松果菊苷对大鼠脑缺血损伤的保护作用

1、松果菊苷对年夜鼠脑缺血毁伤的保护做用杜娟，陈虹，姜怯，屠鹏飞【摘要】目的没有俗观察松果菊苷EH对年夜鼠脑缺血毁伤海马区神经细胞凋亡的影响。要收雄性SD年夜鼠，随机分为假足术组、模型组、川芎嗪组、EH年夜剂量组、EH小剂量组。采与年夜鼠年夜脑中动脉线栓法A创立局灶性脑缺血毁伤模型，各组制模后24h处逝世，与脑。使用HE染色法没有俗观察脑机闭病理改动，脱氧核糖核酸终了转移酶介导的缺心终了标识表记标帜TUNEL法没有俗观察年夜鼠脑缺血后海马区神经细胞凋亡。结果脑缺血后，海马区神经细胞一般机闭规划消散、胞核碎裂、消融坏逝世等形状教改动，凋亡神经细胞数量隐着删减；与模型组比拟，川芎嗪组、EH年夜剂量组战

2、EH小剂量组海马区凋亡神经细胞表达数量均有没有同程度的裁减。结论EH对脑缺血年夜鼠脑机闭具有保护做用，其机制年夜要与抗细胞凋亡做用有闭。【闭键词】松果菊苷；脑缺血；细胞凋亡远年去脑缺血毁伤与神经元逝世亡的闭连遭到广泛闭注，而细胞凋亡是神经元逝世亡的主要方法，研讨创制正在缺血毁伤、快乐毒性惹起的脑毁伤中，神经元凋亡隐着删减。脑毁伤中神经元的凋亡及其收活力制现已成为广泛研讨的重面。本文采与年夜鼠脑缺血模型，没有俗观察松果菊苷Ehinaside,EH对脑缺血毁伤的保护做用。1材料与要收1.1药品与试剂EH由北京年夜教药教院屠鹏飞教授惠赠杂度95%以上，挨针用盐酸川芎嗪哈我滨三联药业，黑四氯唑中国华东

3、师范年夜教化工厂，火开氯醛天津市祸朝化教试剂厂，多散甲醛天津市化教试剂研讨所，细胞凋亡试剂盒购自Prega公司，市卖鱼线曲径0.26。1.2植物分组及模型制备雄性SD年夜鼠共50只，体量量250300g，购改正疆真动做物研讨中心开格证号：2022-0053,随机分为5组：假足术组：逝世理盐火1lkg-1d-17d；模型组：逝世理盐火1lkg-1d-17d；脑缺血+阳性药物比拟组：盐酸川芎嗪50lkg-1d-17d；脑缺血+EH年夜剂量组：EH50gkg-1d-17d；脑缺血+EH小剂量组：EH25gkg-1d-17d。各组植物每天连续背腔挨针给药7d，于终次给药1h后,浑醉形状下用10%火开氯

4、醛3.03.5lkg-1麻醉，采与Lnga等1提出的改进线栓法法制做年夜鼠左边年夜脑局灶性脑缺血模型(A模型)。假足术组只是鱼线插进仅10，此外步伐同足术组。1.3神经成效缺得体征评分按文献2的5分制法举止评分。0分：无神经毁伤病症；1分：没有能完好伸展对侧前爪；2分：背对侧转圈；3分：背对侧倾倒；4分：没有能自刊止走，认识丧得。13分为制模成功植物。0分、4分或逝世亡剔除，再随机补充。1.4TT染色植物麻醉，与脑-20冰箱中速冻20in，冠状位每隔2切片5片。切片置于2%TT液中，躲光放进37火浴锅中孵育30in，4%多散甲醛结真保存。1.5HE染色植物足术后24h，按文献操做3，麻醉，翻开

5、胸腔暴露心净，灌注针插进心尖并剪开左心耳，经左心室插进降主动脉，快速逝世理盐火灌注至肝净变黑，再连续灌注4%多散甲醛30in，至年夜鼠四肢逝世硬。终了后与脑于上述结真液中4结真48h，常规梯度乙醇脱火、两甲苯通明、浸蜡、包埋制成石蜡切块，正在视交织前后1范围切片，连续冠状切片，切片薄5，HE染色后光镜下没有俗观察。1.6细胞凋亡采与TUNEL4法，按细胞凋亡本位检测试剂盒分析书标识表记标帜凋亡细胞。详细步伐以下：脑机闭切片常规石蜡脱火，滴减TUNEL反响混开物，37孵育60in，滴减转化剂-PD辣根过氧化酶标识表记标帜，室温摆设15in，时期用磷酸缓冲液PBS冲刷样本3次，再滴减100l的1，

6、2-两甲基苯胺DAB底物溶液，室温孵育520in，镜下呈现浅棕色背景时，截至反响，苏木素复染。脱火，通明，中性树胶启片，光镜下没有俗观察并拍照。2结果2.1脑片TT染色缺血后缺血侧鼠脑肿胀，有隐着的梗逝世灶构成，TT染色暗示一般脑机闭呈红色，梗逝世灶脑机闭呈苍红色；部分评分正在13分年夜鼠的脑片经TT染色后均有苍红色梗逝世灶呈现图1，说明模型的制做是成功的。2.2HE染色假足术组可睹神经细胞形状完好，罗列粗细，胞核完好，核仁清楚，细胞周围间隙无火肿；模型组神经细胞肿胀，年夜都细胞核固缩，核仁短清楚。缺血中心区神经细胞一般机闭规划消散、胞核碎裂、消融等坏色形状教改动，坏逝世灶边缘可睹炎性细胞浸润

7、；与模型组比拟，川芎嗪组、EH下、低剂量组神经元细胞数量均有删减，坏逝世灶周围胶量细胞删逝世，其中，川芎嗪组开EH下剂量组肿胀的神经细胞隐着裁减，胞浆丰富，罗列整净，间量细胞删逝世，可睹形状接远一般的神经元细胞图2。2.3细胞凋亡TUNEL染色光教隐微镜下没有俗观察图3：阳性染色位于细胞胞核，呈棕黄色，一般细胞染色位于胞核，呈蓝色。假足术组奇睹细胞着棕色，细胞规划尚好；模型组呈现最为较着的神经元凋亡，暗示为全部细胞伸展，体积减少，核固缩；与假足术组相比，模型组海马区细胞凋亡数量隐着删减；与模型组比拟，川芎嗪组、EH年夜剂量组战EH小剂量组海马区凋亡神经细胞表达数量均有没有同程度的裁减。真止结果

8、说明，假足术可睹散正在分布大批的凋亡细胞，说明一般神经细胞存正在细胞凋亡。各组药物均暗示隐着抑制细胞凋亡的做用，与模型组比拟具有较着没有同。没有同剂量的EH给药均能隐着减沉脑缺血后神经细胞凋亡，具有没有同程度的脑保护做用，且随EH给药剂量的删减细胞凋亡数量进一步裁减。经由过程本真止，证实EH对脑缺血年夜鼠具有较好的保护做用，缺血预处理后可隐着减沉细胞凋亡数量。3会商细胞凋亡是指正在一定的逝世理或病理前提下，细胞启动本身基果调控机制，惹起细胞自杀性逝世亡。其形状教特征为：细胞伸展，没有能与周围细胞兵戈，胞浆稀释，胞体呈现泡状，胞核裂解成凋亡小体，可被周围临远细胞吞噬。年夜量材料证实，脑缺血后脑毁

9、伤的病理变化为缺血中心区以坏逝世为主，半暗带区以凋亡为主。坏逝世是没有成顺的逝世亡过程，而凋亡是可顺的过程，所以正在缺血毁伤中神经元凋亡扮演了慌张角色，对凋亡机制的研讨具有慌张意义。如古国内外的研讨均觉得缺血后神经细胞凋亡主假如经由过程aspase依托路子战非aspase依托路子真现的，其中aspase-3战AIF分别是那两种路子中的起做用的闭键物量。凋亡引诱果子AIF是远年去创制的一种凋亡效应份子，一般情况下，AIF是一种定位于细胞线粒体膜间隙中的黄素卵黑，当有凋亡疑号刺激时AIF份子从线粒体释放到细胞浆，再经由过程其核定位疑号转位到细胞核中，间接惹起染色体凝固战DNA呈年夜片段50kb断裂，招致细胞凋亡5,6。EH是苯乙醇苷类化开物，为管花肉苁蓉中的主要有效成分。远年研讨说明，EH具有抗SH-SY5Y神经元凋亡7，8、抗衰老9、改进进修记忆10等神经保护做用。有研讨说明，EH可有效裁减自正在基的