高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定

1、5/52019年高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定查字典生物网的小编给各位考生整理了2019年高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定 ,希望对大家有所帮助。更多的资讯请持续关注查字典生物网。小编推荐：高考成绩不理想 ,专科成绩也能上本科高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定一、实验原理DNA在氯化钠溶液中的溶解度 ,是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时 ,DNA的溶解度最大 ,浓度为 014 molL时 ,DNA的溶解度最低。利用这一原理 ,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。DNA不溶于95%的酒精溶液 ,但是细胞中的某些物质那么可以溶于酒精

2、溶液。利用这一原理 ,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。DNA中含有脱氧核糖 ,能与二苯胺沸水浴反响生成蓝色物质 ,因此 ,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定二、目的要求1. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法。2. 观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。材料用具材料：活鸡或鲜血鸡血。仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片 ,玻璃棒 ,滤纸 ,滴管 ,量简100 mL ,l个 ,烧杯100 mL ,l个 ,50 mL、500 mL各 2个 ,试管20 mL ,2个 ,漏斗 ,试管夹 ,纱布。试剂：酒精的体积分数为95的溶液实验前置于冰箱内冷却24 h ,蒸馏水 ,

3、柠檬酸钠的质量浓度为 01gmL的溶液 ,氯化钠的物质的量浓度分别为 2 molL和0015 mol/L的溶液 ,二苯胺试剂。高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定三、方法步骤实验前需要制备鸡血细胞液由教师完成 ,制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 01 gmL的溶液抗凝剂100 mL ,置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血约180 mL注入烧杯中 ,同时用玻璃棒搅拌 ,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合 ,以免凝血。然后 ,将血液倒入离心管内 ,用 1000 rmin的离心机离。2min ,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时 ,用吸管除去离。心管上部的澄清液 ,就可以得到鸡血细胞液。1

4、.提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL10mL ,注入到50 mL烧杯中。向烧杯中参加蒸馏水20 mL ,同时用玻璃棒充分搅拌5 min ,使血细胞加速破裂。然后 ,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。2.溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL参加到滤液中 ,并摇动烧杯 ,使其混合均匀 ,这时DNA在溶液中呈溶解状态。3.析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓参加蒸馏水 ,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌 ,这时烧杯中有丝状物出现 ,注意观察丝状物呈什么颜色。继续参加蒸馏水 ,溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止参加蒸馏水

5、这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 molL。4.滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗 ,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中 ,含 DNA的粘稠物被留在纱布上。5.将DNA的粘稠物再溶解取 1个 50 mL烧杯 ,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 molL的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中 ,用玻璃择不停地搅拌 ,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。6.过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100 mL烧杯 ,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液 ,DNA溶于滤液中。7.提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中 ,参加冷却的、酒精的体积分数

6、为 95的溶液 50mL使用冷却的酒精 ,对DNA的凝集效果较佳 ,并用玻璃棒搅拌 ,溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起 ,并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA 。注意观察丝状物是什么颜色的。8.DNA的鉴定取两支20 mL的试管 ,各参加氯化钠的物质的量浓度为0015 molL的溶液5 mL ,将丝状物放入其中一支试管中 ,用玻璃棒搅拌 ,使丝状物溶解。然后 ,向两支试管中各参加4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后 ,将试管置于沸水中加热 5 min ,待试管冷却后 ,观察并且比拟两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在?实验报告册?上。高考生物必备知识点

7、：DNA的粗提取与鉴定1.DNA的粗提取与鉴定实验原理(1)粗提取原理：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时 ,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时 ,DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时 ,DNA溶解度又增大。(2)纯化原理：DNA不溶于酒精 ,但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。(3)鉴定DNA原理：在沸水浴条件下 ,DNA遇二苯胺会被染成蓝色。2.实验材料的选择及处理(1)不选择猪血等哺乳动物的血液 ,因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。(2)需要在鸡血中参加抗凝剂柠檬酸钠溶液 ,防止血液凝固。(3)需除去鸡血中的血浆 ,因为血浆中无DNA。特别

8、提醒：不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时 ,应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原那么。3.生物实验过程步骤：提取细胞核物质溶解核内DNA析出DNA粘稠物滤取含DNA的粘稠物DN A粘稠物的再溶解过滤含有DNA的氯化钠溶液提取含杂质较少的DNADNA的鉴定。操作要点：(1)2次加蒸馏水：第一次是在是为了使血细胞吸水膨胀破裂 ,加水后必须充分搅拌使血细胞充分破裂;第二次加蒸馏水是为了稀释氯化钠溶液。(2)3次加氯化钠溶液：第一次加氯化钠后 ,必须充分晃动烧杯 ,使二者混合均匀 ,加速染色质中DNA与蛋白质别离 ,使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中;第二次加氯化钠溶液也是为了DNA的

9、再溶解 ,这时溶液中的蛋白质含量已很少;第三次加氯化钠溶液还是为溶解DNA。(3)6次搅拌：除最后一次搅拌外前5次搅拌均朝一个方向: ,并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中 ,各步搅拌都要轻缓玻璃棒 ,不要直插烧杯底部防止DNA分子断裂。(4)3次过滤：第一次过滤 ,留滤液;第二次过滤 ,留粘稠物;第三次过滤 ,留滤液。注意这3次过滤都用纱布 ,获得沉淀物或粘稠物的通常为多层 ,获得滤液的纱布层数适当减少。特别提醒：假设以植物为实验材料 ,步骤上大致相同 ,在材料的处理上有几点不同：一是增加研磨步骤 ,目的是破坏细胞壁;二是参加洗涤剂 ,目的是溶解细胞膜及核膜;三是加食盐 ,可加速细胞膜及核膜的破裂。4.DNA的粗提取与鉴定实验考前须知(1)用冷酒精浓缩和沉淀DNA时所用的95%酒精 ,必须经过充分预冷后才能使用 ,冷酒精与含 DNA的氯化钠溶液体积比是2：1 。如果用冷酒精处理后 ,悬浮于溶液中的丝状物较少 ,可将混合液放于冰箱中再冷却几分钟 ,然后再用玻璃棒卷起丝状物。(2)鸡血细胞破碎以后释放的DNA ,容易被玻璃容器吸附 ,由于细胞内DNA的含量本来就比拟少 ,再被玻璃容器吸附去一局部 ,提取到的DNA就会更