S100蛋白与Cathepsin D在先天性巨结肠诊断中的应用

1、S-100卵白与Cathepsin D在先本性巨结肠诊断中的应用陈卫坚，周小渔，李梨平，贺新玉，范丽明【摘要】目的不雅察S-100卵白S-100和构造卵白酶DathepsinD，AD在先本性巨结肠Hirshsprungsdisease，HD中的表达。要领应用免疫构造化学染色不雅察25例HD患儿及10例比拟组儿童结肠。效果1在正常比拟组与HD扩张段组肠壁肌间和黏膜下层可见AD只对神经丛中神经节细胞阳性表达，对神经纤维与神经胶质细胞均不表达。S-100染色与AD染色相反，神经纤维与神经胶质细胞均阳性表达，神经节细胞阴性表达，表示为阳性神经丛中细胞状“空缺区。2在HD局促段组肠壁神经丛中缺乏AD阳性

2、表达。S-100染色神经丛中细胞状“空缺区未不雅察到；S-100强阳性表达的神经纤维束明显增生，扭曲呈波浪状。结论S-100和AD的免疫组化染色对诊断HD具有紧张意义。【关键词】先本性巨结肠构造卵白酶DS-100卵白AppliatinfS-100prtEinandathepsinDindiagnsisfHirshsprungsdisease【Abstrat】bjetiveTbservetheexpressinfS-100prtein(S-100)andathepsinD(AD)inthelnfpatientsithHirshsprungsdisease(HD).ethdslnsfr25hild

3、renithHDand10ntrlserestainedfrS-100andADbyiunhistheistry.Results(1)InthentrlsandthedilatedintestinesegentftheHD，AD-psitivegangliniellserebservedinyenteriandsubusalplexus.S-100psitivenervefibersandgliytestainederenegativetAD.Thegangliniells-likeblankareaintheplexusstainederenegativetS-100.(2)Intheste

4、ntisegentfHD，neitherAD-psitiveneurnsnrell-likeblankareainS-100stainederefundintheplexus.S-100psitivefibersereprliferatedbviuslyandave-likeintheirappearane.nlusinTheexpressinfS-100andADiunhistheistry-staininghasaniprtantsignifianetthenfireddiagnsisfHD.【Keyrds】HirshsprungsdiseaseathepsinDS-100prtein先本

5、性巨结肠Hirshsprungsdisease，HD是小儿外科常见的消化道畸形，重要病理改变是远端病变段肠管神经节细胞缺如。在HD的病理诊断中，有部门病例，尤其是新生儿病例，由于肠壁神经体系发育不完全，神经节细胞欠成熟，形态不典范，与神经丛中神经胶质细胞难以区分。并且多数患儿并发肠道熏染，肠壁内有较多炎细胞浸润，使HE切片中神经节细胞难以识别。这些缘故原由均可造成HD不易明白诊断。本研究应用免疫构造化学免疫组化要领，不雅察正常肠壁、HD扩张段和HD局促段肠壁神经构造中S-100卵白S-100和构造卵白酶DathepsinD，AD的表达效果，加以阐发，以明白诊断HD。1资料与要领1.1一样平常资

6、料回首我院2002年6月2022年6月临床拟诊断为HD的手术切除标本25例。男22例，女3例，年事1个月4岁，此中3个月10例，3个月15例，均经术后病理查抄证明为HD，23例为常见型，2例为长段型。每例标本别离取近端扩张段切缘肠壁作为HD扩张段组，取远端局促段肠壁作为HD局促段组。10例横结肠或乙状结肠标本取自先本性无肛患儿造瘘术后切除的肠管，经光镜查抄可见发育成熟的神经节细胞，作为正常比拟组。1.2检测原理AD是一种天冬氨酸卵白酶，属于溶酶体酸性卵白酶家属。在人类脑构造神经元、体内神经节细胞中含量富厚，故可作为肠壁神经节细胞的标识表记标帜。S-100是神经胶质细胞特异性卵白，亦可存在于神经

7、纤维中，可作为肠道神经丛中胶质细胞和神经纤维的标识表记标帜。1.3要领标本经10%福尔马林结实、白腊包埋，一连切片，切片厚4，行AD和S-100免疫组化染色。染色步调接纳非生物素两步法，用阳性的神经节细胞瘤作为阳性比拟片，用PBS取代一抗作为阴性比拟片，DAB显色。一抗、二抗及DAB显色剂均购自上海长岛抗体生物诊断试剂。一抗抗AD抗体和抗S-100抗体事情浓度均为160，鼠/兔通用型二抗事情浓度为1100。不雅察正常肠壁、HD扩张段和HD局促段肠壁神经丛中神经节细胞、神经胶质细胞及神经纤维的染色效果。1.4效果断定棕黄色为阳性信号，AD、S-100的阳性表达部位均位于细胞质。不雅察指标以“+、

8、+、+、-表达染色的深浅。(-)为阴性染色，(+)为弱阳性染色，(+)为阳性染色，(+)为强阳性染色。2效果2.1正常比拟组2.2HD扩张段AD和S-100在HD扩张段肠壁的染色环境与比拟组肠壁根本雷同。2.3HD局促段正常比拟组、HD扩张段组和HD局促段组肠壁神经构造对S-100、AD表达环境见表1。表1正常比拟组、HD扩张段组和HD局促段组肠壁神经构造对S-100及AD表达环境注：n为标本例数3讨论HD在小儿胃肠道先本性畸形中发病率居第二位。HD简直诊根据是远端病变肠壁肌间与黏膜下层神经节细胞缺如。但是在神经嵴细胞的迁徙、增生和发育的历程中，受多种因素的影响，神经节细胞大概完全没发育，也大

9、概是发育不成熟。尤其在新生儿期这种发育不成熟的神经节细胞更常见，其在光镜下的形态与神经丛中的胶质细胞不易区分，加上炎症细胞的影响，大概造成误诊。借助酶构造化学和免疫组化染色要领可以帮助诊断。但酶构造化学要领染色效果不不变，轻易出现假阳性，必要有履历的病理医师对染色效果做出准确的断定。接纳免疫组化染色标识表记标帜神经节细胞，对HD明白诊断有较好的帮助。S-100是一组可溶性、相对低分子质量、高酸性卵白，属神经胶质细胞特异性卵白，亦可存在于神经纤维中。在研究肠神经体系的形态特性及布局特性中，S-100有精良的表达成效1。本研究中10例正常比拟者肠壁与25例HD患儿扩张段肠壁肌间和黏膜下层均可见S-

10、100阳性染色的神经纤维丛中有细胞状“空缺区，与HE切片比力后创造，细胞状“空缺区总是出如今神经节细胞所处的位置。在25例HD患儿局促段肠壁的肌间和黏膜下层中，S-100染色细胞状“空缺区均未不雅察到。因此笔者以为，S-100染色中出现的细胞状“空缺区是神经节细胞的特性性表示2。S-100可作为不雅察神经节细胞的指标之一。AD是一种天冬氨酸酶，属于溶酶体酸性卵白酶家属，其在细胞内卵白质的剖析代谢中起着关键作用，可催化很多神经肽的落解，如P物质、生长抑素、B脂卵白和血管告急素原。由于AD在人类脑构造神经元、体内神经节细胞中含量富厚，故可作为肠壁神经节细胞的标识表记标帜3。本研究的效果与其他学者3

11、，4报道的同等。即在结肠壁中，AD的免疫反响性仅范围于神经节细胞，神经纤维和神经胶质细胞均无阳性染色。本组25例HD患儿局促段肠壁全部缺乏AD阳性表达，而10例比拟组和25例HD患儿扩张段肠壁均可见AD染色阳性的神经节细胞。这与通例病理查抄效果一样等。说明AD对神经节细胞具有较高的特异性表达。在新生儿的病例中，AD的阳性表达同样轻易看到。构造学研究已经证明，正凡人的肠内神经节细胞数量出生后已结实，但有一个成熟历程，即随着年事增长，大而成熟的神经节细胞数量渐渐增多，不成熟的神经节细胞比例淘汰5。在本研究的效果中不雅察到，固然神经节细胞对AD均为阳性表达，但差异部位的阳性染色程度不同等，表示为神经

12、节细胞胞质中棕黄色颗粒物数量与颜色深度均存在差异。肌间神经丛内神经节细胞染色一样平常强于黏膜下神经丛。比力HE切片与AD染色切片还创造，在HE切片中不雅察到的细胞核大、细胞质富厚的神经节细胞表达AD较强，而细胞核孝细胞质较少或不显着的神经节细胞对AD的表达相对较弱。这大概与神经元发育不成熟或发育不良有关4。也可以说明染色深浅差异的神经节细胞其成熟程度差异，成熟的神经节细胞染色较深。因此，笔者以为AD不但可以作为神经节细胞的特异性标识表记标帜物，还可以检测肠道神经体系中神经节细胞的成熟程度，作为对临床预后环境评估的指标。对付手术扩张段近端切缘中无AD表达或神经节细胞AD阳性表达程度较低的病例，应

13、该严密不雅察，以免术后并发肠神经发育不良症引起肠梗阻。在全部标本的黏膜层和黏膜下层可看到少数AD弱阳性表达的细胞散在漫衍。经D68染色证明为构造细胞。固然构造细胞对AD也为阳性表达，但构造细胞与神经节细胞不难区分：(1)构造细胞常有长而扭曲的细胞核，缺乏显着的核仁；神经节细胞核大而圆似“枭眼状，核仁清楚。(2)构造细胞常单个存在或与淋巴细胞同时出现，阔别神经丛和神经纤维3，4。研究效果中神经纤维束非常增生的缘故原由如今还不完全清楚，有学者以为非常增生的神经纤维束大概来自肠壁外的神经构造2。固然这些非常增生的神经纤维束对HD不具诊断性意义，但是假设在病变肠壁的肌间或黏膜下层都寻不到这种扭曲粗大的神经纤维束，那么诊断HD应该慎重。综上所述，AD是肠神经节细胞特异性较高的标识表记标帜物，对差异成熟程度的神经节细胞表达强度差异，不但可以特异性标识表记标帜神经节细胞，并且可以断定神经节细胞的成熟程度，用于评估预后。S-100对神经节细胞阴性表达可以形成具有特性性的细胞状“空缺区，与AD的阳性表达比拟不雅察，同时应用，对HD的诊断有较大的帮助。这两种抗体的免疫组化染色均能用于通例