肠杆菌科细菌介绍课件

1、Company Logo肠杆菌科细菌主讲：戈红雨 2013-1-28Company Logo革兰氏阴性菌（Gram-negative）革兰氏阴性菌泛指革兰氏染色反应呈红色的细菌。在革兰氏染色实验中，首先添加了结晶紫（crystal violet），再添入另一种复染染料（通常使用番红（safranin），从而将所有的革兰氏阴性菌染成红色或粉色。通过这种测试我们可以区分两种细胞壁结构不同的细菌。革兰氏阳性菌在反应后的除色溶液中将呈现龙胆紫的颜色。革兰氏阴性菌细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类含量高。当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁通透性增强，使结晶紫极易被乙醇抽出而 脱色；再度染上复染液番红的时候，

2、便呈现红色了。Company LogoCompany LogoCompany Logo革兰氏阴性菌的病原能力通常与其细胞壁组成相关，具体说来有脂多糖（lipopolysaccharide，又称为LPS或者内毒素（endotoxin）层。在人体中，LPS可以激发一种固有免疫反应（innate immune response）这种反应是通过细胞素制造和免疫系统活化等来描述其特征的。比如，红肿就是细胞素产生并释放导致的。因为脂多糖在革兰氏阴性菌的细胞墙表皮，所以大多数或旧型抗生素都不能有效抑制此类细菌。 Company Logo周质Company Logo胞质膜（Cytoplasmic membra

3、ne）: 存在于细胞质中各膜结合细胞器中的膜，包括核膜、内质网膜、高尔基体膜、溶酶体膜、线粒体膜、叶绿体膜、过氧化物酶体膜等。 肽聚糖薄层，比革兰氏阳性菌要薄得多 外层膜（outer membrane），是在肽聚糖层之外的膜，内含有脂多糖，核糖，O抗原 外层膜中还有孔蛋白，允许特定的分子通过 周质（periplasmic space）： 指肽聚糖层和外层膜之间的空间 S层直接与外层膜相连，而非肽聚糖层 如果有鞭毛，表毛有四个支撑环而不是两个 没有磷壁酸（teichoic acids）或者脂磷壁酸 多糖骨架上有脂蛋白 大多数革兰氏阴性菌中含有胞壁质脂蛋白（Brauns lipoprotein），

4、其作用为通过共价键连接外层膜和多糖 Company Logo肠杆菌科分布：是一大群寄居在人类和动物肠道中、生物学性状近似的革兰氏阴性杆菌，可随人和动物排泄物广泛分布于土壤、水和腐物中。其中部分为致病菌，如：沙门菌属、志贺菌属等;而多数为肠道正常菌群，在一定条件下可以致病，故称为条件致病菌。 致病：正常菌群-条件致病菌-致病菌、引起多器官、多组织的病变。种类：肠杆菌科、种类众多，30个菌属、120多个菌种。Company LogoCompany Logo包括埃希菌属志贺菌属沙门菌属耶尔森菌属肠杆菌属变形杆菌属克雷伯菌属摩根菌属枸橼酸菌属肠杆菌属沙雷菌属普罗2wei致病菌肠道正常菌群条件致病菌医院

5、感染Company Logo形态染色相似 革兰阴性杆菌 (两端钝圆，无芽胞。多数细菌有周身鞭毛，能运动，个别细菌有荚膜。多数细菌有菌毛。本科细菌为需氧和兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，各种细菌菌落大小相似，直径23m。) 2. 培养特性相同 普通培养基上生长良好 3. 生化反应活泼 发酵葡萄糖，氧化酶阴性，触酶阳性，还原硝酸盐为亚硝酸盐，O/F试验为发酵型。4. 抗原构造复杂5. 抵抗力弱 6. 易变异返回肠杆菌科的共同特性Company LogoO-F试验氧化型发酵型产碱型Company Logo氧化酶试验阳性：紫红色 阴性：无色Company Logo硝酸盐还原试验阳性：

6、红色 阴性：淡黄色 Company Logo4、抗原构造复杂鞭毛抗原（H）菌体抗原（O）K或Vi抗原Company Logo O抗原耐热，100 不被破坏。是肠道杆菌血清学分型和分群的主要抗原、如大肠杆菌O157，霍乱弧菌O139。IgM型抗体，凝聚反应0抗原可分三部分:多糖侧链，肠杆菌科细菌具有不同的糖成分，多糖的排列也不相同，决定了0抗原的特异性;核心部分，包括外核心区、骨架和核心糖脂，肠杆菌科的核心部分相同;类脂A，与内毒素有关，可引起与内毒素血症相同的发热、炎症和血液动力学改变的各种临床表现。抗原结构： O抗原、H抗原、表面抗原Company LogoH抗原：即细菌的鞭毛蛋白；不耐热，

7、60 30分钟即被破坏；其特异性取决于多肽链氨基酸的组成、排列顺序和空间构型IgG型抗体H抗原可能与细菌在尿路中的播散有关。多数肠杆菌科细菌表面有菌毛，为一种蛋白成分，与细菌对粘膜表面的粘附能力有关表面抗原不耐热，60 30分钟即被破坏；可阻断O抗原与相应抗体的结合。荚膜抗原能抑制细菌与0抗血清的凝集，并可促使细菌易于粘附于粘膜表面，与细菌的侵袭力有关，如：大肠杆菌的Ki抗原和伤寒杆菌的Vi抗原。Company Logo易变异溶源性转换生化反应性变异通过引起耐药性变异毒力性变异转导接合自发突变Company Logo肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别 Company Logo临床意义致病物质所致疾

8、病Company Logo菌毛或菌毛样结构荚膜或微荚膜外膜蛋白内毒素外毒素致病物质Company Logo所致疾病 肠道感染 腹泻、食物中毒、旅行者腹泻、肠热症肠道外感染 （志贺菌除外） 泌尿道感染、肺炎、脑膜炎、伤口化脓、菌血症等Company Logo治疗在尚未有病原学报告时， 对泌尿道感染和腹膜炎-可按革兰氏阴性杆菌联合使用抗生素， 对肺炎和败血症者-需兼顾革兰氏阴性和阳性菌。氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素有较长的抗生素后效应，与内酰胺类连用可增强抗菌活性，延长抗菌作用时间，有利于感染组织内获得有效的药效浓度。Company Logo肠杆菌科大肠埃希菌肺炎克雷伯菌沙门氏菌痢疾志贺菌阴沟肠杆

9、菌Company Logo肠杆菌科：革兰氏染色阴性、触酶阳性、 氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性。定属和定种试验：KIA（K/AH2S-或A/AH2S-）IMViC（+-）MIU(-+-或+-）多价血清和单价血清的凝集试验，确定血清型。致病性大肠杆菌：ETEC-毒素EIEC-侵袭力试验。 埃希菌属鉴定Company Logo大肠埃希菌 大肠埃希菌（E.coli)是埃希菌属典型代表。分布：婴儿出生后数小时即进入肠道，并终生伴随，是人体肠道正常菌群的重要构成菌。A：分解代谢产物，抑制痢疾杆菌等致病菌的生长 B：合成 ViB、ViK等，供人体吸收利用。 C：天然抗原，致病：正常菌群-肠道外感染 特殊菌

10、株-肠道内感染Company Logo形态特征培养特性生化反应抗原结构细菌特性Company LogoG 小杆菌，有鞭毛、菌毛、多数菌株有多糖微荚膜。发酵多种糖类，产酸并产气，大部分菌株迅速发酵乳糖，但引起肠内感染的菌株（致病性大肠杆菌）不发酵或缓慢发酵乳糖；在肠道鉴别培养基上呈现有色菌落；IMViC，脲酶试验阴性、硫化氢试验阴性。三种抗原，血清型表示式- O：K：H O111：K58：H2生物学性状Company Logo大肠埃希菌革兰染色大肠埃希菌电镜图Company Logo大肠埃希菌菌落特征（血平板）大肠埃希菌菌落特征（MAC）Company Logo大肠埃希菌KIA（AA）MIU（）

11、Company Logo大肠埃希菌IMViC试验（）右侧为对照（） Company Logo大肠埃希菌抗原结构Company Logo 标本 肠外感染：尿液；脓液；血液 肠道感染：粪便 分离培养 计数培养 纯培养形态学检查 生化反应 毒素检测 血清学试验 报告结果 大肠埃希菌检验程序Company Logo在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标 3个大肠菌群/1L饮水 100个细菌总数/1ml饮水卫生学指标大肠菌群指数每1000ml水中大肠菌群数我国的卫生标准：细菌总数每1ml或1g样品中细菌总数Company Logo 在分子生物学和基因工程实验中重要的实验材料和研究对象也是重要的

12、实验材料和研究对象Company Logo致病物质侵袭力 菌毛、K抗原内毒素肠毒素 耐热肠毒素（ST） 不耐热肠毒素（LT）Company Logo肠道外感染-机会性感染以化脓感染最为常见：泌尿系统感染、伤口感染、腹膜炎、阑尾炎、胆囊炎。 在婴儿、老年人：败血症、脑膜炎。肠道内感染-腹泻肠产毒性大肠杆菌（enterotoxigenic E. coli ETEC)肠侵袭性大肠杆菌（enteroinvasive E. coli EIEC)肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic E. coli EPEC)肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E. coli EHEC)肠集

13、聚型大肠杆菌（enteroaggregative E. coli EAggEC)致病性Company Logo引起腹泻的大肠埃希菌 菌株 作用 部位 疾病与症状 致病机制 ETEC6、8、15、25、27、78、148、159 小肠 旅行者腹泻，婴幼儿腹泻，水样便，恶心，呕吐，腹痛，低热 LT和（或）ST肠毒素，大量分泌液体和电解质 EIEC28ac、29、112ac124、136、143。大肠 水样便，少量血便，腹痛，发热 质粒介导侵袭和破坏结肠粘膜上皮细胞 EPEC2、55、86、111、114、119、125-128、142、158小肠 婴儿腹泻，水样便，恶心，呕吐，发热 粘附和破坏上皮

14、细胞 EHEC157、26、111大肠 水样便，大量出血，剧烈腹痛，低热或无，可并发HUS、血小板减少性紫癜 SLT-I或SLT-II，中断蛋白质合成 EAggEC42、44、3、86 小肠 婴儿持续性腹泻，呕吐，脱水，低热 集聚性粘附上皮细胞，阻止液体吸收 Company Logo ETEC 粘 定居因子（colonization factor） 附 又称粘附素（adhesin） 是细菌的特殊菌毛 CFA/CFA （ colonization factor antigen，） 小肠粘膜以免被肠蠕动、肠分泌液所清除 释 放 肠毒素 由细菌的质粒DNA编码 不耐热肠毒素（heat labile

15、enterotoxin，LT） 6530分钟失去活性 耐热肠毒素（heat stable enterotoxin，ST） 100加热20分钟仍不被破坏1. 肠产毒性大肠杆菌 （ETEC)Company Logo 不耐热肠毒素（LT） B亚单位 受体：肠粘膜上皮细胞膜 表面的GM1神经节苷脂 A亚单位（毒性活性部分） 穿越细胞膜 活化 腺苷环化酶 ATP cAMP 水、电解质紊乱 腹泻Company LogoLT 检测（ CHO细胞培养）Company Logo临床症状：轻度腹泻/严重的霍乱样症状 是婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌 耐热肠毒素（ST） 鸟苷环化酶 GTP cGMP水、电解质紊乱

16、腹泻 Company LogoST检测（乳鼠灌胃试验）Company Logo 2、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC) 无外毒素-肠毒素，但有强的侵袭力（类似痢疾杆菌） 定位于结肠 侵入肠粘膜上皮细胞，生长繁殖，产生内毒素。 破坏细胞形成炎症和溃疡， 引起腹泻，呈脓血便 ，有里急后重， 临床症状酷似志贺菌感染，主要侵犯较大儿童、成人。Company Logo是婴儿腹泻的主要病原菌；不产生肠毒素；也无侵袭力；但能粘附小肠粘膜上皮细胞,在小肠黏膜表面大量繁殖，破坏微绒毛,导致刷状缘破坏，绒毛萎缩，上皮细胞结构、功能受损，干扰细胞的再吸收,造成严重腹泻，严重者可致死；最近报导，可产生类志贺毒素。3、肠致病

17、性大肠杆菌（ EPEC)Company Logo亦称为Vero毒素大肠埃希菌主要血清型：O157：H7主要毒力因子：菌毛质粒编码,介导细菌与肠粘膜细胞结合。志贺样毒素（Shiga-like toxin，SLT） 噬菌体编码 细胞毒素主要临床症状： 出血性结肠炎、伴以剧烈腹痛、血便。轻重不一。10%小于十岁患儿，有严重并发症，死亡率高4、肠出血性大肠杆菌（EHEC）Company LogoE. coli O157:H7 induced hemorrhagic colitisin a three-year-old girlCompany Logo 5、肠集聚性大肠埃希菌质粒编码粘附素、使细菌吸附在

18、肠粘膜细胞表面。分泌肠毒素、导致肠液大量分泌。婴儿水样腹泻。Company Logo治疗Company Logo能分解葡萄糖，产酸不产气，不分解乳糖,除宋内志贺菌第二节 志贺菌属 shigella是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dysentery bacteria无鞭毛，有菌毛生化反应低于其他肠道杆菌，对酸敏感形态对理化因素的抵抗力Company Logo志贺菌O抗原-分类、4群44个血清型 菌种 群 型 亚型 痢疾志贺菌 A 110 8a，8b，8c 福氏志贺菌 B 16， 1a，1b，2a，2b X，Y变种 3a，3b，4a，4b 鲍氏志贺菌 C 118宋内志贺菌 D 1K抗

19、原-与分类无关。中国福氏志贺菌多见。 抗原构造及分类Company Logo 致病性传染源:患者和带菌者粪口传播感染灶局限于结肠粘膜层，一般不入血病后免疫期短，也不巩固Company Logo志贺菌属Company Logo 致病物质1、侵袭力：菌毛有利于菌粘附至肠粘膜2、毒 素：内毒素肠粘膜通透性升高毒素吸收发热、神志障碍、休克破坏肠粘膜炎症、溃疡、脓血粘液便肠壁植物神经肠蠕动失调、痉挛腹痛、里急后重内毒素血症外毒素（A群、型） 志贺毒素 ST(VT)有3种毒性，与内毒素协同作用，加重局部和全身症状局部（肠壁）全身Company Logo 致病过程：志贺菌痢疾 粪口传播（传染源：病人/ 带菌

20、者） 潜伏期 10-200个细菌即使人感染 1-3天 突破人体防御能力 胃酸 正常菌群拮抗作用 局部免疫作用（SIgA） 大肠部位 侵入 侵袭力（菌毛） 粘膜上皮细胞（生长繁殖，形成感染灶）Company Logo 内毒素、外毒素 坏死、脱落粘膜组织 局部刺激 进入血流粘液、 1、肠功能紊乱 发热、WBC细菌、 痉挛、腹痛 脱水、酸中毒炎性细胞、 大便次数增多 微循环衰竭血液 里急后重 中毒性脑炎 2、肠壁通透性增 DIC 促进毒素吸收 腹泻 中毒性菌痢死亡率高Company Logo 所致疾病急性细菌性痢疾急性典型：发热、腹痛、脓血粘液便、里急后重急性非典型：易误诊，导致带菌和慢性 中毒性痢

21、疾：小儿慢性细菌性痢疾：病程迁移两个月以上带菌者 Company Logo肠杆菌科：革兰氏染色阴性、触酶阳性、 氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性。定属和定种试验：KIA（K/AH2S-）IMViC（-+-或+-） MIU(-+-或-）多价血清和单价血清的凝集试验，确定血清型。志贺菌属鉴定Company Logo 预防：控制传染源，切断传播途径 链霉素依赖株活疫苗（Sd）治疗：易引起耐药性，联合用药Company Logo其中许多为人畜共患病第三节 沙门菌属（Salmonella）一大群人与动物肠道中的寄生菌菌群菌型甚多，仅少数对人致病Company Logo生物学性状生化反应：不发酵乳糖 发酵葡

22、萄糖产酸产气 （伤寒沙门菌外）Company Logo 沙门菌属Company LogoO-Ag： LPS成分、耐热；共同抗原；0.1%石碳酸不破坏；TI-Ag、产生IgM。H-Ag：蛋白质、不耐热；特异抗原；0.1%石碳酸破坏；TD-Ag、产生IgG。Vi-Ag： 多糖成分，性质不稳定； 位于菌体表面； 抵抗吞噬，毒力抗原（Virulence）； 阻止O-Ag与相应Ab的体内外结合； 检测抗Vi-Ag的抗体，筛选带菌者。伤寒杆菌的抗原构造Company Logo伤寒、希氏沙门菌的表面抗原与毒力有关Vi抗原抗原性弱，刺激机体产生短暂低效价抗体伴随活菌一起存在测定Vi抗体有助于检出带菌者因为所以

23、本质Company Logo1、致病物质：致病性与免疫性侵袭力：侵袭素、 Vi抗原毒 素：内毒素外毒素-肠毒素（鼠伤寒沙门菌）2、所致疾病：伤寒副伤寒-肠热症败血症胃肠炎（食物中毒）（无症状带菌者）Company Logo潜伏期伤寒杆菌（随食物） 未被胃酸杀灭小肠上部（以菌毛吸附在粘膜表面）穿过组织间隙（鞭毛） 肠壁固有层淋巴组织，由M吞噬Vi抗原抵抗杀伤，继续生长繁殖淋巴液、肠系膜淋巴组织 血液（第一期菌血症）致病过程：伤寒杆菌Company Logo初期（病程第1W） 第一期菌血症血液骨髓、肝、脾、胆、肾等脏器 被其中吞噬细胞吞噬，细菌在其中大量繁殖 血液、骨髓细菌培养阳性率高出现乏力、头

24、痛、全身酸痛等前期症状血液再次释放第二期菌血症极期（病程第2、3W） 肝 肾各脏器胆囊胆汁 肠道 尿液Company Logo肠道 尿液 血液第二期菌血症刺激已致敏的肠壁淋巴组织，发生导致变态反应，坏死、溃疡 释放大量内毒素加重全身中毒症状 血液、粪便、尿液，细菌培养可呈阳性 血清中： IgG IgM粪便排出细菌 尿液排出细菌 血液有细菌持续高热、肝脾肿大、全身中毒症状显著Company Logo特异性抗体升高，作用于细胞外细菌特异性细胞免疫加强，TD细胞释放淋巴因子，激活M，使 其活性增强，有效杀灭M内的伤寒杆菌。（ TC细胞杀伤 细菌感染的靶细胞？）抗伤寒杆菌O-Ag的抗体（IgM）： 抗

25、伤寒杆菌H-Ag的抗体（IgG）：带菌者 恢复期带菌者：恢复后3周-3月 长期带菌者：3月伤寒的痊愈指标： 胆囊、胆汁细菌培养阴性。恢复期（第3W以后）Company Logo胆囊-肠道-粪排菌皮肤-血栓出血-玫瑰疹肾-尿肝脾-肿大骨髓伤寒和副伤寒的致病过程伤寒沙门和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌小肠上部粘膜肠系膜淋巴结 固有层淋巴结进入血液再次进入血液第一次菌血症第二次菌血症Company Logo3、免疫性细胞免疫免疫力牢固Company Logo微生物学检查查病原标本伤寒和付伤寒 食物中毒 败血症第1周取静脉血可疑食物 血第1-3周取骨髓液呕吐物第2周起取粪、尿 粪SS平板生化反

26、应血清学鉴定双糖发酵等玻片凝集试验Company Logo微生物学检查法：伤寒杆菌因病程不同采取不同标本标本静脉血（第1周）骨髓（第1-3周） 粪便和尿液（第2周以后）增菌 离心沉淀（分离培养）SS平板挑取可疑菌落 鉴定 ： KIA；MIU；血清学试验Company Logo 因病程不同采取不同标本 血液细菌培养阳性率 血液Ab 粪便细菌培养阳性率 尿液细菌培养阳性 发 病 时 间Company Logo微生物学检查血清学诊断1、肥达试验原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体

27、及其效价的试验。用途：辅助诊断伤寒，副伤寒Company Logo原理：定量凝集反应 已知伤寒杆菌O-Ag 伤 寒 杆 菌 H-Ag + 病人血清 甲型副伤寒杆菌H-Ag 乙型副伤寒杆菌H-Ag 检测相应Ab的有/无、含量。血清学试验Widal testCompany Logo结果判定：正常抗体水平 O凝集价180；H凝集价1160O-Ab H-Ab 伤寒早期或有交叉反应的其它沙门菌感染O-Ab H-Ab 伤寒急性期O-Ab H-Ab 伤寒恢复期O-Ab H-Ab A：伤寒愈后期 B：曾患伤寒杆菌 C： 预防接种疫苗辅助诊断 ：A：O凝集价180；H凝集价1160 B：2次检测凝集价递增 4倍

28、或以上Company Logo防治原则 口服减毒活疫苗（Ty21a）带菌者检查：Vi-Ab的效价 110，反复粪便培养。TYPHOID MARY3w-3m3m-12m1yCompany Logo附：其他沙门菌的致病性伤寒：由伤寒杆菌引起。副伤寒：由副伤寒杆菌引起，临床症状与伤寒相似，但较轻。败血症肠炎型（食物中毒）：最常见的沙门菌感染：鼠伤寒沙门、猪霍乱沙门、肠炎沙门菌潜伏期6-24小时；主要症状：发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻常为集体性食物中毒。Company Logo志贺菌属（Shigella）： 人类细菌性痢疾最为常见的病原菌 通称痢疾杆菌（dysentery bacteria）沙门菌属（

29、Salmonella）： 引起肠热症- 伤寒、副伤寒 食物中毒 败血症 Company Logo 一、生物学性状志 贺 菌有菌毛不分解乳糖无鞭毛（动力-）分解葡萄糖 产酸不产气不产生H2S沙 门 菌有菌毛不分解乳糖周身鞭毛（动力+）分解葡萄糖 产酸产气（伤寒杆菌不产气）大多产生H2SCompany LogoflagellaCompany Logo志 贺 菌 沙 门 菌致病部位： 大肠 不侵入血流致病物质：侵袭力：菌毛 粘附上皮细胞侵袭 侵入结肠粘膜上皮细胞，繁殖、扩散，形成感染病灶内毒素外毒素：ST致病部位： 小肠 侵入血流，引起 菌血症 致病物质：侵袭力 菌毛 鞭毛 穿越小肠粘膜达皮下组织 Vi抗原 抵抗吞噬细胞的杀伤内毒素肠毒素二、致病性Company Logo细菌性痢疾肠道症状：有 不侵入血流全身中毒症状： 中毒性痢疾血象 WBC 脓血粘液便，粪便是唯一的标本以局部体液免疫， - SIgA为主所致疾病临床症状的差异伤寒肠道症状：有 侵入血流引起菌血症全身中毒症状：有 尚影响肝、肾、脾、胆等器官。血象 WBC ？ 嗜酸性粒细胞 除粪便外，血液、骨髓、尿液、胆汁均可分离到细菌。以细胞免疫为主，病后获牢固免疫力Company Logo其他肠道杆