2022年分子生物学农业类大学考试复习重点

1、学习好资料 欢迎下载基因与基因组 基因定义 : 转录功能单位，是编码一种可扩散产物的一段DNA序列，其产物可以是蛋白质或 RNA。一个完整的基因应该由两部分组成，即编码区和调控区。基因组 : 一种生物染色体内全部遗传物质的总和，包括构成基因和基因之间区域的所有 DNA。表示方式： 基因组以及基因一般以DNA的长度和序列表示。病毒基因组结构特点： 与细菌相比较， 病毒的基因组很小， 所含遗传信息量较 小，只能编码少数的蛋白质。 病毒基因组由 DNA或 RNA组成。常有基因重叠现象。基因组的大部分序列用来编码蛋白质，基因之间间隔序列非常短， 非编码区只占基因组的一小部分。 功能上相关的基因往往集中

2、成簇，在基因组特定部位构成一个功能单元或转录单元。噬菌体的基因是连续的。细菌基因组结构特点： 1）基因组通常仅由一条环状双链 DNA分子组成。 2）只有 一个复制起始点。 3）有操纵子的结构。 4）编码蛋白质的结构基因是单拷贝的，但 rRNA基因往往是多拷贝的。 5）非编码的 DNA所占比例少，类似病毒基因组。6）基因组 DNA具有多种调控区，如复制起始区、转录启动子等特殊序列。7）与真核生物类似，具有可移动的DNA序列。大肠杆菌染色体基因组特点：高效的遗传信息利用率 双链 DNA的编码功能；多基因聚集排列的操纵子结构形式；染色体基因组的拷贝数；质粒：是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，工构

3、建的质粒作为载体。用途： 在基因工程中，常用人真核生物基因组特点： 1）基因组的分子量大。 2）真核生物细胞往往有很多染色 体，一般呈线状。 3）细胞核 DNA与蛋白质稳定地结合成染色质的复杂结构。4）存在核膜， 细胞被分隔成细胞核和细胞质，基因表达中， 转录和翻译在时间和空间上是分隔不偶联的。 5）基因组的大量序列是非编码序列， 有大量重复序列。 6）真核生物的蛋白质基因往往是单拷贝存在，转录产物是单顺反子 mRNA。7）存在一些可移动的 DNA序列。 8）绝大多数真核生物基因含有内含子，因而基因编码区是不连续的。 9）真核生物基因内部也可能含有大量的重复序列。rRNA基因家族： 真核生物

4、rRNA基因家族串联重复排列在一长段 DNA内。 特点：在个体内，这些重复的 rRNA基因转录区域几乎相同，但非转录间隔区可能有变化；rRNA基因簇有许多转录单元。（转录单元间为不转录的间隔区， 称间隔序列。）基因家族即为 多基因家族，一组功能类似、结构具有同源性的基因称为基因家族。假基因： 在多基因家族中， 某些成员并不产生有功能的基因产物，这些基因称为假基因。假基因是没有内含子的，在这个过程中，可能同时会发生缺失，倒位或点突变等变化，从而使假基因不能表达。基因的重复序列： 在人细胞基因组有许多DNA序列并不转录成 mRNA用于指导蛋白质合成。 研究发现这些非编码序列往往都是大量的重复序列，

5、或集中成簇， 或分散于基因之间。学习好资料 欢迎下载真核生物基因组中 4 种类型的 DNA序列： 1）高度重复序列（几百个到几百万个拷贝）；2）中度重复序列（ 10 到几百个拷贝）；3） 低度重复序列（ 10个拷贝）4）不重复的唯一序列（只有一个拷贝）内含子： 在初始转录产物 hnRNA加工产生成熟的 mRNA时，被切除的非编码序列称为内含子。 外显子： 在成熟的 mRNA或蛋白质中存在的相应序列称为外显子。外显子的功能： 不仅仅是编码蛋白质，而且还可以构成蛋白质的结构域的形成，使蛋白质的二级、三级、四级结构能够形成。内含子功能： 如果缺乏内含子，真核生物基因将失去活性。内含子特点：（1）含有

6、可阅读框架（ ORF）：内含子的 ORF可能编码酶或蛋白质，其中包括逆转录酶、 成熟酶。 蛋白质的有些阅读框架可能独自存在于内部，也可能与上游外显子合框。（2）含有各种剪接信号码： 不同的细胞选择不同的剪接点，将初始转录产物进行加工。外显子的选择性加工形成不同的 mRNA。内含子编码的成熟酶直接参与内含子本身的剪接功能。 （3）对基因表达有影响： 多个水平上施加影响。 内含子中的增强子序列增加了基因转录的起始反应。有的基因表达除了需要增强子，还需要内含子的一定序列。蛋白质结构域： 多肽链某些区域形成规则的二级结构，然后与相邻二级结构聚集成超二级结构 . 蛋白质分子内多肽链往往合成两个以上相对独

7、立结构，即结构域。线粒体基因组特点和性质：mtDNA与质粒 DNA一样，也是双链的超螺旋环状分子mtDNA具有自我复制和转录的能力。mtDNA复制和转录过程所需要的酶类、蛋白质都是由核基因编码的（所以其自主性受到一定限制）。mtDNA转录所需 的聚合酶来自核基因。mtDNA的翻译在线粒体核糖体上进行。线粒体DNA的双重遗传控制：另一特点是参与呼吸链的一些酶成份是受双重遗传控制的，即部份亚基为细胞核基因所编码，另一些亚基则是mtDNA编码的。遗传学图谱： 也称连锁图， 是以已知性状的基因座位和多种分子标记座位，经过计算连锁的遗传标记之间的重组频率，状的基因定位于染色体的特定位置。来确定它们之间的

8、相对距离， 将编码该性物理图谱： 利用限制性内切酶将染色体切成片段，再根据重叠序列确定片段间连接顺序，以及遗传标志之间物理距离的图谱。结构基因组学： 基因组学的一个分支， 以生物的全基因组为研究对象，以基因作图、序列分析、基因鉴定等为主要内容，以建立高分辩率的生物遗传学图谱、物理图谱、转录图谱等为主要目的功能基因组学： 利用结构基因组学提供的信息，算机分析，全面系统地分析全部基因的功能。以大规模的实验方法及统计与计学习好资料 欢迎下载蛋白质组学： 蛋白质组是动态的、 具有时空性和可调节性， 反映特定时空内基因表达时间、表达量、蛋白质水平上的修饰、亚细胞转运和分布等。这一内容的研究一般称为蛋白质

9、组学。DNA复制DNA复制的特点：半保留复制： 复制过程中首先两条链间氢键破裂并使双链解旋分开，以每条链为模板，按碱基互补配对原则(A:T ，G:C)，由 DNA聚合酶催化合成新的互补链， 由一条链成为互补的两条链， 新形成的两个 DNA分子与原 来的 DNA分子的碱基序列完全相同。 在此过程中， 每个子代 DNA的一条链来自 亲代 DNA，另一条链则是新合成的。 半不连续复制： 这种前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物是普遍存在的，称为DNA合成的半不连续复制。参与 DNA复制的主要物质及功能： 模板 DNA，二磷酸核苷酸 (dATP，dGTP，dCTP，dTTP)是合成原料。 引发酶

10、 (Primase) 和引物（ Primer ）引物在合成以后以氢键和模板结合；引发酶催化引物RNA分子的合成。 DNA拓扑异构酶，拓扑异构酶对 DNA超螺旋结构变化发挥了巨大的作用。解链（旋）酶， 染色体 DNA在复制起始点必须解开双螺旋， 解链酶可以促使 链。单链 DNA结合蛋白 ，防止其重新配对形成双链DNA在复制叉处打开双 DNA或被核酸酶降解。DNA聚合酶 ，以 dNTP为底物，催化合成 DNA的一类酶。 DNA连接酶 ，它是一种封闭 DNA链上缺口酶，借助 ATP或 NAD水解提供的能量催化 DNA链的 5-P与另一 DNA链的 3-OH生成磷酸二酯键。DNA聚合酶的种类及功能：

11、(1) 大肠杆菌 DNA聚合酶： 53聚合活性； 3 5外切酶活性，校对作用；5 3外切酶活性 切除修复作用。(2) 大肠杆菌 DNA聚合酶： 1) 聚合作用：该酶催化 DNA的聚合，但是对模板有特殊的要求。 2) 该酶也具有 3 5 外切酶活性，但无 5 3 外切酶活性。（3）大肠杆菌 DNA聚合酶： 1）聚合作用：催化 dNTP参入 DNA链的速率最快的，是在 DNA复制过程中起主要作用的聚合酶。2） 5 3DNA聚合酶活性、35外切核酸酶活性，不具有 5 3外切核酸酶活性。 (4)T4-DNA聚合酶：它无 5 3 外切酶活性 ; 它需要一条有引物的单链 DNA作模板。复制的过程： 1.

12、复制的引发， 包括 DNA复制起点双链解开，通过转录激活合成RNA分子，RNA引物的合成，DNA聚合酶将第一个脱氧核苷酸加到引物RNA3-OH末端。2. DNA链的延伸 : 5 个阶段， 1）双螺旋 DNA不断解螺旋； 2）前导链 DNA合成；3）后滞链模板不断引发，合成新的RNA产物； 4）在 RNA引物的基础上由 DNA聚合酶合成冈崎片段； 5）除去 RNA引物，填补空隙，冈崎片段连接成后滞链； 3. 和 DNA复制的终止： 滞后链合成后 , 去掉 5端 RNA引物 ,DNApol催化填补空隙 (5 3 ),DNA 连接酶连接复制片段 3-OH与 5P DNA复制中真实性的保持： 1、DN

13、A聚合酶对碱基的选择作用；2、DNA聚合酶对底物的识别作用；3、RNA引物 ；4、3 5外切活性的校正阅读端粒：是一段 DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，是真核生物染色体线性 DNA分子末端的结构。 端粒维持染色体稳定性： 复制终止时， 染色体线性 DNA末端学习好资料 欢迎下载确有可能缩短，但通过端粒的合成可以补偿这种由除去引物引起的末端缩短。维持染色体的稳定性；维持 DNA复制的完整性。DNA复制模型： 1. “ ” 型复制；滚动环复制； . 形复制DNA损伤的修复： 1. 直接修复； 2. 切除修复； 3. 重组修复； 4.SOS修复 基因转录一般原则： 转录只对基因组或 DNA分子中

14、有选择的部分把信息传递给转录产物 RNA。其选择性含义是：基因组全部DNA序列中的一部分，即基因编码区被转录；基因组内只有一部分基因在某一类型细胞中或某一发育阶段中被转录。RNA合成底物：4 种 5核糖核苷三磷酸 （4NTP），即 5 ATP，GTP，CTP，UTP。比较原核生物与真核生物基因转录的差异？原核生物只有一种 RNA聚合酶，真核生物有三种以上聚合酶， 负责不同基因类型转录、合成不同类型RNA。转录产物不同。真核生物的初始产物很长，包括内含子序列，成熟 mRNA只占其中的小部分，而原核生物初始产物大多数为编码序列，与蛋白质序列成线性关系。真核生物转录产物经历加工、修饰，即内含子剪接、

15、 5端帽化和 3多聚化。这是真核生物初始转录产物的成熟过程，而原核生物初始转录产物直接是成熟的mRNA，很少需要成熟过程。 原核生物mRNA是多顺反子，大多真核生物 mRNA是单顺反子结构。 原核生物转录产物直接可以成为蛋白质合成的模板，因而一边转录合成mRNA，一边翻译合成蛋白质。反义链： 在 DNA双链中，被 RNA聚合酶“ 阅读” 、 含有合成 RNA分子信息的这条链称为“ 模板链” 或模板，或称反义链。意义链： 与模板链互补的是非模板原核生物基因转录过程： （1）识别启动子 ，RNA聚合酶结合于双链 DNA，寻找基因的调控区域，识别启动子。 （2）起始 ，是 RNA 聚合酶停泊在启动子

16、上，从局部序列解旋、 形成转录泡开始， 到合成转录产物中最初几个核苷酸磷酸二酯键的形成这一复杂过程。 （3）延伸 , RNA聚合酶沿着双链 DNA运动，随着 RNA合成逐渐延伸，转录泡恢复后方的DNA双螺旋结构。（4）终止， RNA聚合酶识别转录终止信号，停止合成磷酸二酯键，转录复合物解体，释放转录产物。原核生物 RNA聚合酶主要功能： 1）识别和结合启动子； 2）解开 DNA双螺旋，恢复双螺旋； 3）能与分离的 DNA链以及转录产物RNA链结合； 4）选择正确的底物 NTP，按 5 3方向催化合成 RNA链； 5）沿 DNA双链作单向运动 6）识别转录的终止信号； 7）和转录调节因子相互作用

17、，以调节转录速度；8）在受阻遏情况下进行自我调整，借助辅助因子恢复 RNA合成。RNA聚合酶的全酶 ：类亚基： ，?，?， 。含有所有这类亚基的酶称为RNA聚合酶全酶，分子量465KD。RNA聚合酶的全酶为 2? ， 2?部分称为 核心酶。学习好资料 欢迎下载启动子：基因 DNA中一段特定核苷酸序列， 这段序列是与启动基因表达相关的顺 式作用元件， 是 RNA聚合酶在转录起始时对模板 DNA的识别位点和结合位点， 是 转录的开始部位。 原核生物启动子有两类： 一是 RNA聚合酶能直接识别、 结合的 启动子，称为 核心启动子 。二是 RNA聚合酶结合要有 蛋白质辅助因子 存在，启动 子除了有 R

18、NA聚合酶结合的核心启动子，还有蛋白质辅助因子结合作用位点。转录单位： 从启动子到终止子称为转录单位。 因子对 RNA聚合酶与 DNA结合的影响： 因子象转录辅助因子； 使 RNA聚合酶 全酶明显地减少对松散位点的亲和性， 降低了 RNA聚合酶对非特异性位点结合能力。使 RNA聚合酶和启动子的结合非常紧密，机 DNA的结合常数平均增加 1000 倍。它们的结合常数比核心酶对随原核生物基因启动子的转录起始、延伸和终止阶段是如何完成的？起始识别， RNA聚合酶与启动子结合，形成封闭性起始复合物；从封闭性转变为开放性起始复合物，酶结合在-10 序列，启动子活化，并解开双链结构，暴露模板链； 形成 D

19、NA酶底物 NTP的三元起始复合物，酶移动到转录起始 位点，在起始位点加上开头的几个核苷三磷酸。真核生物基因转录的一般规律： （1）典型的真核基因转录单元为单顺反子。（2）真核生物的 RNA聚合酶高度分工。（3）转录的正常进行，除了 RNA聚合酶 外，还有许多蛋白质因子的参与。 （4）真核基因 DNA的顺式作用元件比较复杂。（5）真核基因的转录调控以正调控为主。比较真核生物与原核生物RNA聚合酶的异同：所有真核 RNA聚合酶的结构均比原核 RNA聚合酶复杂得多。真核生物的 RNA聚合酶高度分工。核内有种RNA聚合酶。真核 RNA聚合酶自身不能结合启动子， 需要各种转录因子参与。基因调控区组成：

20、 启动子区域和各种调控元件。II 启动子的组成： 转录起始位点（ Inr) 、基本启动子、转录起始位点下游元件、转录起始位点上游元件。功能：可能提供 RNA pol 识别；当有的基因缺少 TATA框时，可能由 Inr 来替代它的作用；无论 TATA是否存在， Inr 对于启动子的强度和起始位点的选择都是十分重要的。5端帽子的功能： 1）对 mRNA保护作用； 2）使 mRNA具有可翻译能力； 3）5端帽子结构有利于成熟的mRNA从细胞核输送到细胞质；polyA 尾巴的功能： 1. 与 mRNA从细胞核转送到细胞质有关。2. 稳定 mRNA结构，保持生物半衰期。 3. 与真核 mRNA的翻译效率

21、有关： 4. 缺失可抑制体外翻译的起始， 5. 含 poly(A) 的 mRNA 失去 poly(A) 可减弱其翻译。学习好资料 欢迎下载蛋白质的翻译遗传密码的简并性 ：由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并性。密码子的摆动： tRNA识别密码子的数目由其反密码子5，端第一位碱基性质决定。反密码子第一位如是 A或C，可识别一种密码子； 第一位如是 G或U，可识别两种 密码子；第一位是 I ，则可识别三种密码子。这种现象称为密码子的摆动。mRNA密码子与氨基酸的关系： mRNA密码子是通过识别tRNA的反密码子来规定氨基酸的顺序，而不是 mRNA密码子直接识别 tRNA携带的氨基酸蛋白质

22、的生物合成包括步骤：成多肽链的折叠和加工。括氨基酸活化，肽链的起始、伸长、终止以及新合原核生物蛋白质合成的起始步骤：1) 30S 核糖体小亚基与起始因子 IF 1 和IF-3 相结合，诱发模板 mRNA 与小亚基结合； 2) 由 30S 小亚基、起始因子IF 1 和 IF-3 及 模 板 mRNA 所 组 成 的 复 合 物 立 即 与 GTPIF-2 及fMet-tRNAfMet 相结合。反密码子与密码子配对。3) 上述六组分复合物再与50S 大亚基结合，水解 GTP 生成并释放 GDP 和 Pi 。释放三个起始因子。原核和真核生物的翻译起始反应： 真核生物蛋白质生物合成起始机制与原核生物基

23、本相同， 差异主要是核糖体较大， 较多起始因子参与， 其 mRNA具有帽子结构。肽链合成的延伸过程 ：1）后续 AA-tRNA与核糖体结合； 2）肽键形成； 3）移位氨基酸侧链的共价修饰主要类型：磷酸化、糖基化、甲基化、乙基化、羟基化等。蛋白质前体的共价修饰的主要类型： 1. 肽链 N端残基 fMet 或 Met 的切除；2. 二 硫键的形成； 3 特定氨基酸侧链的共价修饰； 4 切除新生肽链中的非功能片段蛋白质转运 分两大类 : 若某个蛋白质的合成和转运是同时发生的，则属于翻译-转运同步机制 ; 若蛋白质从核糖体上释放后才发生转运，则属于翻译后转运机制。这两种转运方式都涉及蛋白质分子内特定区

24、域与细胞膜结构的相互关系。基因表达与调控细菌基因表达的主要形式 因的转录。: 操纵子模式，一个调控区域控制连锁在一起的多个基基因表达调控主要表现 在: 转录水平上的调控；转录后水平上的调控转录后水平上的调控包括：mRNA加工成熟水平上的调控；翻译水平上的调控基因调控的系统 是多样的，不同生物使用不同信号来指挥基因调控。 原核生物中 ，营养状况和环境因素对基因表达起着举足轻重影响。真核生物中 ，激素水平和发育阶段是基因表达调控主要手段，营养状况和环境因素影响力大为下降。学习好资料 欢迎下载操纵子： 细菌的基因组 (genome)中，往往相关的基因聚集、串连在一起，形成一 个基因簇，它们编码同一代

25、谢途径或相关途径中不同的酶，它们是一个多顺反子，共同表达，共同调控，构成一个表达和调控的单元， 这种单元称为操纵子。结构： 一个操纵子包括一个上游的调控区域和一个以上的结构基因。调控区 域在不同的操纵子中有特征性差异，一般包含启动子和操纵基。乳糖操纵子的功能 是在正、负两个调控体系的协调作用下实现的。真核生物基因表达调控 7步骤： 染色体和染色质水平上的活化。转录水平上 的调控。包括基因的开、闭，转录活性水平的高、低等。 RNA加工水平的调 控。如初始转录产物的活化、 修饰、选择性剪接等。 转录后加工产物的调控。如mRNA从细胞核向细胞质转运过程受到的调控等。翻译的控制。 如选择哪种 mRNA

26、 提呈给核糖体翻译， 包括翻译量的控制等。 蛋白质合成后的的调控。 选 择性地被激活或失活， 蛋白质水平上的剪切、 活性水平和降解的控制。 mRNA 的选择性降解的调控。是基因表达调控的另一重要方面。基因转录的顺式调控元件：1）按照功能分为启动子、增强子、转座子、沉默子。2）按照调控水平分为基础转录水平的顺式调控元件，如启动子；特异诱导高 效表达的顺式调控元件，如增强子。基因转录的反式作用： 一种基因的蛋白质产物， 能影响位于基因组另一条染色体 上的（或基因组别处的）其他基因的活性，这种作用叫做反式作用。反式作用因子： 与这种反式作用的特定因子叫做反式作用因子，一般指的是蛋白质，它能够通过同顺

27、式调控元件（DNA）之间的相互作用而影响基因的表达。转录因子构成： DNA结合域和转录激活域 反式作用因子的 DNA结合域的主要类型： 1） 螺旋 - 转角- 螺旋；2） 锌指结构； 3）亮氨酸拉链； 4） 螺旋 - 环- 螺旋真核基因转录水平的调控：需要顺式调控因子及反式作用因子之间的相互作用。真核生物 基因采用正调控模式的必要性和优越性体现：特异性、 经济性、 严谨性原核生物基因采用负调控模式的必要性与优越性体现在：原核生物基因组小 , 基因数量少，生命繁殖快。所以一般用一种调节蛋白调节一组功能相关的基因 操纵子 ) 。一开俱开 , 一关俱关 , 减少不必要的环节。即使调节蛋白失活 统可照

28、样合成。而不会使细胞因缺乏该酶系统而造成致命的后果。( 即 , 酶系原核生物与真核生物基因的表达调控机制有惊人的相似性，体现在什么方面？它们有共同的起源与分子基础；在调控机理上， 都具有以下形式的互作： 核酸分子间的互作， 核酸与蛋白质分子间的互作，蛋白质分子间的互作； 在调控层次上，都具有以下水平的调控：转录水平，转录后水平，翻译水平，翻译后水平。学习好资料 欢迎下载分子生物学研究方法基因工程 ：在体外将核酸分子插入病毒， 质粒或其他载体分子， 构成遗传物质的新结合，使之进入新宿主细胞内，并获得持续稳定增值能力和表达。内容 : 包括 DNA操作技术，基因克隆，表达分析技术，蛋白质组学，单核苷

29、酸多态性分析等。特征：这种跨越天然物种屏障， 把来自任何生物基因至于毫无亲缘关系的新的宿主生物细胞之中的能力，是基因工程技术区别于其他技术根本特征。分子生物学研究的三大主要成就：1）20 世纪确定遗传物质的携带者、即基因的分子载体是 DNA而不是蛋白质 . 2）20 年代提出 DNA分子双螺旋模型和半保留复制机制，解决了基因自我复制和世代交替问题。 3 ）5060 年代提出中心法则和操纵子学说，成功破译遗传密码，阐明了遗传信息的流动与表达机制。重组 DNA的核心：用限制性内切核酸酶和 连接。DNA连接酶对 DNA分子进行体外切割与限制性内切酶： 是识别 DNA上的特定碱基序列并从这个位点切开

30、DNA分子。载体： 具备自主复制能力的 DNA分子核酸凝胶电泳优点： 是一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要试验手段，也是现在通用的许多分子生物学研究方法。原理： DNA分子带负电荷，在电场中受到电荷效应、分子筛效应向正极移动过程 中，因 DNA分子的大小及构象差别而呈现迁移位置上的差异，对于线形 DNA 分子，其电场中的迁移率与其相对分子质量的对数值成反比，电泳时加溴化乙锭，其与 DNA结合形成一种荧光络合物，在254365 nm紫外光照射下可产生桔红色的荧光，可用于检测DNA（此法可观察到凝胶中2 ng 的 DNA）DNA迁移速率影响因素： 1、DNA的分子大小及构型；

31、2、琼脂糖浓度； 3、DNA分 子的构象； 4、电源电压； 5、嵌入染料的存在； 6、离子强度影响常用的电泳缓冲液： 乙酸，磷酸，硼酸，碱性缓冲液，甘氨酸。琼脂糖凝胶中 DNA检测加入溴化乙锭的原因：加入溴化乙锭燃料对核酸分子进行染色，快捷的检测出 DNA的谱带部位。 注意事项： 1. 琼脂糖融化时，档位不宜太高。 2. 制胶和加样过程中要防治气泡的产生。3. EB 具有强诱变性，可致癌。必须戴手套操作，严格注意防护。4. 加样时， Tip 头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁， 否则样品渗漏或 DNA带型不整齐。 5. 电源接通时，应核实凝胶的方向是否正确。6. 电泳仪有电压显示，并不一定

32、标志电泳槽已接通，应观察电极气泡出现情况。 负极的气泡比正极多一倍， 表示电泳已开始。7 溴化乙锭可插入到 DNA分子的双链中， 在紫外光的照射下， 插入溴化乙锭的 DNA呈橙红色荧光，所以溴化乙锭可以作为荧光指示剂指示 DNA含量和位置。细菌转化：指一种细菌菌株由于捕获了来自供体菌株的 遗传改变的过程。 方法： 氯化钙转化法和电极法。DNA而导致性状特性发生学习好资料 欢迎下载氯化钙法转化原理： 转化是将外源 DNA 分子导入到受体细胞，使之获得新的遗传特性的一种方法。转化所用的受体细胞一般是限制 - 修饰系统缺陷变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶（ R- ， M- ）。将对数生长期的细菌

33、（受体细胞）经理化方法处理后， 细胞膜、的通透性发生暂时性改变， 成为能允许外源 DNA 分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的 DNA 分子通过复制和表达实现信息的转移，使受体细胞具有了新的遗传性状。 将经过转化的细胞在筛选培养基上培养，即可筛选出转化子（带有异源 DNA 分子的细胞）TaqDNA聚合酶的特性： 切掉结合在靶 DNA中部的 TapMan探针序列，从而使两个 荧光基团被释放出来，解除了荧光猝灭的束缚。实时荧光定量 PCR的原理：利用带荧光检查的PCR仪对整个 PCR过程中扩增 DNA的积累速率绘制动态变化图， 从而消除了在测定终端产物丰度是有较大变异数的 问题。过程：反应在带透明

34、盖的塑料小管中进行，激发光可以直接透过管盖，是其中的荧光探针被激发。 荧光探针事先混合在PCR反应液体中， 只有与 DNA结合后才能够被激发出荧光。 随着新和成的 DNA片段的增加， 结合到 DNA上的荧光探 针，即被激发产生的荧光相应增加。实时荧光定量 PCR中的荧光化学物有 ：TaqMan 荧光探针、 SYBR 荧光染料TaqMan荧光探针的三个要素： 一端的短波长荧光基团（菱形） ，一段目的 DNA特 异的碱基序列和另一端的长波长荧光基团（小圆型）。基因组 DNA文库和 cDNA文库在构建原理和用途上的主要区别是什么？基因组 DNA是把某种生物的基因组DNA切成适当大小， 分别与载体结合

35、， 导入微生物细胞形成克隆。 应用：主要用于基因组作图、 测序和克隆序列的对比。 cDNA文库是以 mRNA为模版反转录而成的序列，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增。应用：筛P1 源人选目的基因、大规模测序、金银芯片杂交等功能基因组学的研究。基因组文库常用的克隆载体：入噬菌体，科斯质粒，细菌人工染色体，工染色体， 酵母人工染色体。 这些载体的优点： 入噬菌体： 简单高效， 易于筛选；其余可以插入大片 DNA。基因克隆的主要方法：1.RACE技术， 用于已知 cDNA序列的基础上克隆 5端和 3端缺失的序列； 2，应用 cDNA差示分

36、析法克隆基因，没有任何探针的情况下，通过降低 cDNA群体复杂性和更换 cDAN两端接头方法特异性的扩增目的基因片段。3.Gateway 大规模克隆技术， 用于实现不需要传统酶切连接过程的基因快速克隆和载体间平行转移，为大规模克隆基因组注视的可译框架提供保障；4，基因的图位克隆法，用于分离未知形状目的基因。检测核酸和蛋白质相对分子量的方法：核酸凝胶电泳、蛋白质 SDS常用的植物总 RNA抽提的方法： CTBA法，Licl 法， Trizol 法学习好资料 欢迎下载基因文库 : 一个生物体的基因组 DNA用限制性内切酶部分酶切后，将酶切片段插入到载体 DNA分子中，所有这些插入了基因组 DNA片段的载体分子的集合体， 将包含这个生物体的整个基因组。疫筛选法筛选方法： 1. 核酸杂交法 ;2.PCR 筛选法 ;3. 免蛋白质组学：是蛋白质和基因组研究在形成和内容两方面的完美组合。研究对象：某遗物种、个体、器官、组织或细胞在特定条件、特定时间所表达的全部蛋白质图谱。 主要技术： 双向电泳技术、蛋白质印迹法、蛋白质的质谱分析技术SNP作为第三代遗传标记的优点：式，具有很高的遗传稳定性。S