光学显微镜概述及使用课件

1、光学部分主要构件光学部分包括照明系统和成像系统光学部分主要构件物镜 低倍镜（1 6 ，常用的4 、10 ） 高倍镜（25 63 ，常用的40 ） 油 镜（90 、95 、100 ）目镜（5、6 、8 、10 、12 、15 ）物镜侧面符号的含义10/0.30 表示放大10倍，数值口径为0.3040/0.65 表示放大40倍，数值口径为0.65100/1.25 oil 表示放大100倍，数值口径为1.25，为油镜160/0.17 表示镜筒长度和所需盖玻片的厚度（mm）WD 表示工作距离不同物镜的数值孔径与工作距离（10倍目镜）物镜放大倍数（）总放大倍数（）数值口径工作距离（mm）4400.102

2、5101000.255.6404000.650.610010001.250.14光学显微镜成像原理 光学显微镜是利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像的。AB和眼睛的距离为显微镜的明视距离，标本AB的向经过物镜（L1）后到AB处称谓一个放大倒立的实像，F1为L1的后焦点，当光线传到目镜（L2）时，在AB处AB被放大成一个直立的虚像，然后传递到视网膜上，标本AB就被放大了。人眼看到的是AB被放大后的虚像，其与原样品的方向相反。观察的物体A B观察点目镜L2中间所成的实像AB物镜 L1放大的虚像AB数值孔径（NA，镜口率）：光线投射到物镜上的最大开口角度一半的正弦乘上标本与物镜间介质的折射率的乘积。

3、 NA=nsin/2 n为介质的折射率， 为镜口角。分辨率：能分辨被检物体细微结构最小间隔的能力。 D=0.61/NA 为波长。数值孔径越高，分辨率越高。放大率：最终成像大小与原物体大小的比值。总放大倍数物镜的放大倍数目镜的放大倍数物镜的镜口角=AOB光学显微镜成像原理其它光学显微镜倒置显微镜(invertcd m1Lfoscope) 是普通光学显微镜的一个类型，倒置显微镜有几个特点不同于普通生物显微镜。 1） 透射光倒置显微镜的光源和聚光器位于载物台的上方，照明光源自上方向下照射； 2） 物镜安装在载物台的下方，向上对焦； 3） 物镜、聚光镜以及其他光学具组均适用于长焦距观察； 4） 在医学

4、、生物学领域中适合于观察培养瓶中贴壁生长的细胞或浮游于培养液中的细胞。 XDS倒置生物显微镜其它光学显微镜 体视显微镜又称实体显微镜。它在观察物体时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像清晰和宽阔，又具有长工作距离，并可根据观察物的特点选用不同的反射和透射光照明，是适用范围非常广泛的常规显镜。不仅可作生物解，作观察分析，由于本显微镜具有较高的分辨率及大视场范围的清晰，因此还可作电子工业和精密机械工业零件装配和检验，农业上的种子检查等。MODELZ45E体视显微镜其它光学显微镜 荧光显微镜是荧光显微术的基本装置。荧光显微术是利用一定波长的光（通常是波长短的紫外光和蓝紫光）照射被检样品，激发荧光

5、物质发出可见的荧光。通过物镜和目镜的成像、放大，以供检视和拍摄。荧光显微镜具特殊光源，提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。视场中所见的像，主要是样品的荧光映像。 根据光线对标本照射方式不同，荧光显微镜可分为透射式和落射式两种。OLYMPUS1X51荧光显微镜暗视场显微镜 暗视场显微镜又叫暗视野显微镜。它与普通的显微镜的主要区别是照明方式不同。它用强而窄的斜射光束照射标本，而又不让光束进入物镜。在没有光进入物镜时，视场是黑暗的，故叫暗视场显微镜。 暗视场显微镜能够观察到 0.004 m以上的微粒存在。普通显微镜看不见的微粒，它可以看见。但它只能看到物体的外表轮廓和运动状态，而不能辨

6、认其内部结构。相差显微镜 相差显微镜是一种将光线通过透明标本细节时所产生的光程差（即相位差）转化为光强差的特种显微镜。 相差显微镜与普通光学显微镜的基本结构是相同的，所不同的是它具有四部分特殊结构：即环状光阑、相板、合轴调节望远镜及绿色滤光片。光学显微镜的使用规程一、实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿 5 cm左右。二、打开光源开关，调节光强到合适大小。三、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台12 cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至最大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。四、将所要观

7、察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片。光学显微镜的使用规程五、先用低倍镜观察（物镜4X、10X、目镜10 x）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近玻片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合（要养成睁开双眼用显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图），并转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。六、如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好

8、相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。光学显微镜的使用规程七、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。八、在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。九、观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至最大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤（特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净），检查处理完毕后即

9、可装箱。油镜的使用 100物镜是油浸物镜。使用前必需在镜头与盖玻片间加浸油。 油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不清。若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），则可减少光线折射，使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，提高分辨率，使物象明亮清晰。 在油镜观察结束后，切记将镜头和其他沾有油污的部件清擦净。光学显微镜的维护一 、必须熟练掌握并严格执行使用规程。二、取送显微镜时一定要一手握住弯臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。取送显微镜时要轻拿轻放。三、观察时，不能随便移动显微镜的位置。四、凡是显微镜的光学部分，只能用特殊的擦镜头纸擦拭，不能乱用他物擦拭，更不能用手指触摸透镜，以免汗液玷污透镜。五、保持显微镜的干燥、清洁，避免灰尘、水及化学试剂的玷污。六、转换物镜镜头时，不要搬动物镜镜头，只能转动转换器。光学显微镜的维护七、切勿随意转动调焦手轮。使用微动调焦旋钮时，用力要轻，转动要慢，转不