变色范围pH1.2(红红)2.8(黄黄)；活性炭：取活性炭：取50g活性炭加入活性炭加入250mL10%盐酸，加热至沸，减盐酸，加热至沸，减压过滤，用蒸馏水冲洗活性炭，检查滤液中无铁离子为止，于压过滤，用蒸馏水冲洗活性炭，检查滤液中无铁离子为止，于110120烘干。烘干。荧光分光光度

9、计荧光分光光度计或具有或具有350nm及及430nm 波长的波长的荧光计；捣碎机。荧光计；捣碎机。各取各取10mL标准氧化液标准氧化液于于2个个100mL容量瓶中，分别标明容量瓶中，分别标明“标标准准”及及“标准空白标准空白”各取各取10mL试样氧化液试样氧化液于于2个个100mL容量瓶中，分别标明容量瓶中，分别标明“试试样样”及及“试样空白试样空白”于于“标准空白标准空白”及及“试样空白试样空白”中各加中各加5mL硼酸硼酸-乙酸钠溶乙酸钠溶液，液，混合摇动混合摇动15min，用水稀释至，用水稀释至100mL，在，在4冰箱中放冰箱中放置置23小时，即得小时，即得“标准空白标准空白”溶液及溶液及

10、“试样空白试样空白”溶液，溶液，备用。备用。于于“试样试样”及及“标准标准”中各加中各加5mL /L乙酸钠溶液，用水稀乙酸钠溶液，用水稀释至释至100mL,即得即得“试样试样”溶液及溶液及“标准标准”溶液，备用。溶液，备用。标准曲线的制备：标准曲线的制备： 取上述取上述“标准标准”溶液（抗坏血酸含量溶液（抗坏血酸含量10g/mL）0.5、1.0、1.5和和2.0mL标准系列，取双份分别置于标准系列，取双份分别置于10mL带盖试管中，带盖试管中，再用水补充至再用水补充至2.0mL。（平行。（平行2次，做标准曲线）次，做标准曲线） 取中取中“标准空白标准空白”溶液，溶液，“样品空白样品空白”溶液及

11、溶液及 “样品样品”溶溶液各液各2mL，分别置于，分别置于10mL带盖试管中。在暗室中迅速向各试带盖试管中。在暗室中迅速向各试管中加入管中加入5mL邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应35min，于激发光波长，于激发光波长338nm、发射光波长、发射光波长420nm处测定荧光强度。处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应的抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算应的抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算，其直线回归方程供计算时使用。，其直线回归方程供计算时使用。（5）结果计算：）结果计算：式中式中 X-试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g； c-由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度，由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度，g/mL m-试样的质量，试样的质量，g； V-荧光反应所用试样体积，荧光反应所用试样体积，mL； F-试样溶液的稀释倍数。试样溶液的稀释倍数。1000100FmcVX1000100fmpVX沸。沸。（一）脂溶性维生素的主要理化性质（一）脂溶性维生素的主要理化性质1000100mX水溶性维生素的理化性质水溶性维生素的理化性质维生素维生素B B