CK20和NMP22在尿路上皮癌中的表达和意义

1、CK20和NMP22在尿路上皮癌中的表达和意义【摘要】目的讨论细胞角蛋白20k20和核基质蛋白22np22在尿路上皮癌中的表达和意义。方法应用rt-pr法和酶联免疫法elisa分别检测30例尿路上皮癌26例移行细胞癌、2例鳞癌、1例腺癌、1例内翻性乳头状癌、8例正常尿路上皮组织标本中k20rna表达和尿中np22的程度。结果k20rna在30例尿路上皮癌中阳性表达率为93.3%。np22在尿路上皮癌中的含量明显高于对照组，分别为20.79.8u/l和6.10.8u/l，p0.01，而且与肿瘤病理分级和临床分期明显相关。np22诊断尿路上皮癌的敏感性、特异性分别为63.5%和65.9%。结论k2

2、0和np22的表达与尿路上皮癌的生物学行为亲密相关。np22与尿路上皮癌的恶性程度呈正相关，k20和np22可协同参与尿路上皮癌的生物学行为。【关键词】尿路上皮癌细胞角蛋白20核基质蛋白22expressinandsignifianefytkeratin20rnaandnulearatrixprtein22inurthelialanerlinyi，henen-xuan，qiangan-ing，etal.departentfurlgy，tianjinedialuniversitygeneralhspital，tianjin300052，hinaabstratbjetivetstudytherre

3、latinfytkeratin20k20rnaandnulearatrixprtein22np22inurthelialaner.ethdsrt-prasusedtdeterinetheexpressinfk20rnain30urthelialaners26transitinalellarinas，2phsphrtearinas，1adenarina，1invertedpapilla，and8nraltissues.np22levelsinurinaryeredeterinedbyanenzye-linkediunsrbentassayelisainurthelialaners.results

4、thepsitiveratefk20rnain30urthelialaneras93.3%.theediannp22valueassignifiantlyhigherthanntrlgrup20.79.8u/lversus6.10.8u/linurthelialaner.thevaluesfnp22asfundtbepsitivelyrrelatedtthedegreefthedifferentiatinandthelinialstagingftheurthelialaner.thesensitivityandspeifiityfnp22ere63.5%and65.9%，respetively

5、.nlusintheresultssuggestthatk20rnaandnp22playiprtantrleintheurreneanddevelpentfurthelialaner.thesefindingssuggestthatthedetetinfultiplefatrsisrevaluablethanthatfsinglefatr.keyrdsurthelialtur；ytkeratin20；nulearatrixprtein22尿路上皮癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其中90%以上为移行细胞癌，其特点为术后复发率高，往往复发后其恶性度增大，而且肿瘤的浸润和转移倾向增强，肿瘤的生物学行

6、为受多种基因的调控。近年发现k20只在胃肠道和尿路上皮中表达，核基质蛋白np对dna的复制、转录以及基因表达的调节起着重要作用。我们采用rt-pr法检测细胞角蛋白20k20rna的表达，应用酶联免疫法elisa测定尿路上皮癌中核基质蛋白22np22的程度，讨论其与尿路上皮癌的生物学行为的关系，现报告如下。1资料与方法1.1一般资料对2001年12月2002年6月我院收治的30例尿路上皮癌26例移行细胞癌、2例鳞癌、1例腺癌、1例内翻性乳头状癌及8例正常膀胱黏膜手术标本及尿液进展分析。男21例，女9例。年龄5879岁，平均64.317.4岁。按世界卫生组织h病理分级:g14例，g212例，g31

7、4例；国际抗癌联盟ui标准：浅表肿瘤14例tat1，浸润肿瘤16例t2t4。1.2k20rna的检测所有手术标本于液氮冻存后，转至-80冰箱保存。采用美国prega公司消费的rt-pr试剂盒进展检测，k20引物：senseprier:5-agaaaggtgaatatgg-3，antisenseprier:5-gatagttatgttagag-3。gapdh引物：senseprier:5-atggagtaaggtgag-3antisenseprier:5-gtgttaattt-5。pr扩增条件为942in，551in，722in，35个循环。用2%琼脂糖凝胶电泳检测pr扩增产物。1.3np22的

8、测定留取患者晨起第一次尿液，应用atriteh公司消费的双抗体夹层elisa方法测定尿路上皮癌患者尿液中的np22程度，建立r曲线，确定np22的临界值及诊断中敏感性和特异性的判断。1.4统计学方法用spss10.0统计软件包对数据进展统计分析。采用卡方检验和等级资料秩和检验，组间比拟使用等级资料ann-hitneyu秩和检验，p0.05被认为有统计学意义。2结果2.1k20rna和np22在尿路上皮癌中的表达k20rna和np22的表达与尿路上皮癌亲密相关。k20rna的表达与移行细胞癌、腺癌和内翻性乳头状癌有明显的相关性p0.05，而在鳞癌中无表达，它与肿瘤数目的多少和肿瘤复发程度无关。n

9、p22的表达以10.0u/l为临界值在移行细胞癌、鳞癌和腺癌中有较强的表达，而在内翻性乳头状癌中表达较弱，多发肿瘤与单发肿瘤相比，差异有显著性意义p0.01，但与肿瘤的复发程度无关p0.05，见表1。k20rna表达与肿瘤的病理分级、临床分期无明显相关性。np22的含量随着病理分级增高、临床分期的增加，而差异有显著性p0.01，见表2。2.2尿np22测定在尿路上皮癌诊断中的价值根据np22测定值做出r曲线，见图1，r曲线下面积为0.725，面积的标准误为0.052，尿np22用于诊断尿路上皮癌有显著性意义p=0.0162，面积的95%可信区间为0.6240.826，不包括0.5。以10.0u

10、/l为临界值。np22诊断尿路上皮癌的敏感性为63.5%，特异性为65.9%；阳性预测值为69.4%，阴性预测值为61.7%。2.3k20rna和np22表达在尿路上皮癌中的互相关系从表3可以看出，在k20阴性组中np22表达降低例数为50%，而在k20阳性组中np22表达降低例数为96.4%，卡方检验，两组之间差异有显著性p0.01。表1k20rna和np22在尿路上皮肿瘤中的表达表2尿路上皮癌中k20rna和np22与病理分级、临床分期的关系3讨论细胞角蛋白有角蛋白基因编码，是上皮细胞发生、分化、成熟过程中逐渐形成的细胞骨架中间丝成分，它包括至少20个成员。根据分子量和等电点的不同，可分为

11、酸性角蛋白k920和碱性角蛋白k18。不同的角蛋白以不同的组合方式协同表达13。k20由ll等于1990年别离鉴定，并用免疫组化技术证明k20只在胃肠道上皮细胞、尿路上皮表浅的伞状细胞及表皮erkel细胞中表达。klein等4认为k20rna仅在尿路移行上皮细胞癌中表达，正常尿路移行上皮细胞那么不表达；而k19那么在各种上皮均可表达，包括正常尿路上皮。本研究结果显示在30例膀胱上皮癌中，k20rna的表达与膀胱移行细胞癌t有明显的相关性，但是在鳞癌中无表达，提示k20rna是移行上皮癌的一个标志。但是它与尿路上皮癌的病理分级和临床分期无明显相关性，提示它与肿瘤的恶性度和浸润程度无关。尿细胞学检

12、查是简单、经济的方法之一，buhuensky等5运用rt-pr法检测膀胱移行细胞癌患者尿液标本脱落细胞中k20的表达，发现其敏感性较高，可达91%，但在各级别、各分期的肿瘤中表达无差异，说明k20表达与肿瘤分级、分期无关。应用rt-pr方法检测尿路移行上皮细胞癌患者尿脱落细胞k20rna的表达是一种敏感的、无创的尿路上皮癌随访方法。但是也有不同的观点，认为尿中k20的表达与肿瘤的分级亲密相关，高级别肿瘤，的敏感性为100%，低级别肿瘤，敏感性为71%80%。并认为高分级肿瘤由于细胞间黏附作用下降，因此尿路上皮更容易脱落；而低分级肿瘤或小的肿瘤由于尿液中的脱落细胞很少，加之尿液标本搜集方法的影响

13、，以致缺乏以检出6。因此，尿中k20rna的表达与肿瘤分级、分期的关系还有待更多的研究证实。k20的表达也可以作为尿路上皮癌预后的一个指标，rte等6分析了11例有t病史但目前病理诊断为良性病变者移行上皮化生6例、不典型增生2例、炎症3例中9例k20阳性，进一步随访6个月发现9例中有4例复发，提示k20阳性与早期复发有关。应用rt-pr方法检测尿路移行上皮细胞癌患者尿脱落细胞k20rna的表达，是一种敏感的、无创的尿路上皮癌随访方法。所以k20rna的表达与尿路上皮癌的发生、开展亲密相关，是膀胱癌有潜在价值的肿瘤标记物，具有早期诊断和判断预后的价值，有广泛的研究和应用前景。核基质蛋白np是20

14、世纪70年代中期发现的一种以细胞核rna-蛋白质为骨架的三维网状构造蛋白，参与维持细胞核的构造和功能，对dna的复制、转录，rna合成，以及基因表达的调节起着重要作用，在肿瘤的形成中具有重要功能7，8。np随细胞复制的不同阶段不断发生变化，核基质成分也随着细胞转化和分化而出现或消失某些特异性蛋白。首先发如今体外培养的膀胱癌细胞株中，np22的浓度比正常膀胱移行上皮细胞至少高25倍，是尿路上皮特异性肿瘤标志物9。此后在乳腺、结肠、骨骼组织中也相继发现了特异性np的表达。np22在细胞凋亡后由细胞核释出，以可溶性复合物或片段的形式存在于尿中，利用特异性np22单克隆抗体免疫测定的方法可迅速、定量地

15、检测尿中np22含量，用于膀胱癌的诊断和术后监测。本研究结果显示，np22的检测与膀胱癌亲密相关，其表达程度随膀胱癌病理分级和临床分期的增高而升高，是膀胱癌浸润和复发的一个重要指标。病理分级和临床分期高的肿瘤由于肿瘤细胞间黏附力的降低，肿瘤组织更容易坏死、脱落，更容易被检出，所以np22的表达在一定程度上反映了肿瘤的恶性程度和预后。np22诊断膀胱癌的最适临界值与其敏感性亲密相关。slay等10以10.0u/l作为肿瘤复发的参考值，敏感性为70%其中浸润性肿瘤为100%，特异性为79%。但是也有学者以12.0u/l和6.0u/l作为参考值，也得出相似的结论11，12，所以如今关于np22的最适

16、临界值没有一个明确的定义，目前大局部学者都以10.0u/l作为肿瘤复发的参考值进展研究。本实验根据np22测量结果建立r曲线，确定以10.0u/l为最适临界值，np22诊断膀胱癌的总体敏感性为63.5%浸润性肿瘤为86.4%，特异性为65.9%。肿瘤具有异质性。正常细胞转化成癌细胞，癌细胞也可以由低级向高级别转化，甚至出现转移等现象，是受许多基因的调控，是一个多阶段和复杂的过程。膀胱癌的发生和开展同样是一个多基因、多因素、互相作用的分子程度的过程。本研究结果显示，k20rna和np22表达在互相作用的关系上，随着肿瘤恶性程度的升高，二者同时增高，在肿瘤的表达上呈正相关，在肿瘤的发生和开展中起协

17、调作用，共同参与了肿瘤的形成机制。所以我们认为，在对膀胱癌进展传统的病理分级、临床分期、尿脱落细胞学检查的根底上，同时进展多基因、多参数、多程度的检测，对更准确判断肿瘤的恶性程度，预测其浸润、复发和判断预后具有重要价值。【参考文献】1abdei，gaadia，ussahs，etal.parativestudyfnp-22，telerase，andbtainthedetetinfbladderaner.jegyptnatlaninst，2022，173:193-202.2kibary，gktass，kilis，etal.prgnstivaluefytlgy，nulearatrixprtein22

18、np22test，andurinarybladderaneriiubiitestinearlyreurrenttransitinalellarinafthebladder.annlinlabsi，2022，361:31-38.3shariatsf，zippe，ludekeg，etal.ngrasinludingnulearatrixprtein22frpreditinfdiseasereurreneandprgressininpatientsithta，t1ristransitinalellarinafthebladder.jurl，2022，1735:1518-1525.4kleina，zeerr，buhuenskyv，etal.expressinfytkeratin20inurinaryytlgyfpat