第十三章分子诊断ppt课件

1、第十二章 分 子 诊 断. 一、分子诊断的概念和特点 概念： 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，经过检测基因构造或其表达程度能否正常，从而对人体安康形状和疾病作出诊断的方法。 传统的诊断：表现型基因型 基 因 诊 断：基因型表现型 逆向诊断.特点特异性强灵敏度高早期诊断性 顺应性强一、分子诊断的概念和特点检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达程度 已明确疾病表型与基因型的关系分子诊断的前提.4二、分子诊断战略直接诊断直接检测致病基因的突变 基因突变类型缺失、点突变、反复、插入等间接诊断运用DNA多态性为遗传标志进展连锁分析，确定待测

2、者能否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断 DNA多态RFLP、VNTR、SNP.DNA多态DNA Polymorphism 群体中每个个体DNA区域中等位基因或片段存在两种或两种以上的方式，对基因功能没有影响，称DNA多态。DNA分析中常用的遗传性多态性标志有3类：1RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标志；2反复序列多态性VNTR：如STR其反复次数在人群中存在变异，构成多态即 VNTR ，为第二代多态性标志；3单碱基多态性SNP：发生在基因组中的单个核苷酸的替代，为第三代多态性标志。二、分子诊断战略.三、分子诊断常用技术核酸分子杂交技术等位基因特异寡核苷酸探针(allel

3、e specific oligonucleotide, ASO)DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RLFP)分析PCR-SSCPDNA测序 DNA芯片技术 .点突变C to T5335G53引物1引物2探针1探针2A等位基因特异寡核苷酸探针ASO . 原理 指DNA序列上发生一个变异后获得或丧失了一限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生变化，在人群中构成两种或两种以上的限制性类型 利用特定限制性识别位点进展基因分析限制性片段长度多态性分析RFLP.RLFP分析法.RFLP分析 优点 分辩率高，无需标志,反复性好，简便

4、快速直观 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型，癌基因分析，遗传病的诊断等。 局限 只能运用突变引起限制性酶切位点改动挑选，检测效率低。. 原理 将经扩增的DNA片段变性构成单链，由于序列不同，单链构象就有差别，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同，经过与规范物的对比，即可检测出有无变异。 优点 检测基因变异，具有操作简便、快速特点，不需特殊设备，适用于大样本挑选。 己广泛运用于检测各种病原体基因的点突变及缺失突变，基因的多态性分析等。PCR/单链构象多态性分析SSCP. PCR-SSCP表示图.DNA测序.DNA自动测序结果举例.DNA芯片技术.四、分子诊断的运用及举例遗传疾病肿瘤感染性疾病判别个体疾病易感性器官移植组织配型法医学中个体识别、亲子鉴定.Mst酶切位点(CCTNAGG)53正常基因53突变基因1.15kb1.35kb镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析GAG GTG 谷Aa缬Aa.+0.2kb1.15kb1.35kb正常人突变携带着患者镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析. Normal Gene Probe与正常 Probe 杂交稳定 Mutation S Gene Probe与异常 S杂交 稳定 镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交.20斑