高效液相色谱法测定山楂果实中槲皮素的含量

1、高效液相色谱法测定山楂果实中槲皮素的含量【摘要】目的建立高效液相法测定山楂中槲皮素含量的方法。方法色谱条件：Shi-PakVP-DS18柱，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液5248,V/V，检测波长为373n。结果槲皮素的回归方程为Y=2855.4X-10974r=0.9999，n=5，线性范围为0.01890.0566g；平均回收率为96.44%，RSD为1.51%。结论此法简便、结果可靠，为山楂药材的质量控制提供快速准确的测定方法。【关键词】山楂槲皮素高效液相色谱法含量测定Abstrat：bjetiveTdevelpaethdfrdeterinatinfthententfqueretinin

2、rataegussanguineabyHPL.ethdsTheseparatinasarriedutnShi-PakVP-DS18lunithethanl-0.04%phsphriaidslutin5248asbilephase,thedetetinavelengthas373n.ResultsTheregressinequatinandeffiientasY=2855.4X-10974(r=0.9999,n=5)frqueretin.Thelinearrangeas0.01890.0566g.Theaveragereveryandpreisin(RSD)fqueretinas96.44%an

3、d1.51%,respetively.nlusinThisethdissiple,aurateandanbeusedfrthequalityntrlfhineseHathrn.Keyrds：rataegussanguinea;Queretin;HPL;Quantitativedeterinatin山楂为常用中药,具有消食健胃和行气散淤的成效,其主要成分为黄酮类和有机酸类化合物1。山楂可降压、降血脂、增加冠脉流量、强心和抗心律不齐，有效成分为黄酮类化合物2，其果实主要成分为槲皮素和金丝桃苷3。目前,?中国药典?仅测定了其有机酸(以枸橼酸计)的含量，并未对黄酮类成分槲皮素的含量测定法进展规定。本文

4、参阅文献46用反相高效液相法对山楂果实提取物中的槲皮素进展了含量测定方法学的研究。结果说明,该测定方法准确、灵敏、重现性好,获得了满意的结果。为建立山楂果实中槲皮素的含量测定方法,制定山楂中槲皮素的含量限度,进一步完善山楂的质量标准提供参考。1仪器与试药电子分析天平AU220D,SHIADZU；Q2500型超声波清洗器上海必能信超声；恒温水浴锅常州国华电器；UV-2450型紫外可见分光光度计SHIADZU；高效液相色谱仪日本岛津公司：L-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，T-10ASvp柱温箱，H色谱工作站。药材山楂市售，经南京医科大学药学院天然药物化学与生药学教研室陈立娜博士鉴定

5、；槲皮素对照品中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号10081-9905；甲醇色谱级，去离子水南京医科大学分析测试中心提供，磷酸分析级。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为Shi-pakVP-DS18柱1504.6,5；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液5248；流速0.8l/in；检测波长373n；柱温30；进样量10l。2.2对照品溶液的制备精细称取在105枯燥至恒重的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每毫升含槲皮素4g的溶液，作为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取药材粉末约1.1g,精细称定，置锥形瓶中,参加甲醇40l,25%盐酸溶液5l摇匀,超声处理20in,移置水浴中加热回流2h，迅速冷却至

6、室温,甲醇定容至50l量瓶中,摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取对照品溶液、供试品溶液于上述色谱条件下进样，得HPL图谱见图1，分析得系统适用性实验结果。见表1。图1HPL图略表1系统适用性实验结果略2.4线性范围的考察分别精细汲取槲皮素对照品溶液3.8g/l5.0，7.5，10.0，12.5，15.0l，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件，分别进展分析，测定其峰面积值，并以对照品量X为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，得槲皮素回归方程：Y=2855.4X10974r=0.9999，n=5。结果说明：槲皮素对照品在0.01890.0566g范围呈成良好的线性关系。2.5进样精细度实验精细汲取槲

7、皮素对照品溶液10l，连续进样6次，测定峰面积值，计算RSD=0.35%。2.6溶液稳定性实验取供试品溶液，每隔1h时进样、测定一次，结果说明：供试品溶液在所测的4h内测得的结果根本一致，槲皮素的RSD=1.27%。2.7重复性实验取同一批号样品6份，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，结果槲皮素含量为山楂果实生药量的0.0132%。2.8回收率实验取槲皮素含量(0.0132%)的样品6份，每份约0.65g，分别精细参加槲皮素对照品溶液(0.0850g/l)1l，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，结果平均回收率为96.44%，RSD为1.51%。2.9样品含量测定按“2.3项下方法制备3批市

8、售山楂药材供试品溶液，分别精细汲取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定，以外标法计算含量。结果见表2。表2样品中槲皮素含量测定结果略3讨论实验中分别采用了甲醇-0.4%磷酸溶液，甲醇-0.2%磷酸溶液两个不同的流动相系统进展实验，当将甲醇-0.4%磷酸溶液系统调整为5248时，不仅别离效果好，灵敏度较高，且大大缩短了待测组分的保存时间与文献4,5相比。故最后选择甲醇-0.4%磷酸溶液5248为本实验的流动相系统。另外，本实验供试品溶液的制备方法与文献4的方法相比拟简单，所提得待测组分的含量是文献4报道的2.3倍。本文考察了3批不同批次山楂药材中槲皮素的含量。建立了一种更准确、简单、快速的HPL测定方法，对于评价山楂药材及其制剂的质量提供了更为有效的方法。【参考文献】1孙敬勇，杨书斌，谢鸿霞，等.山楂化学成分研究J.中草药,2002,33(6)：483.2罗玉梅,王贺振.山楂的化学成分及药理研究进展J.时珍国医国药,2022,15(1)：53.3高光跃,冯毓秀,秦秀琴.山楂类果实的化学成分分析及其质量评价J.药学学报，1995,30(2)：138.4陈美川.高效液相色谱法测定山楂中槲