FLIP、NFκB在胃癌中的表达及相关性研究

1、FLIP、NF-B在胃癌中的表达及相关性研究【摘要】目的研究FLIP、NF-B在胃癌及癌前病变中的表达及两者之间的关系。方法运用免疫组织化学染色SP法检测FLIP、NF-B在45例胃癌与60例癌前病变组织中的表达。结果胃癌FLIP、NF-B蛋白阳性表达分别为82.2%37/45、62.2%28/45，明显高于肠化生的30.0%9/30、23.3%7/30P0.01，与异型增生40.0%12/30、33.3%10/30P0.01。FLIP表达与胃癌临床分期及淋巴结转移相关，与肿瘤分化程度无明显相关性；NF-B表达与胃癌分化程度、临床分期及淋巴结转移相关P0.05。NF-B与FLIP呈正相关(r=

2、0.52，P0.05)。结论FLIP与NF-B异常表达与胃癌的发生开展及预后亲密相关；NF-B与FLIP在胃癌形成中可能起协同作用。【关键词】胃肿瘤AStudyfRelatinshipbeteenNulearFatrKappaB(NF-B)andFLIE-inhibitryPrtEin(FLIP)ExpressinandGastriarinaAbstrat:PurpseTexplretherelatinshipfFLIE(FADD(Fas-assiateddeathdain)-likeIL-1beta-nvertingenzye)-inhibitryprtein(FLIP)andNF-Bexp

3、ressinandgastriarinaandpreaneruslesins.ethdsExpressinfFLIPandNF-Bin45asesithgastriarinaand60asesithpreaneruslesinasdetetedbyiunhistheialethd(SPethd).ResultsPsitiveexpressinfFLIPandNF-Bingastriarinaas82.2%37/45and62.2%28/45;inintestinaletaplasia,30.0%9/30and23.3%7/30;andindysplasia,40.0%12/30and33.3%

4、10/30respetivelyithsignifiantdiffereneP0.01.ExpressinfFLIPrrelatedithlinialstagingandlyphndeetastasis,ntithdifferentiatindegreeingastriarina.ExpressinfNF-Brrelatedithdifferentiatindegree,linialstagingandlyphndeetastasisingastriarinaP0.05.ThereasapsitiverrelatinbeteenFLIPandNF-B(r=0.52，P0.05.nlusinAb

5、nralexpressinfFLIPandNF-Blselyrrelatesithgastriaringenesisandprgnsis.NF-BandFLIPayplayasynergistirleingastriaringenesis.Keyrds:gastrineplass;FLIE-inhibitryprtein;nulearfatr-kappaBFas相关死亡区域蛋白样白介素-1转换酶抑制蛋白(FLIE-inhibitryprtein，FLIP)是近年来发现的一类含有死亡构造deatheffetdains，DED的凋亡抑制蛋白，研究发现FLIP异常表达与许多恶性肿瘤发生开展相关。核因

6、子-B是一种具有多向调节功能的转录因子，参与许多基因的转录调控。近年来研究发现它可能在肿瘤的发生开展中具有重要作用。关于FLIP与NF-B在胃癌及癌前病变中表达相关性的研究国内少有报道。我们运用免疫组化研究FLIP、NF-B在胃癌与癌前病变中的表达及其相关性，以讨论其在胃癌发生、开展中的可能作用。1材料与方法1.1一般资料45例胃癌和60例癌前病变组织分别来自南华大学附属二医院2002年6月2022年6月手术切除与胃镜下活检标本，胃癌患者术前均未行放、化疗，术后均经病理确诊。胃癌患者男性28例，女性17例，年龄34岁76岁，中位年龄54.6岁。按全国胃癌协作组病理组制定的方案：其中早期胃癌12

7、例，进展期33例；高中分化32例，低分化和未分化23例；淋巴结转移者30例，无淋巴结转移者15例。中重度异型增生与中重度肠化生各30例，男性35例，女性25例；年龄28岁74岁，中位年龄55.4岁。1.2试剂与仪器兔抗FLIP多克隆抗体at.#-1552购于Nearkers公司。超敏SP试剂盒Kit-9710、即用型兔抗NF-kappaB多克隆抗体(RAB-0531)及DAB显色试剂盒购于福建迈新生物工程公司。1.3方法石蜡切片常规脱蜡水化，柠檬酸盐缓冲液煮沸抗原修复，FLIP工作液浓度1150，NF-B为即用型，免疫组化按照SP检测试剂盒说明进展，所有样本均设阴性对照以磷酸盐缓冲液替代一抗。

8、1.4断定标准FLIP阳性为胞质染成黄色或棕黄色，NF-B阳性为胞质与胞核均染成黄色或棕黄色，以胞质为主，每张切片随机选取5个高倍视野，参照相关文献1，FLIP阳性率30%为阳性，阳性率30%为阴性；NF-B阳性率5%为阴性，5%为阳性。FLIP、NF-B表达半定量分析采用BLTD-2080病理图文分析系统，显微镜下每张切片摄取10个高倍视野，输入分析系统内，计算FLIP、NF-B的表达强弱以光密度值A值表示。1.5统计学处理采用统计软件SPSS10.0，两样本率比较用2检验，两因素的相关分析用直线相关分析(Pearsn相关系数)，以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1胃癌与癌前病变组织

9、中FLIP、NF-B阳性表达率FLIP蛋白呈棕黄色细颗粒，定位于细胞质，胃癌组织染色阳性细胞成团分布，癌前病变组织FLIP染色浅。NF-B阳性染色见于胞核与胞质，但以胞质为主，从癌前病变到胃癌组织，胞核阳性染色强度逐渐增强。胃癌组织中FLIP、NF-B阳性表达率分别为82.2%37/45、62.2%28/45，异型增生与肠化生阳性表达率分别为40.0%12/30、33.3%10/30与30.0%9/30、23.3%7/30，胃癌组与癌前病变组之间差异有统计学意义P值均0.01。2.2FLIP、NF-B表达与胃癌临床病理特征关系胃癌进展期与淋巴结转移者FLIP阳性表达率分别为90.9%30/33

10、和93.3%28/30，明显高于早期与无淋巴结转移者，其阳性表达率分别为58.3%7/12和60.0%9/15，差异有统计学意义P0.01，而与癌细胞分化程度及年龄、性别、肿瘤大小无相关性P0.05。NF-B阳性表达率在进展期胃癌、淋巴结转移组及低分化胃癌组分别为72.7%24/33、73.3%22/30和71.9%23/32，明显高于早期、无淋巴结转移及高分化胃癌组，其阳性表达率分别为33.3%4/12、40.0%6/15和38.5%5/13，差异有统计学意义P0.05，而与年龄、性别及肿瘤大小无相关性见表1。2.3胃癌组织NF-B与FLIP蛋白表达关系两者表达相关性分析显示，37例FLIP

11、蛋白表达阳性者中，NF-Bp65蛋白表达阳性例数为27例，8例FLIP蛋白表达阴性者中，NF-Bp65蛋白阳性例数为1例。经计算机自动测量并计算阳性表达平均光密度值A值得：NF-Bp65蛋白在胃癌中表达的光密度值为0.260.04，FLIP蛋白在胃癌中表达的光密度值A值为0.270.08。经Pearsn相关分析显示两者表达呈正相关r=0.52，P0.05。3讨论胃癌的发生是一个多基因、多阶段、渐进性进展的复杂过程，细胞凋亡、增殖调控异常参与肿瘤的发生和开展。FLIP是近年来发现的一类含有DED的凋亡抑制蛋白，先前的研究已证实FLIP与许多恶性肿瘤如食管癌、大肠癌和肺癌等发生、开展亲密相关，且把

12、FLIP的表达程度作为病程进展指标之一，并且把它作为一种新的肿瘤预后因素2，3。本研究结果显示：胃癌中FLIP阳性表达率为82.2%，与国外相关报道根本一致1，但表达率略偏低，可能与所选标本有一些相对早期胃癌的关系。从肠化生30.0%至异型增生40.0%，其表达率呈上升趋势，这种表达率递增规律与胃癌的演变开展过程相符合。进展期胃癌中FLIP阳性表达率90%明显高于早期胃癌58.3%，提示FLIP表达可能与胃癌的临床进展有关，但未发现其表达与胃癌的分化程度有关，这与FLIP在非小细胞肺癌表达研究一致4。伴淋巴结转移和或血行转移的胃癌组织，其FLIP阳性表达率与表达强度明显高于无淋巴结转移60%或

13、血行转移者。而FLIP阳性表达率与年龄及肿瘤大小均无关P0.05，由此可见，FLIP高表达与肿瘤转移亲密相关，表达率越高提示预后越差，可作为胃癌患者预后指标之一。NF-B是一类具有多向性转录调节功能的核蛋白因子，通常由p50和p65组成异源二聚体。当受到细胞因子等刺激时NF-B进入胞核，与NF-B位点结合，启动靶基因转录，诱导相关基因表达。近年来研究发现许多肿瘤中可见NF-B异常活化5，且研究说明NF-B在细胞增殖与凋亡中具有核心作用6。我们的研究中NF-B亚单位p65蛋白阳性表达位于胞质和胞核，以胞质为主，这与p65蛋白具有失活和活化两种状态相一致，其核内表达程度可间接反响其活性。实验结果显

14、示，胃癌组NF-Bp65表达62.2%明显增强，与肠化生23.3%、异型增生30%组相比具有显著性差异P0.05，提示其异常表达可能在胃癌发生开展过程中起作用，其表达上调是胃癌发生中的早期分子事件。低分化和未分化71.9%、进展期72.7%、有淋巴结73.3%及血行转移胃癌其NF-Bp65阳性表达率显著高于高中分化38.5%、早期33.3%及无淋巴结40%血行转移组P0.05，这说明NF-Bp65表达随肿瘤恶性度增加、临床分期越晚而增加，因此其表达程度可间接反映胃癌的恶性程度及患者预后。关于NF-B致癌机制，目前倾向于通过上调抗凋亡基因7或诱导TRAF和IAP等而拮抗凋亡，亦可通过调节肿瘤细胞

15、增殖或通过上调细胞周期蛋白等表达促进肿瘤的发生、开展。关于NF-B与FLIP在胃癌及癌前病变中的表达及其相关性尚少有报道，有研究认为NF-B的异常表达与活化可诱导FLIP的表达，而FLIP在NF-B抗凋亡过程中起着重要作用8，9。kan等10在研究肝细胞癌时发现-FLIP的过表达可激活NF-B，而-FLIP表达下调可减弱TNF-等诱导的NF-B的活化。我们的实验发现，在胃癌形成过程中FLIP与NF-Bp65表达之间存在着一定的正相关关系r=0.52，P0.05，说明两者在胃癌发生开展中可能存在协同作用，共同参与胃癌的形成。【参考文献】1LeeSH,KiHS,KiSY,etal.Inreased

16、expressinfFLIP,aninhibitrfFas-ediatedapptsis,instahanerJ.APIS,2022,111(2):309-3142Djerbi,SrepantiV,atrinaAI,etal.Theinhibitrfdeathreeptrssignaling,FLIE-inhibitryprtEindefinesanelassfturprgressinfatrsJ.JExped,1999,190(7):1025-10323高思海,潘铁成,赵金平,等食道鳞癌FLIP表达与细胞凋亡相关J世界华人消化杂志,2022,126:1470-1473.4曹勇,李清泉,钟立厚

17、,等FLIP在非小细胞肺癌中的表达及其与细胞凋亡的关系J中国肺癌杂志,2022,61:51-545SasakiN,risakiT,HasshizueK,etal.Nulearfatr-Bp65(RelA)transriptinfatrisnstitutivelyativatedinhuangastriarinatissueJ.linanerRes,2001,712:4136-4142.6AggaralBB.Nulearfatr-kappaB:theeneyithinJ.anerell,2022,6(3):203-208.7angY,GuttridgeD,ay,etal.NF-kappaBinduesexpressinftheBl-2hlgueA1/Bfl-1tpreferentiallysuppresshetherapy-induedapptsisJ.lellBil,1999,19(9):5923-5929.8iheau,LensS,Gaide,etal.NF-kappaBsignalsinduestheexpressinf-FLIPJ.lellBil,2001,21(16):5299-5305.9KreuzS,SiegundD,Sheur