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文档简介

1、细胞毒理学实验小鼠肝细胞原代培养山东师范大学生命科学学院实验目的掌握原代培养的一般方法和步骤以及培养过程中的无菌操作技术。熟悉原代培养细胞的观察方法。实验原理直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事培养工作人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同原代培养分为组织块培养法和单层细胞培养法。实验用品仪器：培养箱（调整至37）、培养皿、解剖器械、倒置相差显微镜。材料：胎鼠或新生小鼠。试剂：DMEM培养基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、75%消毒酒精。实验步骤实验前将无血清培养基和含血清培养基分装并进行温育（37）。以温度计实际显示温

2、度为准！实验步骤将胎鼠或新生小鼠引颈处死，置于75%消毒酒精浸泡23s，带入超净工作台。实验步骤将小鼠腹面朝上，置于灭菌的大培养皿中。实验步骤取出灭菌的解剖器械，解剖小鼠，取出肝脏。实验步骤将小鼠肝脏置于灭菌的大培养皿皿盖上，剔除脂肪和结缔组织，并用无血清培养基反复冲洗3次，每次2-3ml。实验步骤用手术剪将肝脏剪成小块（1mm3）,无血清培养基冲洗三次。实验步骤将组织转移到一次性培养皿中，排列贴附于皿底。组织块间间隔约0.5-1cm,静置数分钟。实验步骤待组织粘附后，缓缓加入含血清的培养基，切勿将组织块冲起，做好标记，转入培养箱培养，镜检观察。实验步骤：9、胰酶消化法培养取出的剩余肝组织充分

3、剪碎后，用剪过的蓝枪头将其转入离心管，1000rpm离心5min，弃上清，根据组织量的多少加入0.25%胰蛋白酶1-1.5ml。37水浴消化约10-15min，每间隔5min，振荡一次，促使细胞分离。待组织变得疏松，略发白时，加入1ml含血清的DMEM培养基，终止胰蛋白酶的消化作用。1000rpm离心10min,加入含血清DMEM培养基3ml，充分吹打，混匀。细胞悬液过细胞筛网(100um孔径)到一次性培养皿中(中皿)，标记并转入二氧化碳培养箱培养，2-3天后镜检观察。实验完毕，将培养基瓶口迅速过酒精灯火焰消毒，拧紧后，封口膜密封。拿出超净台，放入冰箱。实验后，请将解剖器械、离心管冲洗干净（自来水-去离子水-三蒸水），放入烘箱烘干，超净工作台内擦拭干净，酒精喷洒消毒，并将酒精擦干净，打开紫外灯灭菌。各个实验小组的同学负责将垃圾带走，值日生打扫实验室卫生。实验步骤：10、实验后的整理工作实验步骤：11、镜检观察电源开关光亮度调节目镜光源物镜粗/细准焦螺旋环状光阑实验报告总结原代培养的实验步骤以及在操作过程中需要注意的问题。绘图表示所观察到的实验结果，并对其

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