反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量

1、反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量【摘要】目的:建立反相-高效液相色谱法(RP-HPL)测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮的含量的方法。方法:在DS-18色谱柱上采用流动相乙睛-0.025l/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)溶液进展梯度洗脱：乙腈：05in，70%;530in，70%90%；3050in，90%。检测波长213n，流速1.0l/in。结果:在0.37g范围内，莪术醇对照品的峰面积Y与其浓度X呈现良好的线性关系，r=0.9996，在0.37g范围内，吉马酮对照品的峰面积Y与其浓度X呈现良好的线性关系，r=0.9997，平均回收率分别为98.37%和99

2、.71%n=9。结论:本法专属性高，可同时测定凝胶剂样品中莪术醇和吉马酮的含量，可用于对莪术油凝胶剂的质量控制。【关键词】莪术油凝胶莪术油高效液相色谱法莪术醇吉马酮含量测定莪术油(ZedaryTureriil)是从姜科植物蓬莪术(uruaphaeaulisValetn)、广西莪术(uruntakangsiensisS.G.Leeet.F.Lung)温郁金(uruaenyujinY.H.henet.Ling)的枯燥根茎中提取出的挥发油，呈浅黄或棕黄色，具有很强的挥发性1。温郁金为姜科姜黄属植物，主产于浙江省温州市瑞安一带，为浙江省道地中药材，人工栽培有千年历史，为著名的“浙八味之一2，其中从温莪

3、术中共提取别离出7个单体化合物，包括三种姜黄素类成分和四种挥发油成分3。现选用本地瑞安产莪术油为试样品，对其凝胶剂质量控制作出评价。莪术油葡萄糖注射液剂型作为抗病毒药收载于中国药典2000版二部，其含量测定是以莪术醇为对照品，经香草醛硫酸溶液显色后用比色测定的。莪术油凝胶剂作为一种新的剂型多用于黏膜部分用药，如眼部、阴道等，凝胶剂与传统注射剂相比，具有药物含量增加、滞留时间延长、生物利用度进步的优点。本研究建立了反相HPL法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量的方法。1仪器、试剂及条件1.1仪器UV-7502P型紫外可见分光光度计(上海欣茂技术消费；Agilent1100高效液相色谱仪四元泵，

4、检测器VD；Agilenthestatin色谱工作站；AL204型电子分析天平梅特勒-托利多公司消费；18B-型高速离心机上海安亭科学仪器厂消费。1.2试剂及药品乙腈HPL级，天津四友生物医学技术消费；甲醇(HPL级，天津四友生物医学技术消费；吉马酮分子量：206.32，中国药品生物制品检定所提供，批号：111665-202201；莪术醇(分子量：236.34,中国药品生物制品检定所，批号：100185-202205；莪术油试样品瑞安天瑞；莪术油凝胶剂本院自制，批号为：0603051，0603062，0603093；其他制剂均为分析纯。1.3色谱条件色谱柱：254.6，5，HypersilDS

5、18反相色谱柱，流动相：乙睛-0.0251/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)梯度洗脱：乙腈：05in，70%；530in，70%90%；3050in，90%，柱温：25，流速：1.0l/in，检测波长：213n，进样量20l。2方法和结果2.1系统适应性试验在1.3的色谱测定条件下，莪术醇与吉马酮峰形对称，保存时间分别约为20in和26in，理论塔板数3000，别离度大于4，记录色谱图，结果见图2。2.2最低检出量测定调整检测灵敏度及进样量，测定峰高为基线噪声3倍时的进样量，作为检出限，按该方法测得的最低检测限为10ngl-1，最低检测量为0.2ng。2.3标准曲线的制备精细称取

6、莪术醇对照品10g、吉马酮对照品10g分别置10l容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。另取莪术醇对照品溶液和吉马酮对照品溶液各5l于25l容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得对照品混合溶液。精细量取对照品混合溶液2、3、4、6、10、15、18l，分别置25l量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，分别精细注入20l，记录峰面积，以峰面积对浓度进展回归分析，得莪术醇回归方程为：Y=12765.7035X-34.1235(r=0.9996)，线性范围为0.37g，吉马酮回归方程为：Y=63881.3685X+28.1730(r=0.9997)，线性范围为0.37g。2.4回收率试验在葡萄糖

7、注射液中参加莪术醇对照品、吉马酮对照品各适量，按上述色谱条件进样(20l)，计算莪术醇和吉马酮的回收率，结果见表1、表2。2.5精细度试验取对照品混合溶液，在上述色谱条件下，连续进样5针(20l)，以峰面积计算精细度，结果莪术醇和吉马酮的RSD分别为1.81%和0.7%。2.6样品含量测定取不同批次莪术油凝胶1.0l，置100l容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，取一定量置于5l离心管中，以4000r/in转速离心5in，取上清液20l进样，记录峰面积，代入回归方程计算，结果批号为0603051、0603062、0603093的样品含量分别为标示量的99.91%，100.10%，99.42%，

8、结果见表3。3.1分析方法的选择莪术油的主要有效成分为莪术醇，但莪术醇的相对含量很小，而其他组分如吉马酮等的含量相对很高，因此，以选择吉马酮为含量测定目的成分，同时测定莪术醇的含量4。取吉马酮对照品，参加乙腈溶解并稀释制成5g/l的溶液，在UV-7502P型紫外可见分光光度计上190400n处进展扫描，莪术醇和吉马酮对照品的最大吸收波长分别在205n和213n，故以213n作为液相色谱检测波长。假设采用UV方法测定凝胶剂中的吉马酮含量会有较大的误差，故本研究选择了专属性较高的HPL法。3.2流动相组成的优化参照各类文献5，选用优化后流动相：乙腈-0.0251/L磷酸(45:55)(三乙胺调节p

9、H至4.5)进展梯度洗脱：乙腈：05in，70%；530in，70%90%；3050in，90%。检测波长213n，流速1.0lin-1。结果说明:凝胶样品中莪术醇与吉马酮的保存时间分别约为20in和26in，峰形比拟对称，与其他组分峰别离度好，应选此条件作为流动相对本品的含量进展测定。3.3小结薄层色谱分析法不能准确测定莪术醇含量，而且莪术油中莪术醇含量并不高，现用反相HPL法可以同时检测凝胶样品中的莪术醇和吉马酮的含量，操作简便，结果准确，重复性好，适用于莪术油凝胶剂的质量控制。【参考文献】1李国栋,许付,沈爱军.莪术油的研究进展J.中国药学杂志,2002,37(11):806-809.2秦坤良,汤淙淙,黄可新.温郁金茎叶与块根中挥发油成分的比拟研究J.温州医学院学报,2022,36(2):95-97.3angY,angZ.StudynthequalityfRhizauruaeJ.AtaPharSin,2001,36(11):849-853.4吴雨川,刘天扬,姜连阁,等.RP-HPL法测定莪术油中莪术醇和吉马酮含量J.中医药信息,2022,21(4):64