医学免疫学- 免疫学检测技术课件

1、免疫学检测技术Immunodiagnosis第一节 抗原或抗体检测I. Detection of antigens or antibodies一、抗原-抗体反应的特点Specificity（一）高度特异性 Cross-reaction: common antigen 交叉反应：共同抗原 Antiserum absorption 抗血清吸收 1st antibody & 2nd antibody 一抗；二抗Visibility（三）可见性的条件Compatible concentrations of antigen and antibody combined in proportion at o

2、r near equivalence Antigen: multivalent; Antibody(IgG): divalent 比例适合：抗原多价，抗体2价。交织成网。Ph value; Temperature; Ionic concentration 条件适宜：酸碱度、温度、离子浓度Adequate concentration, binding strength; reaction time 足够浓度、结合强度和反应时间Prozone phenomenon前带现象二、抗原-抗体反应的应用Terms 术语Serological reaction 血清学反应Qualitative analys

3、is 定性Quantitation 定量Orientation 定位Titration 滴定Titer 效价/滴度三、常用的抗原-抗体反应技术经典技术中和反应补体结合反应凝集反应沉淀反应HaemagglutinationIII ) Immunolabelling Techniques （三）免疫标记技术标记物： 荧光素、酶、放射性核素、电子致密物质、化学发光物质标记对象：抗原或抗体用途： 定性、定量、定位免疫荧光法（IFA ） 荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位 （1）直接荧光法 （2）间接荧光法： 荧光素一抗 荧光素二抗 对每种抗体作标记 不必标记每种抗体 特异 敏感 测Ag 测

4、Ag/Ab2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原（2）间接法ELISA： 查抗体（3）BAS-ELISA ： Biotin-Avidin-酶放大系统（4）ELISPOT测定法： _包被物 待测物 测定结果_ 抗CK抗体 CK分泌细胞 单一CK 已知抗原 B细胞 特异B细胞 （5）酶免疫组化* 酶标抗体 + 组织/细胞（未知抗原） + 形态学检查*免疫组化技术：可对抗原定性、定量、定位 酶免疫组化： HRP免疫金银组化： 胶体金颗粒免疫电镜技术： HRP、胶体金、铁蛋白双抗体夹心法、间接法ELISA间接法ELISAELISA操作图可调移液器8孔道

5、可调移液器3. 放射免疫测定（RIA） 常用 125I，测定微量物质4. 化学发光免疫分析 常用 鲁米诺，测定超微量物质5. 免疫印迹法（Western Blotting） 先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定（二）淋巴细胞鉴定免疫荧光法 常用间接法测CD3/CD4/CD8、mIgM/mIgD2. 磁珠分离法 如抗CD4抗体交联微珠可分离CD4与CD83. 流式细胞术（Flow Cytometry, FCM） 可分析细胞大小、核型、表面分子（多种荧光标记） 检测各类免疫细胞及其比率 白血病、淋巴瘤的免疫学分型 细胞分选二、淋巴细胞功能测定（一）

6、T细胞功能测定 1. T细胞增殖试验： 丝裂原/抗CD3刺激/特异抗原细胞增殖 （1）同位素掺入法 （2）MTT法 （3）形态观测法 2. 细胞毒试验 CTL、NK细胞杀伤靶细胞 （1）51Cr 释放法 （2）凋亡细胞检查法 阶梯状酶切图谱 TUNEL法 FCM（二）B细胞功能测定B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM2. 抗体形成细胞检测 溶血空斑试验 ELISPOT试验（三）吞噬细胞功能的测定趋化功能测定 Boyden 小室2. 吞噬功能测定 III. Application of immunological techniques第四节 免疫学检测方法的应用1. Assess

7、ment and selection 一、免疫学检测方法的评估与选择 Reliability: true vs false 可靠性 ( gold standard*=真阴性率与真阳性率) * Specificity= 真阴性/（真阴性+假阳性）x 100% * Sensitivity= 真阳性/（真阳性+假阴性）x 100% Safety 安全性 Simplicity 简易性 Saving of time and money 经济性Selection as per requirement and availability 依据需要与可能选择Screening: 初筛 high sensitivity first, to avoid case missing 避免漏诊Diagnosis: 确诊 high specificity first, to avoid misdiagnosis 避免误诊2. Clinical application 二、免疫学检测方法的临床应用1) Infectious diseases （一） 感染性疾病 pathogen 病原体的特异抗原或抗体检测2) Immunodeficiency diseases （二）免疫缺陷病 Ig, complement, i